西瑞香素通过介导巨噬细胞向M2极化对鼻咽癌大鼠线粒体通路的影响

目的探究西瑞香素通过介导巨噬细胞向M2极化对鼻咽癌大鼠线粒体通路的影响。方法选取40只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(N)组、模型(M)组、盐酸千金藤碱(C)组、西瑞香素(W)组,每组10只,对M、C、W组采用腋部皮下注射诱癌剂进行鼻咽癌建模,N组不建立该模型,建模成功后,对C组灌胃15 mg/kg的盐酸千金藤碱,对W组灌胃24 mg/kg的西瑞香素,N组、M组同期给予灌胃同体积生理盐水,将体外培养后的巨噬细胞分为两组,加入磷酸盐缓冲液记为A组,加入西瑞香素记为B组。苏木素-伊红(HE)染色法检测鼻咽组织病理形态,RT-聚合酶链反应(PCR)法检测线粒体通路相关指标,采用末端脱氧核苷酸标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,Western印迹法检测肝组织巨噬细胞中CD68、CD163蛋白表达。结果N组鼻咽组织细胞层次清晰且大小均匀,排列整齐;M组细胞层次变多,细胞形态及排列均不整齐,可见多细胞核且染色明显变深,出现大量鳞状上皮增生及炎性细胞浸润,而C、W组症状明显改善,且W组比C组改善明显。与N组比较,M组细胞凋亡明显降低(P<0.05);与M组比较,C、W组细胞凋亡率均明显升高,但与C组相比,W组细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与N组比较,M组鼻咽组织中Bcl-2 mRNA表达显著升高,Bax、Cyto-C mRNA表达显著降低(P<0.05);与M组比较,C、W组鼻咽组织中Bcl-2 mRNA表达显著降低,Bax、Cyto-C mRNA表达明显升高(P<0.05),且W组比C组变化显著。与N组比较,M组鼻咽组织巨噬细胞中CD68蛋白表达显著降低,CD163蛋白表达显著升高(P<0.05);与M组比较,C、W组鼻咽组织巨噬细胞中CD68蛋白表达显著升高,CD163蛋白表达显著降低(P<0.05),且W组比C组变化显著;与A组相比,B组CD68蛋白表达显著增加,CD163蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论西瑞香素可影响大鼠线粒体通路表达,促进鼻咽癌细胞凋亡,其作用机制可能与抑制巨噬细胞向M2极化有关。

线粒体通路和死亡受体通路在中华眼镜蛇毒组分诱导KG1a细胞凋亡中的作用

目的研究线粒体通路和死亡受体通路在中华眼镜蛇毒组分(naja naja actra venom component,NNAVC)诱导KG1a细胞凋亡过程中的作用。方法以人急性髓系白血病细胞株KG1a细胞为研究对象,采用Annexin V-FITC/PI荧光染色法进行凋亡细胞的形态学观察,流式细胞仪检测细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3的活性,ELISA法检测胞质内细胞色素C的表达水平,流式细胞仪分析TRAIL死亡受体(DR4、DR5)和诱骗受体(DcR1、DcR2)的改变。结果 NNAVC作用后,荧光显微镜下可见明显的凋亡细胞,细胞凋亡率随药物作用浓度的增加而升高;Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3蛋白被激活,胞质内细胞色素C的表达明显增加;流式细胞仪检测结果显示,NNAVC具有降低死亡受体DR4和诱骗受体DcR1的表达率,而提高DR5和DcR2的表达水平的作用。结论线粒体凋亡通路和死亡受体通路均参与NNAVC诱导KG1a细胞凋亡的过程,这可能是NNAVC发挥抗白血病作用的机制之一。

纳秒级电场脉冲诱导肿瘤细胞凋亡的线粒体通路研究

将纳秒级电场脉冲作用于人卵巢癌(SKOV3)细胞,通过流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)、线粒体跨膜电位(MTMP)的变化情况,用免疫荧光法检测线粒体膜间隙凋亡相关蛋白释放情况;用Western blot法检测线粒体膜间隙凋亡相关蛋白表达及活化情况,以研究纳秒级电场脉冲诱导肿瘤细胞凋亡的线粒体通路。实验发现:经纳秒级电场脉冲处理后,细胞活性氧即刻升高,且线粒体跨膜电位在6 h时达到最低值;线粒体膜间隙蛋白释放入胞浆(P<0.05);线粒体凋亡通路相关蛋白表达量也明显升高(P<0.05)。结果表明,在纳秒级电场脉冲诱导的肿瘤细胞凋亡中,线粒体凋亡通路参与并发挥了重要作用。

BARF1表达下调通过活化caspase依赖的线粒体通路诱导EBV阳性胃癌细胞凋亡

目的:研究BARF1表达下调对EBV阳性胃癌细胞凋亡的影响,以及BARF1基因沉默介导细胞凋亡的分子机制。方法:siRNA和NCsiRNA分别转染NUGC3和SNU719细胞,运用Western blot测定细胞中BARF1、Bcl-2、Bax、细胞色素C、caspase 3和caspase 9的蛋白表达;RT-PCR测定BARF1、Bcl-2和Bax mRNA的表达;台盼蓝染色法测定细胞存活率;Annexin V-FITC/PI染色法和流式细胞仪测定细胞凋亡;细胞凋亡因子抗体芯片分析细胞中凋亡相关蛋白的表达;线粒体膜电位检测试剂盒测定线粒体膜电位;免疫共沉淀检测细胞中Apaf-1和caspase 9的相互作用。结果:与空白对照组和阴性对照组相比,BARF1基因沉默显著诱导NUGC3和SNU719细胞凋亡,而线粒体膜电位显著降低。BARF1沉默基因能促进促凋亡蛋白的表达并抑制抗凋亡蛋白的表达,Bcl-2/Bax比例显著降低;而caspase抑制剂能抑制由BARF1基因沉默介导的细胞凋亡。在siRNA转染的细胞中,caspase 3和caspase 9蛋白发生裂解,细胞色素C的浓度显著高于阴性对照组,Apaf-1蛋白与caspase 9蛋白在细胞质中能够发生相互作用。结论:BARF1基因沉默通过线粒体途径调节Bcl-2和Bax蛋白的表达进而诱导NUGC3和SNU719细胞凋亡,并呈caspase通路依赖关系。

线粒体通路、氧化应激在肝脏缺血再灌注损伤细胞凋亡中作用机制的研究进展

在肝脏缺血再灌注损伤导致的细胞凋亡过程中,线粒体通路和氧化应激是两条非常重要的机制。当肝脏发生缺血再灌注时,线粒体通透性转换孔的开放、细胞凋亡相关蛋白的释放以及B淋巴细胞瘤-2基因家族蛋白的调控作用共同组成线粒体通路,导致细胞凋亡;氧化应激则通过脂质过氧化、内质网应激、氧化应激调节分子表达变化等途径在肝脏缺血再灌注损伤细胞凋亡中发挥作用。

地黄饮子对快速老化小鼠SAMP8线粒体通路细胞凋亡的影响

目的:研究地黄饮子对快速老化小鼠P8线粒体通路细胞凋亡的影响,探讨其治疗AD的药效及作用机制。方法:运用RT-PCR检测地黄饮子对SAMP8小鼠Caspase-3、Caspase-9、Apaf-1基因mRNA表达的影响,观察小鼠细胞凋亡情况。结果:地黄饮子能下调海马Caspase-3mRNA、Caspase-9mRNA、Apaf-1mRNA的表达,且均有统计学意义。结论:地黄饮子可通过对细胞凋亡的线粒体途径的影响,抑制促凋亡基因,减少神经元的丢失,从而改善学习记忆能力。

细胞凋亡的线粒体通路

Mitochondria are the bioenergetics and metabolic center of eucaryotic cells that carry out many important functions to sustain life. Recent biochemical studies revealed another aspect of mitochondrial function: inducing apoptosis by triggering specific biochemical reactions that lead to rapid disposal of damaged cells. In response to a variety of apoptotic stimuli, mitochondria release many apoptogenic proteins that normally reside in the intermembrane space of mitochondria. These studies suggest that mitochondria are dynamic responsive structures engaged incessantly in controlling metabolic and genetic interaction with other cellular organelles. Consequently, when cellular milieu is no longer conducive to maintaining homeostasis, either due to injury or developmental cues, mitochondria initiate apoptotic programs that efficiently demise the cell.

苦参碱通过线粒体通路诱导HepG2细胞凋亡的机制研究

目的探讨苦参碱通过线粒体通路诱导Hep G2发生凋亡的机制。方法分别采用MTT法、PI染色法、流式细胞术检测苦参碱对肝癌Hep G2细胞的增殖抑制、周期调控、诱导凋亡作用;采用Western Blot检测苦参碱诱导肝癌Hep G2细胞抑凋亡蛋白Bid、Bcl-2的表达量。结果苦参碱可抑制Hep G2细胞的增殖作用和诱导凋亡,呈时间和剂量依赖性,并可将Hep G2细胞周期阻滞在G0/G1期。苦参碱可引起线粒体膜电位崩溃,同时诱导Bid、Bcl-2表达下调,Bax表达上调。结论苦参碱通过调节细胞内Bid、Bcl-2和Bax蛋白的表达,经线粒体信号转导途径诱导人肝癌细胞系Hep G2发生凋亡。

针灸防治心肌缺血再灌注损伤的线粒体通路研究进展

目的:探讨针灸防治心肌缺血再灌注损伤的线粒体细胞信号转导机制,为后续研究提供思路。方法:通过对近年来国内外有关线粒体心脏损伤的研究入手,分析针灸防治心肌缺血再灌注损伤的线粒体通路的研究进展。结果:研究多以大鼠为观察对象,主要从针刺改善线粒体功能,减少线粒体活性氧类(ROS)产生过量引起氧化应激,防止细胞内Ca2+超载和阻止线粒体通透性转换孔(m PTP)的开放等角度切入研究。结论:微小RNA(microRNA,miRNA)是基因网络、蛋白网络、代谢网络等的上游网络的调控环节。鉴于针灸作用的整体性特点,将miRNA引入针灸作用机制研究领域,可在基因或其他水平层面更好地揭示针灸作用机制。

没食子酸通过活化线粒体通路诱导CNE-2鼻咽癌移植瘤细胞的凋亡

目的:观察不同浓度的没食子酸(gallic acid,GA)对鼻咽癌移植荷瘤裸鼠的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:建立人鼻咽癌CNE-2细胞株荷瘤裸鼠移植性肿瘤模型,随机分为6组:正常对照组(control,con组),模型组(nasopharynx cancer,NPC组),没食子酸10,20,40μg/kg组(GA-10μg/kg,GA-20μg/kg,GA-40μg/kg)和阳性对照组(顺铂,DDP组);经相应处理后,处死裸鼠,测量瘤体积,称量瘤体重量并计算抑瘤率;流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡率;Western印迹检测肿瘤细胞中cytochrome C(Cyt C)、cleaved-cas 9,cleaved-cas 3与cleaved-PARP的蛋白表达水平。结果:与NPC组相比,给予GA后瘤体体积与重量随其浓度升高而减小,抑瘤率与肿瘤细胞凋亡率增大;与NPC组相比,肿瘤细胞线粒体中Cyt C的蛋白表达随GA浓度增加而减少,胞质中CytC的蛋白表达则相反,细胞中cleaved-cas 9,cleaved-cas 3与cleaved-PARP的蛋白水平显著增加,与GA浓度呈正相关。结论:没食子酸可能通过调控线粒体通路诱导鼻咽癌移植瘤细胞的凋亡。

瘦素预处理经线粒体通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的探讨在SD大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中瘦素预处理经线粒体信号通路对机体的影响及相关机制。方法选取健康雄性成年SD大鼠50只,随机分为缺血再灌注(IR)模型对照组(模型组,线栓法制作大鼠IR模型)、假手术组(仅开胸不作血管结扎)、IR瘦素预处理低、中、高剂量(20、50、100μg/kg)共5组,每组10只。各组大鼠经缺血半小时再灌注24 h,观察心肌HE染色病理形态学变化;ELISA法检测血清中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和线粒体通透性转换孔(mPTP)的含量;Western blot法检测凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、凋亡相关基因(Bax)的表达。结果与模型组比较,假手术组及瘦素预处理组心肌病理学表现减轻,IL-6、TNF-α、mPTP及Bax表达显著降低(P<0.05),1e:1-2在瘦素预处理组中表达显著增高,且在瘦素高刺量组中表达最高(P<0.05),均无明显剂量依赖性。结论瘦素可缓解MIRI的炎症反应及mPTP的开放,并促进线粒体通路相关蛋白Bcl-2上调,使Bax蛋白的表达下调,从而保护心肌细胞减轻损伤。

山茱萸总苷干预急性缺氧乳鼠心肌细胞凋亡线粒体通路的研究

目的探讨山茱萸总苷对急性缺氧乳鼠心肌细胞凋亡线粒体通路的影响。方法原代培养乳鼠的心肌细胞,采用液状石蜡封闭法建立缺血缺氧模型,并将原代培养3 d的心肌细胞分为正常组、缺氧组(1 h、2 h、3 h、5 h)及药物治疗组,药物浓度采用生药10 g/L,免疫组化法检测各组caspase-9表达。结果与对照组相比,缺氧各组caspase-9表达增加,差异有统计学意义(P<0.01),并且随着时间延长,阳性表达的比例增加,5 h达到最高,给予山茱萸总苷干预之后,治疗组各个时间点caspase-9表达都有所下降,与缺氧组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论山茱萸总苷可以抑制caspase-9表达,通过阻断心肌细胞凋亡线粒体通路达到对心肌细胞的保护作用。

下调FoxM1通过激活JNK/线粒体通路增加人鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感性

目的探讨特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默转录因子叉头框M1(FoxM1)对人鼻咽癌HONE-1细胞增殖、凋亡、紫杉醇敏感性的影响及可能的分子机制。方法采用siRNA靶向沉默鼻咽癌HONE-1细胞FoxM1表达并通过RT-PCR、实时定量PCR、Western blot检测转染后FoxM1的表达水平。siRNA转染后细胞的增殖和对紫杉醇的敏感性采用MTT法检测,流式细胞仪检测细胞周期分布,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率。Western blot检测Ki67、CyclinE1、多药耐药基因1(multidrug resistance 1,MDR1)及c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、p-JNK、c-Jun、p-c-Jun、凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平。结果转染后FoxM1 mRNA及蛋白的表达均被下调(P<0.01)。siRNA转染组细胞增殖速率减缓(P<0.05),Ki67表达降低(P<0.05)。siRNA转染组G_1期细胞比例增加(P<0.01),S期比例减低(P<0.05),CyclinE1低表达(P<0.01)。同时,siRNA+紫杉醇组凋亡率明显高于阴性及空白对照+紫杉醇组(P<0.01)。siRNA转染组细胞MDR1水平下降(P<0.05),对紫杉醇的敏感性较两对照组明显增强(P<0.01)。siRNA+紫杉醇组与阴性对照+紫杉醇组相比p-JNK1、p-c-Jun、Bax表达上调(P<0.01),Bcl-2表达下调(P<0.01)。结论特异性siRNA沉默FoxM1表达可以影响JNK/线粒体通路活性,抑制鼻咽癌HONE-1细胞增殖,促进其凋亡,提高其对紫杉醇的敏感性。

肝X受体通过线粒体通路调控高糖诱导的H9C2细胞凋亡

目的探讨高糖环境中肝X受体通过线粒体途径在调控H9C2细胞凋亡过程中的作用。方法以H9C2细胞为研究对象,分为低糖组(Control组)、甘露醇组、高糖组、高糖+T0901317组及高糖+5CPPSS-50组。检测各组H9C2细胞的活性,细胞内活性氧水平,Bax、Bcl-2 m RNA,cleaved caspase-3蛋白的表达及细胞凋亡率,并观察细胞线粒体膜电位变化。结果表达LXRs组明显降低高糖诱导的Bax m RNA、激活型caspase3蛋白表达和细胞内活性氧水平;上调高糖抑制的Bcl-2 m RNA表达和线粒体膜电位。结论 LXRs激动剂T0901317可改善高糖环境中H9C2细胞活性,抑制细胞凋亡,对细胞起到一定的保护作用;抑制LXRs后,对高糖环境中H9C2细胞损伤作用更明显。LXRs可通过线粒体途径调控高糖环境所致H9C2细胞凋亡。

白术多糖对环磷酰胺致雏鸡肝脏细胞凋亡中线粒体通路的影响

试验旨在从线粒体介导的细胞凋亡通路,探讨白术多糖(PAMK)对环磷酰胺(CTX)诱导的雏鸡肝脏损伤的影响。试验选取1日龄岭南黄鸡240羽,随机分成4组:对照(Control)、环磷酰胺(CTX)、白术多糖(PAMK)以及白术多糖环磷酰胺联合组(PAMK+CTX)。试验结束后,采集雏鸡肝脏组织,用于形态学观察及线粒体介导的细胞凋亡通路相关基因mRNA表达量和蛋白表达水平检测。光镜结果显示,环磷酰胺诱导雏鸡肝脏组织细胞形态结构不完整、肝细胞索排列紊乱、空泡化。电镜结果显示,环磷酰胺可导致雏鸡肝脏组织细胞线粒体明显受损,并发生细胞凋亡。从分子水平探讨线粒体介导的细胞凋亡通路结果显示,环磷酰胺可导致雏鸡肝脏组织中促凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax和p53 mRNA表达量显著升高(P<0.05),抑凋亡基因Bcl-2mRNA表达量显著降低(P<0.05)。白术多糖环磷酰胺联合组雏鸡肝脏组织中Caspase-3、Caspase-8、Bax的mRNA表达量显著降低(P<0.05),Bcl-2 mRNA表达量显著升高(P<0.05)。此外,白术多糖环磷酰胺联合组雏鸡肝脏组织中Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。研究结果表明,环磷酰胺可诱导雏鸡肝细胞凋亡,白术多糖可通过调节线粒体通路相关基因表达抵抗环磷酰胺诱导雏鸡肝细胞凋亡,对雏鸡肝脏产生保护作用。

VitaePro抑制线粒体通路对心肌细胞缺氧损伤的保护作用

目的探讨Vitae Pro对心肌细胞缺氧损伤的保护作用及其机制。方法将大鼠心肌细胞H9c2分为四组:正常对照组(H9c2)、缺氧损伤模型组(Hypoxia+H9c2)、红花油组(Safflower oil+hypoxia+H9c2)和Vitae Pro组(Vitae Pro+hypoxia+H9c2)。MTT和流式细胞术分别检测心肌细胞增殖和凋亡情况;Western blot检测线粒体凋亡通路相关蛋白的表达,包括B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X(BAX)、凋亡蛋白-3(Caspase-3)和裂解后的Caspase-3(Cleaved caspase-3);试剂盒检测各组心肌细胞硫代巴比妥酸反应物(TBARS)水平、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。最后,Western blot检测心血管损伤标志蛋白的表达,包括心肌肌钙蛋白T(c Tn T)、肌红蛋白(Mb)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)。结果缺氧损伤模型组与对照组比较,细胞增殖显著下降,凋亡率显著增高(4.2%~14.6%,P<0.05),Bcl-2蛋白的表达明显降低,Bax和Cleaved caspase-3的表达显著升高(P<0.05),TBARS水平和MDA含量升高(P<0.05),SOD活性从44.9 U/mg降低到13.2 U/mg,心血管损伤标志蛋白c Tn T、Mb、CK-MB和LDH的表达显著升高(P<0.05)。Vitae Pro组与缺氧组相比,细胞的增殖升高(P<0.05),凋亡率降低到6.4%,Bcl-2的表达升高,Bax和Cleaved caspase-3的表达明显降低(P<0.05),TBARS水平和MDA含量明显降低(P<0.05),SOD活性增大到41.0 U/mg,c Tn T、Mb、CK-MB和LDH的表达显著降低(P<0.05)。结论 Vitae Pro可以通过抑制线粒体凋亡通路和通过抗氧化作用减轻缺氧诱导的大鼠心肌细胞损伤。

线粒体通路与缺血性脑血管病中神经细胞凋亡的关系

线粒体是细胞内一个重要的细胞器,它不仅为真核生物提供能量,而且在凋亡发生过程中发挥了重要的作用。通过对缺血性脑血管病中神经细胞凋亡以及线粒体通路的研究,将有助于开发缺血性脑血管疾病药物。因此,我们将这三者之间的关系一一综述。

枕大池注入尼莫地平对兔蛛网膜下腔出血后海马线粒体通路的影响

目的探讨枕大池注入尼莫地平对兔蛛网膜下腔出血(SAH)后海马线粒体通路的影响。方法 18只新西兰大白兔随机分为假手术组(Sham组)、SAH组、尼莫地平组(ND组),每组6只。各组均在麻醉下行手术操作,SAH和ND组取自体动脉血(1 mL/kg)注入枕大池建模,Sham组注入等剂量生理盐水。30 min后ND组再次经枕大池注入尼莫地平(1 mg/kg),SAH组、Sham组注入等体积生理盐水。SAH后72 h进行摄食量和神经功能损害分级评价后处死动物,取海马组织,qRT-PCR检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cyt-C mRNA表达,Western blot检测Caspase-3、Cyt-C蛋白表达。结果与Sham组相比,SAH、ND组动物摄食量减少,出现不同程度的神经功能损害,Bcl-2/Bax降低;但Bcl-2、Bax mRNA,Caspase-3、Cyt-C mRNA及蛋白表达升高(P<0.05)。与SAH组相比,ND组摄食量及神经功能损害差异无统计学意义(P>0.05),但Bcl-2 mRNA表达升高,Bax mRNA表达降低,Bcl-2/Bax升高;Caspase-3、Cyt-C mRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。结论尼莫地平可通过抑制SAH后海马线粒体通路激活和减少细胞凋亡来发挥脑保护作用。

线粒体通路在大戟大枣汤对乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制及凋亡诱导中的调控作用

目的探讨大戟大枣汤(DEFSJ)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用及其相关机制。方法SPF级SD大鼠每天2次分别ig给予溶剂(生理盐水)、DEFSJ 2.5,5.0和10.0 g·kg^-1,共3 d。末次给药1 h后,腹主动脉采血,分离制备DEFSJ含药血清(DEFSJ-CS)。乳腺癌MCF-7细胞分别用对照血清、DEFSJ-CS 2.5,5.0和10.0 g·kg^-1及紫杉醇8 mg·L^-1处理48 h。用甲基纤维素克隆形成实验检测细胞克隆能力;JC-1染色后激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)含量;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Bcl-2,Bax和Bim mRNA表达水平;免疫荧光法检测Bcl-2,Bax和Bim蛋白表达水平。结果与含溶剂(生理盐水)血清对照组相比,DEFSJ-CS 2.5,5.0和10.0 g·kg^-1组及紫杉醇组人乳腺癌MCF-7细胞克隆形成率显著降低(P<0.05,P<0.01);MCF-7细胞线粒体膜电位显著降低(P<0.01);细胞内ROS含量显著升高(P<0.01);Bcl-2基因和蛋白的表达下调,Bax和Bim基因和蛋白的表达上调(P<0.05,P<0.01)。结论细胞内线粒体通路参与调控DEFSJ抑制MCF-7细胞增殖并诱导细胞凋亡的作用。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导仔猪海马神经细胞凋亡的线粒体通路研究

为探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对神经细胞毒性的作用机理,本试验选用仔猪海马神经细胞为研究对象,体外培养至对数生长期后,分别用含0(空白)、250、500、1 000 ng/mL DON和1 000 ng/mL DON+20μmol/L半胱天冬酶(Caspase)-8抑制剂(FMK)的培养液进行染毒培养。培养24 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率、活性氧(ROS)水平以及线粒体膜电位变化;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞凋亡线粒体途径中主要凋亡基因B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、BH3相互作用域死亡激动剂(Bid)、Caspase-2、Caspase-3和Caspase-9 mRNA的表达量。结果显示:1)与空白组相比,250、500、1 000 ng/mL DON组的细胞凋亡率显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01);与1 000 ng/mL DON组相比,1 000 ng/mL DON+FMK组的细胞凋亡率极显著降低(P<0.01)。2)与空白组相比,250、500、1 000 ng/mL DON组的ROS水平极显著升高(P<0.01);与1 000 ng/mL DON组相比,1 000 ng/mL DON+FMK组的ROS水平极显著降低(P<0.01)。3)与空白组相比,250、500、1 000 ng/mL DON组的线粒体膜电位极显著降低(P<0.01);与1 000 ng/mL DON组相比,1 000 ng/mL DON+FMK组的线粒体膜电位极显著升高(P<0.01)。4)与空白组相比,500、1 000 ng/mL DON组的Bax、Bid、Caspase-2、Caspase-9和Caspase-3 mRNA表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),而Bcl-2 mRNA表达量极显著降低(P<0.01);与1 000 ng/mL DON组相比,1 000 ng/mL DON+FMK组的Bax、Bid、Caspase-2、Caspase-9和Caspase-3 mRNA表达量极显著降低(P<0.01),而Bcl-2 mRNA表达量极显著升高(P<0.01)。结果表明,DON可通过线粒体通路诱导仔猪海马神经细胞凋亡。