参附益心颗粒通过线粒体KATP通道改善缺氧H2C9心肌细胞能量代谢的作用

目的探索参附益心颗粒改善缺氧心肌细胞能量代谢的机制。方法采用CCK-8法筛选出参附益心颗粒含药血清实验研究的药物浓度。H2C9心肌细胞随机分为正常组,缺氧组,缺氧+二氮嗪组,缺氧+参附益心颗粒组,缺氧+参附益心颗粒+5-羟基癸酸组.除正常组外,根据实验分组,缺氧处理前预先对细胞进行二氮嗪、5-羟基癸酸和参附益心颗粒含药血清处理,后将细胞置于缺氧的37℃的细胞培养箱中连续培养6 h。采用荧光素酶发光法检测细胞ATP的浓度,CCK-8检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡水平,Western blot测定线粒体KATP(mitoKATP)的蛋白Kir6.2和SUR2A的表达。结果根据CCK-8实验结果选择250μM的参附益心颗粒含药血清作为实验药物浓度。与正常组相比,缺氧H2C9心肌细胞ATP水平显著降低,细胞的增殖能力降低,凋亡率增加,mitoKATP通道蛋白的Kir6.2和SUR2A的表达水平均显著降低(均P<0.01)。与缺氧组相比,二氮嗪和参附益心颗粒组的ATP浓度,细胞增殖能力和Kir6.2,SUR2A蛋白表达水平均显著升高,细胞的凋亡率显著下降(均P<0.01)。而参附益心颗粒经mitoKATP阻断剂5-羟基癸酸作用后,细胞的ATP浓度,增殖能力和Kir6.2,SUR2A的表达均显著下降(均P<0.01),凋亡率明显升高(P<0.01)。结论参附益心颗粒可能通过mitoKATP通道改善缺氧心肌细胞的能量代谢。

线粒体K_(ATP)通道介导远端缺血预处理对严重失血性休克大鼠在体心脏功能的保护作用

目的：观察远端缺血预处理（ RIPC）对严重失血性休克大鼠在体心脏功能的保护作用及其机制。方法32只雄性SD大鼠,体重300~350 g,随机分成4组：对照组（ C组）、失血性休克组（ S 组）、RIPC组（ R组）、RIPC ＋线粒体KATP通道阻滞剂组（ B组）,每组8只。采用经大鼠颈动脉60 min内放血占总血容量50%,观察30 min后经颈静脉30 min回输释放的血液建立严重失血性休克和复苏模型。在放血前双侧后肢以止血带捆绑阻断血流5 min,再灌注5 min,反复4个循环形成RIPC。 B组在RIPC前15 min经颈静脉注入线粒体KATP通道阻滞剂（5-羟基葵酸盐）10 mg/kg。 C组所有手术操作同S组,但不放血。持续监测心电图、平均动脉压（ MAP）到血液回输后2 h,在放血前、放血后、输血前、输血后即刻、输血后1、2 h用彩色超声仪测量心输出量（ CO）、左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）、心肌做功指数（MPI）、左室后壁厚度（LVPWD）。结果在失血和休克阶段,与 C 组比较, S 组、B 组和 R 组 MAP、CO、LVEF、LVFS均降低（P＜0．01）,MPI、 LVPWD升高（P＜0．01）；血液回输后,与 C 组比较, R 组 MAP、CO、LVEF、LVFS、MPI、LVPWD差异无统计学意义；与R组比较,S组和B组MAP、CO、LVEF、LVFS明显降低（ P＜0．01）, MPI、LVPWD明显升高（P＜0.01）；S组和B组各心脏功能指标差异无统计学意义。结论 RIPC明显保护严重失血性休克大鼠在体心脏功能,其保护作用可能与线粒体KATP通道激活有关。

线粒体K_(ATP)通道开放剂尼可地尔在大鼠心肌缺血后适应中的作用

目的探讨心肌线粒体KATP通道开放剂尼可地尔药物后适应对减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用。方法建立大鼠体外细胞水平缺氧复氧模型,设立实验分为3组。对照组(n=6):细胞缺氧30、60 min后,复氧10 min。尼可地尔组(n=6):细胞缺氧30、60 min后,立即加入浓度100μmol/L的尼可地尔,复氧10min。5-羟基葵酸盐加尼可地尔组(n=6):细胞缺氧前即刻加入500μmol/L 5-羟基葵酸盐,随后步骤同尼可地尔组。复氧10 min后观察细胞台盼蓝染色情况。计算每组中每个标本被台盼蓝染色的细胞数占整个被计数的细胞数的百分比,即为死亡细胞百分比。结果在对照组中,缺氧30、60 min,死亡细胞百分比为(29±2)%及(40±4)%,在尼可地尔组发现在复氧即刻给予尼可地尔,可以明显减少细胞的死亡百分数,缺氧30、60 min死亡细胞数分别为(17±2)%及(28±3)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。而加入5-羟基葵酸盐则可以取消尼可地尔这种对心肌的保护作用,缺氧30、60 min死亡细胞数分别为(30±3)%及(42±4)%。结论尼可地尔是通过开放线粒体KATP通道模拟缺血后适应来减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤的。

心肌和脑保护中的新策略——线粒体途径

线粒体K_(ATP)通道被认为是心肌和脑缺血预适应和药物性预适应的效应器,线粒体膜电位耗散和继发的通透性转换孔道(PTP)的开放是细胞凋亡的上游途径。线粒体K_(ATP)通道开放可以预防线粒体膜电位的耗散。以线粒体为靶位的新型抗氧化应激和细胞凋亡的器官保护方法将有广泛的临床应用前景。

麻醉药心肌保护的线粒体K_(ATP)通道机制

线粒体膜ATP敏感性钾通道(mitoK_(ATP))在心肌缺血预处理及麻醉药预处理中起重要作用,mitoK_(ATP)通道的开放可能是预处理心肌保护作用的最终效应器。麻醉药通过活化或抑制mitoK_(ATP)通道活性而影响预处理的心肌保护作用。

线粒体K_(ATP)通道开放剂对多巴胺能神经细胞的保护作用研究

目的研究线粒体KATP通道的开放对于鱼藤酮诱导的细胞凋亡的保护作用并初步探讨其机制。方法用神经生长因子(NGF)将PC12细胞诱导分化成多巴胺能神经元模型,经鱼藤酮和线粒体KATP通道的开放剂二氮嗪及选择性线粒体KATP通道拮抗剂5-羟葵酸(5-HD)处理,用台盼蓝染色和四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力,磷脂酰丝氨酸外翻法(Annexin V)检测细胞的凋亡,JC-1检测线粒体膜电位的变化。结果经鱼藤酮处理24h后PC12细胞突起结构消失,细胞体积变小,形态变圆,台盼蓝染色阳性细胞增多,细胞活力下降,可见An-nexin V阳性的早期凋亡细胞,凋亡率为31.1%±2.65%(P<0.01);同时加入二氮嗪能减少PC12细胞的凋亡,凋亡率为17.9%±0.71%(P<0.05);JC-1染色法证实二氮嗪可稳定线粒体膜电位。而同时加入5-HD的PC12细胞活力及线粒体膜电位与鱼藤酮处理组相比无变化。结论鱼藤酮可引起多巴胺神经元的凋亡,线粒体KATP通道的开放剂二氮嗪能够拮抗鱼藤酮的毒性作用,其机制可能是通过在线粒体膜电位降低时稳定线粒体膜电位而起到对多巴胺能细胞的保护作用。

二氮嗪预处理对培养H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的探讨线粒体KATP(Mito-KATP)通道特异性开放剂二氮嗪预处理在H9C2心肌细胞缺氧、复氧损伤中的作用及其机制。方法将培养的H9C2心肌细胞随机分为5组,即(Ⅰ)对照组;(Ⅱ)缺氧/复氧组;(Ⅲ)二氮嗪(DZ)预处理组;(Ⅳ)二氮嗪加ROS清除剂2-巯基丙酰氨基乙酸(MPG)预处理加缺氧/复氧组;(Ⅴ)二氮嗪加PKC的特异性抑制剂氯化白屈菜赤碱(CH)预处理加缺氧/复氧组。对照组常规培养;缺氧/复氧组缺氧培养100min,复氧30min;其余各组则加入相应的药物预处理10min,DZ、MPG和CH的终浓度分别为200、400mmol/L和2mmol/L,更换无血清培养基培养20min,然后再缺氧100min,复氧30min。采用Hoechst33258染色、JC-1荧光标记和Westernblotting等方法分别检测H9C2心肌细胞的凋亡率、线粒体膜电位变化和细胞色素C的释放量。结果二氮嗪预处理能减少缺氧/复氧损伤后H9C2心肌细胞的凋亡率(P<0.01);阻止线粒体膜电位的下降(P<0.01);减少线粒体释放细胞色素C(P<0.01);预处理过程中加入MPG、CH在一定程度上可抑制二氮嗪预处理的心肌保护效应。结论缺氧/复氧损伤可通过降低H9C2心肌细胞线粒体膜电位,引发线粒体释放细胞色素C,从而诱导心肌细胞的凋亡。开放Mito-KATP通道能减轻H9C2心肌细胞的缺氧/复氧损伤,其机制可能与开放Mito-KATP通道、释放信号分子ROS和激活PKC有关。

线粒体KATP通道在脑啡肽预处理体外循环心肌保护中的作用

目的通过建立猪体外循环（CPB）心肌缺血再灌注（MI／R）模型对δ阿片受体介导的CPBMI／R损伤早期时相的心肌保护效果、作用机制以及线粒体KATP通道的角色进行探讨，以期为临床心肌保护提供理论和实验依据。方法24只成年家猪（30～35kg）随机分为对照组（C组）、δ阿片样受体激动剂脑啡肽组（D组）和脑啡肽＋线粒体KATP通道阻滞剂组（D＋K组），每组8只，常规建立CPB模型，主动脉阻断同时灌注改良St．qlaomas停搏液。每组于CPB前、主动脉开放时、CPB结束时、停机后1、2h检测冠状静脉窦血肌钙蛋白（TnT）含量，相应时间点监测左室收缩压（LVSP），左室舒张末期压（LVEDP）和左室内压最大变化速率（±dp/dtmax），分别于CPB前和停机后2h取左心室心肌，作心肌组织Gia蛋白的表达、PKC的表达和ATP含量的测定。并应用透射电镜观察心肌再灌注损伤超微结构的变化。结果（1）D组的心功能改变明显优于C和D＋K组。（2）C和D＋K组TnT的升高比D组明显。（3）D组心肌ATP含量较C和D＋K组高。（4）透射电镜下C和D＋K组呈现出明显的MI／R损伤表现，而D组的心肌超微结构损伤较轻。（5）和C和D＋K组以及正常心肌相比，D组Gin蛋白和PKC的表达更为明显。结论（1）CPB前1h应用一次δ阿片受体激动剂脑啡肽（DADLE）能产生明显的早期时相心肌保护作用。（2）Gi蛋白-PKC．线粒体KATP通道途径是δ阿片受体介导的猪CPB MI／R损伤早期时相心肌保护中一条重要的信号传导途径。

阿托伐他汀抗心肌缺血再灌注损伤的作用机制研究

目的：研究阿托伐他汀（ATV）在对心肌缺血再灌注损伤（IRI）的保护效应中，两种ATP依赖的K^＋（KATP）通道的作用。方法：将32只实验家兔随机分为对照组、ATV组、ATV＋5-HD（A1组）、ATV＋HMR1883（A2组）。通过结扎和放松冠状动脉左前降支，分别进行30min的心肌缺血和再灌注。实验中持续监测左室舒张末期压（LVEDP）、左心室压最大变化速率（±dp／dtmax）的变化。结果：与对照组相比：ATV组及A2组各项心功能指标在再灌注30min后明显改善（P〈0．05），而A1组差异无显著性（P〉0．05）。结论：ATV的抗心肌IRI保护效应可能与线粒体KATP通道有关。