稳定表达线粒体钙离子荧光探针4mt-GCaMP6巨噬细胞系的构建

目的构建稳定表达线粒体钙离子荧光探针的巨噬细胞系,用于研究线粒体钙离子信号在巨噬细胞生理和病理活动中的作用和调节机制。方法用通过绿色荧光强度反映细胞线粒体钙离子浓度的探针4mt-GCaMP6制备慢病毒并感染永生化小鼠骨髓来源巨噬细胞(iBMDM),经嘌呤霉素抗性筛选获得稳定表达线粒体钙探针的细胞系iBMDM-4mt-GCaMP6。使用共聚焦荧光显微观测钙荧光探针在细胞内的表达,使用线粒体指示探针Mito-TrackerTMRed FM验证所表达钙荧光探针的线粒体定位,Time-lapse成像动态观测加入内质网钙释放剂离子霉素后该细胞对线粒体钙离子浓度变化的响应和指示能力。结果共聚焦荧光显微镜观测结果显示,所有细胞均表达了绿色线粒体钙离子荧光探针,其与线粒体指示探针MitoTrackerTMRed FM有明确的共定位。Time-lapse成像动态观测结果显示,加入离子霉素后线粒体钙离子探针荧光强度瞬时(6~9 s)升至基础水平的2倍,持续约45 s逐渐降低到基础水平。结论本研究成功构建了稳定表达线粒体钙离子荧光探针的巨噬细胞iBMDM-4mt-GCaMP6,该细胞系可用于实时监测巨噬细胞线粒体钙离子浓度变化。