基于线粒体ND1和COI基因序列探讨锯眼蝶亚科主要类群的系统发生关系

测定了分布于中国的锯眼蝶亚科4族10属共20个种的线粒体ND1和COI基因的部分序列,结合从GenBank中获得的4个国外种类的同源序列,以凤蝶科的迪洛尔娟凤蝶(Allancatria deyrolle)、丝带凤蝶(Sericinus montela),以及娟蝶科的西猛娟蝶(Parnassius simonius)为外类群,通过邻接法、最大简约法、最大似然法和贝叶斯法重建了分子系统树,分析了该亚科内主要类群的系统发生关系。分析结果表明:帻眼蝶族和锯眼蝶族具有较近的亲缘关系;黛眼蝶族不是单系群,该族中的黛眼蝶属、荫眼蝶属与眉眼蝶族具有较近的亲缘关系,带眼蝶属、藏眼蝶属、毛眼蝶属和帕眼蝶属聚合为一个独立的支系,其中带眼蝶属和藏眼蝶属在所有的分析方法中均以100%的置信度(BP=100%,PP=1.00)相聚合,建议将它们合并为一属。

蓖麻蚕线粒体基因组中nd1及其侧翼tRNA基因的克隆与结构分析

按KoichiroTamura等 (1988)的方法制备出蓖麻蚕线粒体DNA ,用EcoRⅠ和XbaⅠ双酶解后 ,以pSK(+)(Ampr)为载体进行克隆 ,获得 1个 3 3kb的克隆片段。测序结果表明 ,所测序列包括部分 16SrRNA、完整的tRNA Leu ,nd1和tRNA Ser基因。其中 16SrRNA(3’端部分 )、nd1基因与家蚕具有很高的同源性。同时以nd1基因为依据构建了 17种动物的分子进化树 ,显示出蓖麻蚕与家蚕、野蚕有最近的演化关系。根据tRNA Leu和tRNA Ser基因的一级结构 ,推定了可能的二级结构 ,并与家蚕进行了比较。

基于线粒体COⅠ和ND1基因分析三尾凤蝶遗传多样性

以云南和四川分布的3个种群(云南丽江种群、云南东川种群、四川种群)共36头三尾凤蝶为研究对象,选取线粒体COⅠ和ND1基因作为分子标记,对三尾凤蝶的遗传多样性进行了研究.结果表明,PCR扩增测得COⅠ和ND1基因联合序列长度为1 913 bp,A+T含量为74.3%,表现出明显的A/T碱基偏向性;共检测到4个变异位点,定义了5个单倍型,其中,Ha1出现的频率较高,为共享单倍型.核苷酸和单倍型多样性指数分别为0.000 2和0.218 0;遗传分化系数(Gst)、固定系数(Fst)、基因流(Nm)和遗传距离分别为0.059 98、0.059 95、3.920 00和0.分析显示,三尾凤蝶遗传多样性低,各地理种群基因交流频繁,没有形成明显分化.

中国人群Leber遗传性视神经病变线粒体ND1基因突变频谱分析

背景Leber遗传性视神经病变（LHON）是一种常见的遗传性眼病，常导致患者双侧中心视力下降，其基因突变频谱并不完全清楚。目的筛查中国人群LHON线粒体NDl基因的突变位点并明确其突变频谱。方法经温州医学院伦理道德委员会批准，所有受试者知情同意。收集临床诊断为LHON患者894例和正常对照者134名，抽取受检者的外周血提取基因组DNA，采用聚合酶链反应（PCR）法对受检者线粒体ND1基因进行扩增和测序，并与修正的线粒体剑桥参考序列进行比对，筛查突变位点并分析其突变频率。结果本研究在894例LHON患者的NDl基因中发现了7个与LHON相关的突变位点G3316A、T3394C、G3460A、C3497T、G3635A、G3733A、T4216C，携带这7个位点的患者共100例，占11．19％，其中与3个原发性突变位点共存者29例（3．24％）。这几个突变位点在病例中的发生频率分别为2．57％、2．23％、1．45％、3．80％、0．67％、0．11％、0．34％，其中G3316A、T3394c、C3497T、T4216C在正常对照者中也可检测到，分布频率分别为4．48％、2．99％、4．48％和1．49％，经分析在LHON组和正常对照组之间差异均无统计学意义（x2=0．926，P=0．336；x2=0．052，P=0．820；x2=0．142，P=0．707；P=0．129），而其他一些在欧美人群中报道的位点，如G3376A、G3496T、G3700A、A4136G、T4160C、C4171A在中国LHON人群中并未发现。结论线粒体NDl基因是中国人群LHON的一个突变热点区域，约11．19％的中国LHON患者与NDl基因突变有关。G3635A、G3733A为中国人群中少见的致病突变位点，而G3316A、T3394C、C3497T、T4216C本身并不足以致病，但可能对LHON外显率和表型的表达起协同作用。

线粒体DNA ND1基因T3394C点突变与2型糖尿病的关系

目的探讨本地区汉族人群线粒体DNA ND1基因中T3394C突变与2型糖尿病(T2DM)的关系。方法应用聚合酶链反应(PCR)对无血缘关系的225例T2DM患者和190名正常对照者的外周血DNA进行PCR扩增并直接测序确证。结果糖尿病患者组中检出T3394C突变8例(3.56%),正常对照组检出1名(0.53%),2组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论线粒体DNA T3394C突变可能与本地区汉族人群T2DM的发生有关。

天津地区汉族人线粒体ND1基因突变与2型糖尿病的关系

目的 :了解线粒体NADH脱氢酶复合物亚单位1(ND1)基因中3316位点G→A突变和3394位点T→C突变 ,在天津地区汉族2型糖尿病 (DM )患者中的情况。方法:对随机收集的无血缘关系的300例2型DM患者进行研究 ,同时选择280例无DM家族史的糖耐量正常者作为对照组 ,用聚合酶链反应扩增、限制性内切酶HaeIII消化进行点突变筛选。结果 :2型DM组中3316G→A突变占2 7%(8/300) ,3394T→C突变占4 0 %(12/300) ;而对照组中未发现3316位点突变 ,3394位点突变占0 71 %(2/280) ,组间比较均有显著性差异(P<0.05)。结论

线粒体基因ND1/T3394C突变与糖尿病

【目的】调查线粒体NADH脱氢酶亚单位 1(ND1)基因的T3394C位点突变与中国人糖尿病的发病情况。【方法】随机收集 338例无血缘关系的糖尿病患者及 2 6 2例正常对照组 ,用聚合酶链反应扩增、限制性内切酶HaeⅢ消化进行突变筛查 ,DNA序列分析确认。【结果】糖尿病患者中T3394C突变者共 8例 (2 37%) ,正常对照组中只有 1例 (0 38%,P <0 0 1)。糖尿病突变患者中 4例有糖尿病家族史 ,4例病人由于胰岛素分泌功能下降和 /或出现并发症 ,需用胰岛素治疗。【结论】ND1/T3394C突变在糖尿病患者中的发生率明显高于正常对组 ,提示这个位点突变可能是导致线粒体糖尿病的易感基因之一。

失血性休克大鼠心肌细胞线粒体ND1、ND2亚基编码基因改变的研究

目的 探讨失血性休克大鼠心肌细胞线粒体呼吸链复合体Ⅰ亚单位ND1、ND2编码基因改变。方法 通过建立失血性休克大鼠模型 ,提取心肌细胞线粒体DNA ,经PCR扩增呼吸链复合体Ⅰ亚单位ND1、ND2基因后测序检测其序列组成改变。结果 测序结果显示 ,失血性休克大鼠心肌细胞线粒体的ND1和ND2基因碱基序列无缺失、突变等改变 ;本实验中使用的Wistar大鼠ND1、ND2基因可能与NCBI提供的基因序列存在多个位点的单核苷酸多态性现象。结论 心肌细胞ND1。

泡状带绦虫线粒体ND1基因的克隆及序列比对分析

针对带绦虫线粒体DNA的ND1基因设计引物扩增目的基因,使用基因分析软件Larsergene V7.1与GenBank已知带绦虫基因进行比对分析。实验成功扩增泡状带绦虫甘肃地区虫株X2线粒体基因组的ND1基因。分析结果显示,泡状带绦虫ND1基因种间不同虫株的基因同源性均在98.8%~99.5%之间,ND1基因推导的氨基酸序列与其他泡状带绦虫的蛋白同源性均在98.5%~99.2%之间,其中与四川地区的虫株同源性均达到了99.2%。推断泡状带绦虫线粒体DNA的ND1基因相对保守,与Taenia sp.AL-2012、Taenia regis和猪带绦虫差异较明显,最高只有91.3%,可以作为泡状带绦虫的初步鉴别基因。

不同地理群体的鲇线粒体DNAND1基因序列比较分析

为了对长江中上游主要支流鲇5个野生群体——雅砻江群体(YLJ)、岷江群体(MJ)、金沙江群体(CS)、乌江群体(WJ)、氵舞阳河群体(WYH)的遗传变异进行分析,对27个样品的ND1基因进行PCR扩增,并将PCR产物进行测序;用CLUSTALXv1.81软件对所得的27个ND1序列进行比对;通过Dna SP5.10软件、Tajima’s D和Fst分析对所得的ND1序列进行比较分析,并构建分子系统树。结果表明:共检测出105个变异位点,8种单倍型。雅砻江、岷江、金沙江、乌江、氵舞阳河5个野生群体的单倍型多样性(H)分别为0.400、0.600、0.667、0.857、0.400,核苷酸多样性(π)分别为0.000 82、0.000 62、0.044 44、0.044 36、0.000 41。雅砻江、氵舞阳河2群体存在负向选择或种群扩张,其余群体符合中性进化模型,且有一些单倍型的分化,只有金沙江群体的遗传差异显著,群体间分子变异不显著。结论:雅砻江、岷江、金沙江、乌江群体之间的亲缘关系较近,氵舞阳河群体与其他群体间的亲缘关系较远。

人食管鳞癌EC9706细胞线粒体DNA中ND1基因突变的检测及意义

目的通过对人食管鳞癌EC9706细胞线粒体DNA(mtDNA)中ND1基因进行检测,分析其基因突变的意义。方法培养人食管鳞癌EC9706细胞,提取其mtDNA中的ND1基因,并测序。结果测序发现,人食管鳞癌EC9706细胞mtDNA中ND1基因的3 971处出现点突变,由C突变为T。结论人食管鳞癌EC9706细胞中mtDNA的ND1基因的突变与食管癌发生、发展关系密切。

珠颈斑鸠线粒体ND1和ND2基因序列测定与特征分析

根据其他物种的线粒体基因序列设计引物,采用PCR方法扩增珠颈斑鸠(Streptopelia chinensis)线粒体基因组中编码NADH亚基基团的ND1、ND2基因片段,测序后获得了ND1和ND2基因的全序列。结果表明,ND1基因序列长度为966 bp,编码321个氨基酸的多肽,A、G、C、T碱基组成分别为27.0%、12.7%、33.9%、26.4%;ND2基因序列长度为1 041 bp,编码346个氨基酸的多肽,A、G、C、T碱基组成分别为32.5%、9.7%、33.8%、24.0%。ND1、ND2基因的起始密码子均为ATG,但终止密码子分别为AGA、TAG。将珠颈斑鸠ND1、ND2基因核苷酸序列及氨基酸序列与其他11种鸟类进行比对,结果表明,珠颈斑鸠与原鸽的亲缘关系最近,与形态学分类一致。根据12种鸟类ND1和ND2氨基酸序列,采用NJ法构建了12种鸟类系统进化树。

大理白族老年人2型糖尿病与线粒体ND1基因T3394C突变的相关性

目的:研究人线粒体呼吸链烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶第一亚单位(ND1)基因3394位点T→C突变与我国云南大理白族老年人2型糖尿病的相关性。方法:随机抽取无血缘关系的云南大理白族200例老年2型糖尿病患者(糖尿病组)及218例无糖尿病家族史、糖耐量正常的老年人群(正常对照组),用聚合酶链反应扩增、限制性内切酶HaeⅢ消化进行点突变筛查。结果:糖尿病组中5例患者存在线粒体DNA ND1基因3394位点T→C突变(2.50%),正常对照组中仅有1例出现该位点突变(0.46%),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。线粒体ND1基因3394位点T→C基因突变的糖尿病患者具有明显的母系遗传特征。结论:线粒体ND1基因3394位点T→C突变与云南省大理白族老年人2型糖尿病患者发病相关。

细粒棘球蚴(Echinococcusgranulosus)CO1与ND1基因序列分析

目的为了明确内蒙古锡林郭勒盟西乌旗羊株和锡林浩特市人株细粒棘球蚴之间的基因型及其遗传变异情况。方法利用分子生物学技术对采自两地区细粒棘球蚴的线粒体CO1基因与ND1基因进行了克隆和测序,并运用DNAStar5.0中的MegAlign工具对已测出的序列进行了分析。结果西乌旗羊株细粒棘球蚴与锡林浩特市人株细粒棘球蚴CO1基因片段和ND1基因片段大小分别均为936bp和895bp。西乌旗羊株细粒棘球蚴CO1基因序列与新疆羊株细粒棘球蚴的CO1基因序列同源性为99.3%;锡林浩特市人株细粒棘球蚴CO1基因序列与新疆人株细粒棘球蚴的CO1基因序列同源性为98.6%;且西乌旗羊株和锡林浩特市人株细粒棘球蚴ND1基因与国内外已报道的G1型ND1基因序列完全相同。结论表明内蒙古上述两地区细粒棘球蚴的同源性很高,且基因型均为G1型,这为内蒙古某些地区细粒棘球蚴流行虫株的确定提供了重要依据,同时也对当地细粒棘球蚴病的预防和控制具有重要意义。

基于线粒体基因分析的中华血吸虫分子种系发生研究

目的 测定中华血吸虫线粒体细胞色素 C氧化酶亚基 1(CO1)和 NADH脱氢酶亚基 1(ND1)基因序列 ,并根据这些序列构建分子系统发生树 ,探讨中华血吸虫在裂体属内的系统发生位置。 方法 以 GNT- K法抽提虫体基因组 DNA,用特异引物 PCR扩增目的基因。PCR扩增产物经纯化后克隆于质粒载体 ,以纯化后的阳性质粒 DNA作为模板 ,M13(F/ R)为引物于 L icor测序仪测序。检索 Gen Bank,查找曼氏血吸虫等相关血吸虫两线粒体基因序列 ,作基因排序及比较分析后 ,用 PHYL IP和 MEGA以邻接法和最大简约法绘制系统发生树。 结果 克隆了中华血吸虫的 CO1和 ND1基因片段 ,并测定了两基因片段的核苷酸序列 ,根据这些序列构建了系统发生树。 结论 中华血吸虫 CO1和ND1基因的系统发生树结果一致。

线粒体DNA3243、3316、3394位点突变与精神分裂症相关分析

目的分析线粒体tRNALeu(UUR)基因3243位点及ND1基因3316、3394位点突变对精神分裂症(SZ)发病的影响。方法采用PCR扩增、限制性内切酶消化、琼脂糖凝胶电泳分型检测、DNA测序等方法,对随机抽取的无亲缘关系的250例患者(SZ组)和292例对照组的外周血mtDNA进行3243、3316和3394位点的突变检测。结果在SZ组中发现8例3316G/A突变,对照组中3例,两组相比差异无统计学意义(P=0.138)。在SZ组中发现15例3394T/C突变,对照组中有4例,两组相比差异有统计学意义(P=0.007)。在精神分裂症患者组和对照组中均未发现3243A/G突变。结论 mtDNA3394T/C突变可能与SZ发生有一定关系,mtDNA 3243A/G、3316G/A突变可能与SZ发生无关。

2型糖尿病线粒体ND1基因3个新突变位点的分析

目的探讨线粒体DNAtRNALeu(UUR)基因和ND1基因点突变(np3243、3316、3394和3593)与湖北人群2型糖尿病的相关性。方法采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCRRFLP),克隆和测序的分析方法,对184例2型糖尿病患者和210名健康对照进行筛选,并用DNAMAN、Primer、mfold和Antherprot软件对检出的突变位点进行分析和二级结构预测。结果实验组检出3316(G→A)突变6例(3.3%),3394(T→C)突变5例(2.7%),3593(T→C)突变1例(0.5%),并发现3个尚未见报道的新突变位点:3606(A→G)、3618(T→C)和3688(G→C),未检出3243(A→G)突变;对照组只检出3316(G→A)突变1例(0.5%)。两组间仅3394(T→C)突变率差异有统计学意义(P<0.05)。3606(A→G)和3618(T→C)突变分别为亮氨酸、苯丙氨酸的无意义突变,其二级结构均与野生型ND1相同;3316(G→A)突变(丙氨酸→苏氨酸),3394(T→C)突变(酪氨酸→组氨酸),3593(T→C)突变(缬氨酸→丙氨酸),3688(G→C)突变(丙氨酸→脯氨酸),均引起ND1基因DNA和蛋白质二级结构的改变,其中3394(T→C)突变型变化最显著。结论线粒体DNAND1基因3394(T→C)突变以及3688(G→C)突变伴随3316(G→A)突变,可能与2型糖尿病的发生发展有关。

线粒体DNA ND1基因3394 T→C突变与2型糖尿病

线粒体基因（mitochondrial DNA，mtDNA）是目前发现的除核基因以外惟一存在于人类细胞质中的DNA分子，具有自我复制、转录、和编码功能。mtDNA缺陷可导致胰岛素分泌障碍，从而参与糖尿病的发生。有关糖尿病与mtDNA基因突变的研究国内外均有报道，但结果不一。我们采用PCR-RFLP、DNA测序和结构预测的分析方法，对武汉地区95例2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）患者和168例健康对照mtDNA的ND1基因（np3307-4263）的3394（T-C）突变位点进行筛选检测。

老年2型糖尿病患者线粒体ND1基因常见突变位点的快速筛查

2型糖尿病是慢性代谢疾病，呈高龄人群高发病率的特点，尤其是持续高血糖所引发的心血管疾病、终末期肾病等并发症严重困扰着老年2型糖尿病患者。线粒体基因缺陷是其遗传易感因素之一，在诸多报道的突变位点中，以位于tRNA leu（UUR）基因3243（A—G）突变及ND1基因的3316（G→A）、3394（T→C）和3593（T→C）突变最为常见。我们以老年2型糖尿病为研究对象，

多房棘球蚴线粒体NADH脱氢酶1基因分析及PCR检测方法

目的扩增多房棘球蚴线粒体NADH脱氢酶亚基1（NADH dehydrogenase suhunit1，ND1）基因全序列，测序并进行同源性比较。建立检测多房棘球蚴感染的PCR方法，应用于人和动物感染多房棘球蚴的快速检测和鉴定。方法根据多房棘球绦虫线粒体DNA全序列，设计引物扩增ND1基因并进行测序，获得多房棘球蚴ND1基因全序列。对该序列与其它常见棘球绦虫的NDI基因序列进行同源性分析。结果多房棘球蚴线粒体ND1基因序列与国外报告的多房棘球绦虫的同源性达到98．8％，与细粒棘球绦虫的同源性为86．2％，与少节棘球绦虫的同源性为84．6％，与伏氏棘球绦虫的同源性为87．0％。结论多房棘球蚴线粒体ND1基因与其他棘球绦虫相应基因存在显著差异。PCR方法可以用于多房棘球蚴感染的快速检测和鉴定。