线粒体靶向抗氧化剂SKQ1对脂多糖所致急性肾损伤小鼠的保护作用及机制

目的观察线粒体靶向抗氧化剂SKQ1对急性肾损伤小鼠的保护作用及机制。方法将24只8周龄健康雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、SKQ1组、LPS组、LPS+SKQ1组,每组6只。采用腹腔注射脂多糖(LPS)10 mg/kg制备小鼠急性肾损伤模型,以生理盐水作为对照,SKQ1组腹腔注射0.2 mg/kg的SKQ1(溶解于10%DMSO、40%PEG300、5%Tween-80和45%生理盐水),LPS+SKQ1组于造模前24 h予SKQ1预处理,LPS腹腔注射24 h后处死小鼠并保留各组血液及肾脏。苏木精-伊红(HE)染色法观察肾脏损伤程度,并通过Paller评分法量化比较;采用全自动生化分析仪测量血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN);RT-qPCR法检测肾脏组织中炎症因子mRNA变化,如白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肾脏组织氧化应激标志物水平,包括谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA);免疫印迹法检测凋亡途径相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达;采用电子显微镜观察各组小鼠肾小管线粒体结构。结果与对照组比较,LPS组小鼠肾脏病理损伤加重,肾脏损伤评分、SCr、BUN水平升高,肾组织中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平升高,Bax、Cleaved Caspase3蛋白表达升高,Bcl-2表达降低,GPx及SOD活性降低,MDA含量升高(P均<0.05);线粒体肿胀增大、线粒体嵴断裂及空泡形成。与LPS组比较,LPS+SKQ1组小鼠肾脏病理损伤减轻,肾脏损伤评分、SCr、BUN水平降低,肾脏组织IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达量降低,Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达降低,Bcl-2表达升高,GPx、SOD活性升高,MDA含量降低(P均<0.05);线粒体肿胀、线粒体嵴断裂及空泡化减轻。结论SKQ1预处理可保护脂多糖所致小鼠急性肾损伤,其机制可能是通过减少炎症反应、调节细胞异常凋亡、降低氧化应激水平以及维持线粒体正常形态来实现的。

异烟肼致小鼠肝损伤的建模及线粒体靶向药物MitoQ的干预作用

目的建立异烟肼(INH)诱导肝损伤小鼠模型,探讨MitoQ对INH肝毒性的线粒体保护机制。方法取36只C57B/6J小鼠,分为对照组、模型组和MitoQ干预组,每组12只,分别给予生理盐水(10mL/kg)、异烟肼(100mg/kg)、异烟肼(100mg/kg)+线粒体抗氧化剂MitoQ,2次/d灌胃。各组于5、14天分批处死小鼠,留取血液和肝脏组织,观察小鼠的肝脏病理改变,以及小鼠肝功能指标(ALT、AST、SDH、LDH)、肝脏氧化应激指标(GSH、GSSG、GSSG/GSH、4-HNE、3-NT)及肝脏线粒体指标(NADH、FADH、ATP、线粒体膜电位)的改变。结果 INH 100m/kg连续造模14天,肝细胞发生弥漫性小泡性脂肪变性,建模成功。肝功能指标中,与对照组比较,LDH在模型组明显升高(P<0.05),SDH在14天时明显升高(P<0.05);MitoQ干预后,LDH和SDH较模型组均显著下降(P<0.05)。肝脏氧化应激损伤指标GSSG、GSSG/GSH、4-HNE和3-NT模型组较对照组明显升高(P<0.05);MitoQ干预后,GSSG、GSSG/GSH、4-HNE及3-NT均较模型组明显下降(P<0.05),GSH则显著回升(P<0.05)。线粒体功能相关指标中,模型组NADH、FADH、ATP、线粒体膜电位较对照组均明显下降(均P<0.05);MitoQ干预后,NADH、FADH、ATP较模型组均显著升高(均P<0.05),但线粒体膜电位下降更明显(P<0.05)。结论线粒体可能是INH肝毒性的主要作用靶点,线粒体靶向抗氧化剂MitoQ可有效减轻INH引起的氧化应激损伤,有助于INH肝毒性的防治。