PI3K/Akt与细胞线粒体途径凋亡因子相关性研究进展

线粒体途径细胞凋亡与多种疾病(如肿瘤、心血管疾病、神经退行性疾病等)密切相关,B淋巴细胞瘤-2(B-cell leukemia-2,Bcl-2)家族蛋白的调控在这些疾病的治疗中起着重要作用。磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/丝/苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine protein kinase Akt)信号通路作为机体细胞信号转导的重要通路,可通过影响下游效应分子(Bcl-x L、Bcl-w、Mcl-1、A1、Bax、Bak、Bim、Bad、Bid等)的活性调节细胞的凋亡。就PI3K/Akt与线粒体途径凋亡相关因子的关联性进行综述,以期发现此通路中某些关键的分子靶点,为凋亡相关性疾病的治疗及药物研发提供参考。

谷氨酰胺体外抑制脂多糖诱导的NCM460细胞线粒体途径凋亡作用的研究

目的探讨谷氨酰胺对小鼠NCM460细胞线粒体凋亡的影响及其机制。方法 对数生长期NCM460细胞分为正常组、脂多糖组、谷氨酰胺组,脂多糖组予以加5 μg/ml的脂多糖,谷氨酰胺组予以加5 μg/ml的脂多糖和12 mmol/L的谷氨酰胺。CO 2培养箱培养24 h后,收集各组细胞,采用Western blotting检测各组细胞Bcl2、Bax及Cyt-c蛋白的表达量,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。结果 Western blotting检测脂多糖组细胞中Bax、Cyt-c蛋白的表达均明显升高( P 均<0.05),Bcl-2蛋白的表达较正常组低,Bcl-2/Bax值较正常组下降;而谷氨酰胺组肠组织中Bax、Cyt-c蛋白的表达均弱于脂多糖组( P 均<0.05),Bcl-2蛋白的表达较脂多糖组高( P <0.05),Bcl-2/Bax值较脂多糖组升高。流式细胞仪检测三组细胞的凋亡率,显示脂多糖组细胞出现大量凋亡,其早期凋亡率及晚期凋亡率均明显高于正常组,差异有统计学意义( P <0.05);谷氨酰胺组细胞的凋亡较脂多糖组减轻,其早期凋亡率及晚期凋亡率均低于脂多糖组,差异有统计学意义( P <0.05)。结论谷氨酰胺能体外抑制脂多糖诱导的NCM460细胞凋亡,可能是通过抑制NCM460细胞线粒体凋亡途径来实现其保护作用。

京尼平通过miR-499调节缺血缺氧诱导心肌细胞线粒体途径凋亡

目的研究京尼平对缺血缺氧诱导心肌细胞线粒体途径凋亡的调节作用及其分子机制。方法培养H9c2细胞并进行分组处理,对照组用不含药物的DMEM在常氧条件下培养,缺氧组用不含药物的DMEM在缺氧条件下培养,低、中、高剂量京尼平组在缺氧条件下分别用含有2.5μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L京尼平的DMEM处理,NC抑制物组在常氧条件下转染NC抑制物,NC抑制物+缺氧组在缺氧条件下转染NC抑制物,NC抑制物+缺氧+京尼平组在缺氧条件下转染NC抑制物并用含有10.0μmol/L京尼平的DMEM处理,miR-499抑制物+缺氧+京尼平组在缺氧条件下转染miR-499抑制物并用含有10.0μmol/L京尼平的DMEM处理。比较组间心肌酶含量、细胞凋亡率、凋亡基因及miR-499表达的差异。结果京尼平组能够以剂量依赖性的方式降低细胞培养基中乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量及细胞凋亡率和细胞中Bax、Caspase-3表达,增加细胞中Bcl-xL及miR-499的表达;转染miR-499的抑制物能够逆转10.0μmol/L京尼平降低细胞培养基中LDH、CK、CK-MB含量及细胞凋亡率、细胞中Bax、Caspase-3表达和增加细胞中Bcl-xL表达的效应。结论京尼平通过miR-499调节缺血缺氧诱导心肌细胞线粒体途径凋亡。

叶酸修饰脂质体槲皮素经JAK2/STAT3信号通路介导的线粒体凋亡途径诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡

目的探讨叶酸修饰脂质体槲皮素对三阴性乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及潜在的调控机制。方法叶酸修饰脂质体槲皮素处理三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231后,CCK-8法检测细胞活力;平板克隆实验检测细胞增殖克隆能力;流式细胞术检测细胞凋亡、细胞活性氧(ROS)水平及线粒体膜电位的变化;Western blot检测酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)-信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达水平。结果叶酸修饰脂质体槲皮素抑制MDA-MB-231细胞增殖(P=0.023)、促进其凋亡(P<0.001),促进MDA-MB-231细胞线粒体膜电位坍塌(P=0.003),提升MDA-MB-231细胞内ROS水平(P=0.034),抑制JAK2和STAT3磷酸化水平(P<0.001),下调抗凋亡蛋白Bcl2、Bcl-xL表达(P=0.037,0.028),上调促凋亡蛋白Bax、Bak、Cyt C、Cleaved-Caspase-3表达(P<0.001)。结论叶酸修饰脂质体槲皮素抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路活化并激活线粒体凋亡途径有关。

丹酚酸B通过线粒体凋亡途径干预动脉粥样硬化的作用机制研究

目的探讨丹酚酸B通过线粒体凋亡途径干预动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的作用机制。方法将小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养后分为空白组,细胞色素C(Cytochrome C,cytC)组,丹酚酸B低、中、高浓度组。各组干预时间均为24h。用噻唑蓝(MTT)实验检测细胞存活率,并用流式细胞仪检测细胞凋亡率。采用蛋白免疫印迹(Western Blotting)法分别检测cytC的释放和B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)、半胱天冬氨酸蛋白酶-9(Cysteinyl aspartate specific proteinase-9,Caspase-9)和Bcl-2相关X蛋白质(Bcl-2-associated X protein,Bax)蛋白表达水平。结果与空白组比较,cyt C组细胞活性降低(P<0.05),细胞平均凋亡率较高(P<0.05);cyt C组中促凋亡蛋白cyt C、Bax、Caspase-3及Caspase-9的表达均升高(P<0.05),抑凋亡蛋白Bcl-2的表达下降(P<0.05)。与cytC组比较,丹酚酸B低、中浓度组细胞活性均上升(P<0.01,P<0.05),各组促凋亡蛋白cytC、Bax、Caspase-3及Caspase-9表达均下降(P<0.01,P<0.05),丹酚酸B中、低浓度组细胞中抑凋亡蛋白Bcl-2的表达升高(P<0.01)。丹酚酸B中、高浓度组与空白组细胞平均凋亡率比较,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论丹酚酸B通过降低cytC、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达抑制cytC诱导的RAW264.7细胞凋亡,发挥在AS发展进程中改善粥样斑块沉积的作用,可能与抑制线粒体凋亡途径相关。

基于线粒体凋亡途径介导的骨骼肌细胞凋亡探究参芪复方对糖尿病骨骼肌病变的干预机制

目的 探讨参芪复方通过调控线粒体凋亡途径介导的骨骼肌细胞凋亡对糖尿病骨骼肌病变的作用。方法 以含5.56 mmol/L葡萄糖(Glucose, Glu)培养基及含25 mmol/L Glu的培养基分别培养L6细胞,模拟正常及糖尿病的生理环境。实验设置6组,为空白组、模型组、参芪复方低剂量组、参芪复方中剂量组、参芪复方高剂量组、罗格列酮组,分别给予含5.56 mmol/L Glu培养基稀释的10%空白血清、含25 mmol/L Glu培养基稀释的10%空白血清、5%参芪复方含药血清、10%参芪复方含药血清、15%参芪复方含药血清、300 ng/mL罗格列酮混悬液进行干预。药物干预24 h后收集细胞,以流式细胞术检测各组细胞凋亡率,以RT-qPCR和Western blot检测各组细胞内B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-xl基因(Bcl-xl)、Bcl-2同源拮抗剂/杀伤剂(Bak)、Bcl-xl/Bcl-2相关死亡启动因子(Bad)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt c)、第二个线粒体来源的胱氨酸酶激活剂/低等电点IAP直接结合蛋白(Smac/Diablo)、细胞凋亡诱导因子(AIF)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的基因与蛋白表达水平。结果 与空白组相比,模型组细胞凋亡率显著升高(P<0.05),细胞内Bak、Bax、Cyt c、Smac/Diablo、AIF、Caspase-3、Caspase-9的基因与蛋白表达显著增加(P<0.05),Bad蛋白表达显著增加(P<0.05),Bcl-2的基因与蛋白表达显著降低(P<0.05),Bcl-xl基因表达显著降低(P<0.05);与模型组相比,参芪复方组Bak、Bax、Caspase-9、Caspase-3的基因与蛋白表达显著降低(P<0.05),Bad、Cyt c、Smac/Diablo的蛋白表达显著降低,Bcl-2、Bcl-xl的基因与蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论 参芪复方糖尿病骨骼肌病变的干预作用可能是通过调控线粒体凋亡途径,降低高糖环境下骨骼肌细胞凋亡率来实现的。

去氢骆驼蓬碱对细粒棘球蚴的线粒体Drp1、Mfn2蛋白表达以及线粒体途径凋亡的影响

目的 探讨去氢骆驼蓬碱对细粒棘球蚴的线粒体Drp1、Mfn2蛋白表达以及线粒体途径凋亡的影响。方法 无菌采集细粒棘球蚴,随机分为空白对照组4个不同药物干预组。共干预5 d,采用亚甲蓝拒染试验观察细粒棘球蚴存活率,采用活性氧试剂盒检测ROS生成水平,结合Mito-Tracker Red CMXRos、Mito-Tracker Green荧光探针染色技术及JC-1染色技术综合检测线粒体膜电位和线粒体损伤情况,Western blot法检测细粒棘球蚴融合分裂蛋白Drp1、Mfn2、凋亡蛋白Bcl-2、Cyt-C表达水平变化。结果 与空白对照组相比,25μg/mLABZSO组、25μg/mLHM组、12.5μg/mLMdivi-1组、HM:Mdivi-1组(25μg/mL:12.5μg/mL)细粒棘球蚴平均存活率显著降低(P<0.05或P<0.01)。与阳性药组相比,HM:Mdivi-1组(25μg/mL:12.5μg/mL)细粒棘球蚴平均存活率显著降低(P<0.05)。ROS试验显示,各干预组平均荧光强度与空白对照组相比均增强(均P<0.01)。Mito-Tracker Red CMXRos、Mito-Tracker Green试验显示,随着药物干预每组平均荧光强度均较空白对照组显著降低(均P<0.01)。JC-1染色显示,阳性对照组和药物组绿色荧光增强。Western blot显示,各给药组Drp1蛋白水平与空白对照组相比均呈上调趋势(均P<0.01),Mdivi-1组呈下降趋势(P<0.01);Mfn2蛋白均呈下调趋势(P<0.05或P<0.01);Cyt-C蛋白均呈上调趋势(P<0.05或P<0.01),Mdivi-1组呈下降趋势(P<0.01);Bcl-2蛋白均呈下调趋势(均P<0.01),Mdivi-1组呈上降趋势(P<0.01)。结论 去氢骆驼蓬碱通过线粒体途径使细粒棘球蚴凋亡,线粒体分裂蛋白Drp1和融合蛋白Mfn2的表达证实存在线粒体融合分裂机制。

黑磷纳米片通过线粒体途径介导三阴性乳腺癌细胞凋亡的研究

目的探讨聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)修饰的黑磷纳米片(black phosphorus nanosheets,BPNS)对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)MDA-MB-231和4T1细胞凋亡的影响及生物学机制。方法通过液相剥离方法制备BPNS,再经PEG修饰获得BP-PEG。利用透射电子显微镜、动态光散射对BPNS和BP-PEG进行表征。通过紫外-可见吸收光谱及透射电子显微镜评估两者在超纯水中的稳定性。利用乳酸脱氢酶细胞毒性法,检测BP-PEG对鼠源和人源的正常和肿瘤细胞活力的影响;采用γ-H2AX免疫荧光染色检测肿瘤细胞DNA损伤的情况;通过细胞流式术检测细胞凋亡情况;利用JC-1染色检验肿瘤细胞线粒体膜电位变化情况;Western blot检测BP-PEG对Cyt c、Bcl-2和Bax等线粒体凋亡相关蛋白表达水平的影响。结果BPNS为层状纳米结构,PEG修饰后平均直径和电位略有增加,并且可有效提高BPNS的稳定。BP-PEG浓度为50μg/ml范围内表现出对肿瘤细胞良好的杀伤活性。BP-PEG可造成TNBC细胞DNA损伤并促进细胞凋亡,引起线粒体膜电位Δψm下降,可显著上调Cyt c和Bax并降低Bcl2的表达水平。结论BPPEG可通过线粒体凋亡途径有效促进TNBC细胞凋亡,并对正常细胞表现出较好的应用安全性,其可能成为一个潜在的肿瘤治疗药物。

异乌药内酯通过ROS介导的线粒体凋亡途径诱导A549细胞凋亡的研究

为探究异乌药内酯诱导细胞内活性氧的产生在介导线粒体凋亡途径中的作用及对肺癌A549细胞凋亡的影响,将A549细胞分为对照组(DMSO)、异乌药内酯处理组(15μmol/L)、抗氧化剂NAC组(3 mmol/L)和异乌药内酯联合NAC处理组(Isolinderalactone 15μmol/L+NAC 3 mmol/L)进行实验。采用CCK-8方法检测细胞活性,通过流式细胞术检测细胞凋亡情况,DCFH-DA法检测A549细胞内活性氧水平变化,JC-1染色后流式细胞术检测细胞内线粒体膜电位,Western blot方法检测细胞内线粒体凋亡通路相关关键蛋白表达的变化。结果表明:异乌药内酯能抑制肺癌A549细胞生长并诱导细胞凋亡,促进ROS积累,线粒体膜显著去极化,上调促凋亡蛋白Bax表达水平而下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平。抗氧化剂NAC与异乌药内酯联合作用后,与异乌药内酯单独处理组相比,以上各方面的变化水平都呈现出不同程度的下降。异乌药内酯能通过诱导细胞内活性氧积累,激活线粒体凋亡途径从而促进A549细胞发生凋亡。

白术多糖通过调控线粒体凋亡途径诱导人子宫内膜癌RL95-2细胞凋亡

目的:探讨白术多糖(PAM)对人子宫内膜癌RL95-2细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:预实验选取梯度浓度(0、7.5、15、30、60、120、240 mg/ml)的PAM作用于RL95-2细胞,MTT比色法检测细胞增殖活性,Bliss法计算24 h、48 h和72 h的半数抑制浓度(IC50)。正式实验中将RL95-2细胞分为空白对照组和不同浓度(15、30、60 mg/ml)PAM处理组。共培养48 h后,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化;Western blot检测细胞线粒体和细胞质中细胞色素C(Cyt C)蛋白水平差异;分光光度法检测细胞中半胱天冬酶9(Caspase9)活性;Western blot检测线粒体凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax和cleaved-Caspase3)表达水平。结果:PAM可降低RL95-2细胞的增殖率,与药物浓度和作用时间有关。与空白对照组相比,PAM处理组细胞凋亡率显著增加(均P<0.01);线粒体膜电位及Cyt C蛋白表达显著降低(均P<0.05),但细胞质中Cyt C蛋白表达显著增加(P<0.01);细胞中Caspase9活性显著增强(均P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(均P<0.05),而Bax和cleaved-Caspase3蛋白水平显著提高(均P<0.01)。结论:白术多糖可能通过激活线粒体凋亡途径促进RL95-2细胞凋亡。

冬虫夏草对糖尿病对比剂肾病大鼠肾细胞中线粒体凋亡途径的影响

目的:探讨冬虫夏草对糖尿病对比剂肾病(contrast-induced nephropathy, CIN)大鼠肾细胞中线粒体凋亡途径的影响。方法:大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,各组大鼠分别给予相应剂量冬虫夏草和生理盐水灌胃连续7 d,第8天大鼠经尾静脉注射碘克沙醇建立CIN模型,收集标本测定BUN、Scr、NGAL、KIM-1、NO、SOD、MDA和T-AOC,荧光定量PCR和WB法检测Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2基因和蛋白水平,Tunel法检测肾细胞凋亡情况,HE染色法观察肾组织病理变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠BUN、Scr、NGAL、KIM-1和MDA水平升高、NO、SOD和T-AOC水平降低,Caspase-3、9和Bax表达升高、Bcl-2及Bcl-2/Bax比值降低,肾凋亡细胞明显增多;肾细胞出现空泡、坏死等表现。与模型组比较,低剂量组Scr和MDA含量降低,Caspase-3和Bax表达降低,而Bcl-2和Bcl-2/Bax比值升高,中、高剂量组Scr、BUN、NGAL、KIM-1和MDA水平降低、NO和SOD含量升高,Caspase-3、9和Bax表达降低、Bcl-2与Bcl-2/Bax比值均升高,高剂量组大鼠肾凋亡细胞明显减少,且肾小管病理性改变减少。结论:冬虫夏草可增强糖尿病CIN大鼠抗氧化应激能力,调控线粒体凋亡途径,减少肾细胞凋亡,保护肾损伤,高剂量冬虫夏草疗效更佳。

基于线粒体凋亡途径探讨纳达合剂的胃黏膜保护作用机制

目的:本实验旨在观察纳达合剂对胆汁反流性胃炎大鼠胃黏膜保护作用的分子机制。方法:利用大鼠胆汁反流性胃炎模型,将60只大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、纳达低、中、高剂量组和麦滋林组各10只。通过HE染色观察大鼠胃黏膜病理变化,JC-1染色检测线粒体膜电位变化,化学发光法检测胃黏膜ATP含量变化,Tunel法检测胃黏膜上皮细胞凋亡情况,Western blotting方法检测胃黏膜Bax、p-Bcl-2、Bcl-2、caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-9、cleaved-caspase-9片段的表达。结果:纳达合剂可显著保护大鼠胃黏膜受损,并能显著提高胃黏膜ATP含量,虽能使线粒体膜电位水平有所升高,但差异无统计学意义。纳达合剂能够显著减少胃黏膜上皮细胞凋亡率,提高胃黏膜p-Bcl-2的表达,降低Bax、cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9的表达,且p-Bcl-2/Bax比值显著增加。结论:纳达合剂保护胃黏膜的作用可能与其抑制线粒体凋亡途径有关。

Survivin抑制剂YM155对视网膜母细胞瘤Y79细胞线粒体凋亡途径的影响

目的:探讨人生存素(survivin)抑制剂YM155{4,9-二氢-1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基-4,9-二氧代-3-(2-吡嗪甲基)-1H-萘并[2,3-d]咪唑鎓溴化物}对视网膜母细胞瘤Y79细胞凋亡、线粒体膜电位(△ψ_m)和细胞色素C(Cyt C)的影响,探讨其诱导Y79细胞凋亡的线粒体机制。方法:体外培养Y79细胞,分别以0、0.5、1、2、4、8nmol/L的YM155进行处理,采用CCK-8法和溴脱氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine,BrdU)掺入标记法检测YM155对Y79细胞增殖的抑制作用。Y79细胞随机分为4组:对照组、阳性对照组[加入10nmol/L拓扑替康(topotecan)]和低剂量(1 nmol/L)、高剂量(2 nmol/L)YM155组。每组设3个复孔,处理24h。分别采用TUNEL染色和Annexin V-FITC/PI双染法检测凋亡的情况;采用JC-1活细胞染色检测△ψ_m的变化;采用免疫荧光分析检测Cyt C的分布;采用Western blot法检测survivin和线粒体内Cyt C的蛋白表达。结果:与对照组比较,YM155对Y79细胞增殖具有明显抑制作用,并诱导Y79细胞凋亡(P<0.05);YM155显著降低Y79细胞的△ψ_m,促进Cyt C由线粒体释放至胞浆,降低线粒体内Cyt C的水平(P<0.05)。结论:YM155对Y79细胞增殖具有抑制作用,并诱导细胞凋亡其机制可能是通过线粒体介导的细胞凋亡途径实现的。

黄芩素通过抑制线粒体凋亡途径和p38MAPK通路保护人黑素细胞抵抗H_2O_2诱导的细胞凋亡

应用抗氧化剂清除体内过多的H202已被证实对白癜风患者治疗有益。黄芩素作为一种具有抗氧化活性的中药单体已经应用于白癜风的中医治疗中。我们的实验明确了黄芩素在保护人黑素细胞抵抗H202诱导的细胞凋亡中的保护效果并探讨了其潜在的作用机制。

柚皮苷对地塞米松诱导的小鼠MC3T3-E1细胞凋亡及线粒体凋亡途径的影响

目的探讨柚皮苷对地塞米松诱导下MC3T3-E1细胞增殖、凋亡的影响及可能的分子机制。方法体外培养小鼠MC3T3-E1细胞,实验分5组:空白对照组(NC)、地塞米松组(DEX)、1μmol/L柚皮苷+地塞米松组(1+DEX)、10μmol/L柚皮苷+地塞米松组(10+DEX)和50μmol/L柚皮苷+地塞米松组(50+DEX)。药物干预后,采用CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞技术检测各实验组细胞凋亡情况;q PCR法检测线粒体凋亡通路相关基因Apaf-1、Caspase-9 mRNA相对表达量;Western blot法检测细胞色素C(Cyt-C)及Cleaved-caspase-9蛋白表达。结果与NC组相比,地塞米松组细胞增殖受到抑制(P<0.05),而不同浓度的柚皮苷以剂量依赖方式促进细胞增殖(P<0.05)。流式细胞技术检测结果显示,DEX组细胞早期凋亡率增加(P<0.05),而同时加柚皮苷干预组细胞凋亡率与DEX组相比明显减少(P<0.05)。q PCR结果显示,DEX组Apaf-1、Caspase-9 mRNA表达升高(P<0.05),而同时加柚皮苷干预组Apaf-1、Caspase-9 mRNA表达下降。WB结果显示DEX组Cyt-C、Cleaved-Caspase-9表达量增高(P<0.05)。相反,同时加柚皮苷干预组Cyt-C及Cleaved-Caspase-9表达量减少(P<0.05)。结论柚皮苷可以抑制地塞米松诱导的小鼠MC3T3-E1细胞凋亡,其机制可能与下调线粒体凋亡途径中Cyt-C、Apaf-1凋亡酶激活因子的表达,抑制Caspase-9凋亡蛋白的激活有关。

氯化两面针碱通过细胞色素c介导的线粒体凋亡途径诱导人结肠癌HT29细胞凋亡

目的:初步探讨氯化两面针碱(NC)对人结肠癌HT29细胞凋亡的影响及其机制。方法:将HT29细胞分为溶剂对照组、15μmol/L NC组、30μmol/L NC组和60μmol/L NC组,采用CCK-8法检测NC对细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡,western blotting法检测细胞色素c(Cyt-c)和caspase-3蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,各NC实验组的细胞存活率显著降低,凋亡率显著升高,15μmol/L NC组、30μmol/L NC组和60μmol/L NC组细胞凋亡率分别为(35.30±14.30)%、(41.48±17.89)%和(46.51±11.35)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,不同浓度NC组Cyt-c和caspase-3蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论:NC能够显著抑制人结肠癌HT29细胞的增殖,诱导HT29细胞凋亡,其分子机制可能与Cyt-c介导的线粒体凋亡途径有关。

线粒体凋亡途径在玉米赤霉烯酮致大鼠睾丸支持细胞凋亡中的作用

为探讨玉米赤霉烯酮(zearalenon,ZEA)雄性生殖毒性作用机理,研究ZEA诱导大鼠睾丸支持细胞(sertoli cell,SC)的凋亡途径,试验选取大鼠原代SC为研究材料,用不同浓度ZEA(0、5、10、20μmol/L)处理SC 24 h后,采用实时荧光定量PCR法检测Bax和Bcl-2 mRNA表达水平;用Western blotting法检测Bax、Bcl-2等线粒体凋亡途径相关蛋白表达;同时检测了20μmol/L ZEA联合Caspase-8抑制剂(Z-IETD-FMK)处理对SC凋亡率和线粒体凋亡相关蛋白的影响。结果显示,与对照组相比,20μmol/L ZEA组细胞Bcl-2转录水平显著下降(P<0.05),Bax转录水平显著上升(P<0.05);10、20μmol/L ZEA组Bax/Bcl-2比值及Cyto-CytC、Cleaved Caspase-9、Cleaved Caspase-3表达量极显著上升(P<0.01),而Mito-CytC表达量极显著下降(P<0.01);与ZEA组相比,ZEA与Z-IETD-FMK联合处理可使ZEA诱导的SC凋亡率极显著下降(P<0.01),tBid/Bid、Bax/Bcl-2、Cyto-CytC、Cleaved-Caspase3、Cleaved-Caspase9蛋白表达显著或极显著下降(P<0.05;P<0.01),而Mito-CytC表达量极显著上升(P<0.01)。综合试验结果,ZEA能够通过线粒体途径诱导大鼠SC发生凋亡。

α-维尼非林经线粒体凋亡途径诱导K562细胞凋亡

目的旨在研究α-维尼非林（α-viniferin）对人慢性髓系白血病细胞K562的作用与相关机制。方法 MTT法评价α-viniferin对K562细胞的细胞毒活性。采用细胞形态学和生物化学方法检测细胞凋亡。通过化学荧光法对细胞内线粒体膜电位、caspase-9、caspase-3活性分析。通过半定量RT-PCR表达分析来确定Bcl-2家族相关基因在α-viniferin诱导K562细胞凋亡中的作用。结果α-viniferin能抑制K562细胞增殖,呈剂量和时间依赖性, IC50为13.61 mg · L-1。α-viniferin引起K562细胞出现死亡并伴随有染色质聚集、核破碎、凋亡小体等典型的凋亡形态学特征；此外还伴随有线粒体膜电位显著降低,caspase-9、caspase-3活性升高等现象；α-viniferin（2~32 mg·L-1）引起K562细胞caspase-3 mRNA表达持续升高,Bax、Bad、Bim、Bid促凋亡基因mRNA表达增加,而Bcl-2、Bcl-xL抗凋亡基因mRNA表达持续下降。结论α-viniferin通过线粒体途径诱导K562细胞凋亡。

西达本胺通过线粒体凋亡途径诱导结肠癌HCT-15细胞凋亡

研究西达本胺(Chidamide)对结肠癌细胞系HCT-15的增殖抑制作用及机制.以不同浓度西达本胺处理HCT-15细胞,CCK-8法检测细胞增殖情况及细胞的药物敏感性;平板克隆形成实验检测细胞体外克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡;EdU实验检测细胞增殖周期;Western blot检测乙酰化组蛋白、线粒体凋亡途径相关蛋白、细胞周期相关蛋白表达水平的变化.结果表明:西达本胺抑制HCT-15细胞增殖呈浓度和时间依赖性,细胞体外克隆形成能力减弱,凋亡增多,细胞分裂相明显减少、总周期变慢,乙酰化组蛋白H3和H4、线粒体介导的相关凋亡蛋白表达上调、p21、p27表达上调、CDK2、CyclinA2蛋白表达下调.西达本胺可抑制HCT-15细胞增殖,通过线粒体途径诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期.

益气解毒方水提物通过线粒体途径诱导鼻咽癌干细胞凋亡（英文）

目的研究益气解毒方(YQJDD)水提物对鼻咽癌干细胞(NPC-SCs)增殖和凋亡的影响及机制。方法采用无血清悬浮培养法分离培养NPC-SCs,成球实验鉴定NPC-SCs;CCK-8法检测YQJDD对NPC-SCs细胞增殖的影响;JC-1染色法分析YQJDD对NPC-SCs线粒体膜电位的影响;Western blot检测凋亡相关蛋白(cleaved caspase 3、7、8、9、cleaved PARP、P21、P53、Survivin)的表达。结果YQJDD可抑制NPC-SCs的增殖,且随着药物处理时间和浓度的增加,抑制效果增强(P<0.05);YQJDD可降低NPC-SCs细胞线粒体膜电位,诱导细胞凋亡;YQJDD可提高NPC-SCs细胞中cleaved caspase 3、7、9、cleaved PARP、P21、P53的表达,降低Survivin的表达,但对cleaved caspase 8的表达没有影响。结论YQJDD可通过线粒体凋亡途径诱导NPC-SCs细胞凋亡,抑制细胞增殖。