“祛风通窍方”对血管性痴呆大鼠海马线粒体COX活性及COXⅡmRNA表达的影响

目的:观察祛风通窍方对血管性痴呆(Vascular dementia,VD)大鼠海马线粒体细胞色素氧化酶(COX)及细胞色素氧化酶Ⅱ亚型(COXⅡ)mRNA表达的影响,探讨祛风通窍方对VD可能的保护机制。方法:大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组和祛风通窍方高、中、低剂量组。除假手术组外,其余各组大鼠采用经典的永久性结扎双侧颈总动脉法制备VD模型。假手术组、模型组用等体积蒸馏水灌胃,各给药组予相应药物灌胃,连续30d。ELISA法检测海马线粒体COX活性;RT-PCR法检测COXⅡmRNA表达水平。结果:与假手术组比较,其余各组大鼠COX活性明显降低,COXⅡmRNA表达明显降低;与模型组比较,尼莫地平组和祛风通窍方高、中剂量组COX活性明显升高,COXⅡmRNA表达明显增加。结论:祛风通窍方对VD大鼠线粒体功能具有一定的保护作用,可能与其改善VD大鼠线粒体COX活性,增加COXⅡmRNA的表达有关。

水稻线粒体coxⅡ基因转录本的编辑位点研究

RNA编辑是指由RNA水平的核苷酸改变所引起的密码子发生变化的一种预定修饰,它的发现是近年来对分子生物学中心法则的重要补充。本文以红莲型(HL)水稻细胞质雄性不育系粤泰A,保持系粤泰B和杂种F_1(不育系A与恢复系71068的杂交一代)为材料,首次研究了线粒体基因coxⅡ转录本的编辑位点。coxⅡ基因的转录本有15个编辑位点,其中有14个发生在密码子的第一和第二位点。这14个位点的编辑可改变氨基酸的种类,并导致所编码蛋白的疏水性以及所编码蛋白在氨基酸序列上的保守性增加。

湖南娄底市犬弓首蛔虫流行状况及线粒体cox 1和nad 4序列变异分析

为了解湖南省娄底市犬弓首蛔虫流行状况及虫株遗传变异情况,本试验于2021年3—9月对该地区368份犬粪便和104份环境(土壤和水源)样品的犬弓首蛔虫污染情况进行调查;对9个犬弓首蛔虫分离株线粒体cox 1和nad 4序列进行扩增、测序与分析。结果显示:被调查的犬粪便和环境样品的犬弓首蛔虫虫卵检出率分别为13.59%(50/368)和18.27%(19/104);其中宠物犬(11.74%)较流浪犬(17.36%)来源粪便样品检出率低,公园来源土壤样品(9.09%)较小区来源样品(3.92%)检出率高;9个犬弓首蛔虫分离株线粒体cox 1和nad 4序列长度分别为424 bp和1197 bp,核苷酸序列同源性为99.4%~100.0%和98.7%~100.0%,与其他具有代表性蛔虫分离株对应序列同源性均低于90%;9个犬弓首蛔虫分离株线粒体cox 1和nad 4序列核苷酸多样性分别为0.007±0.002和0.006±0.003。结果表明湖南娄底市犬弓首蛔虫分离株遗传变异较低,但虫卵流行状况严重,且存在于公共环境中,对人类健康造成潜在威胁。

金丝猴毛首线虫线粒体cox1基因序列分析

为阐明金丝猴毛首线虫线粒体细胞色素c氧化酶Ⅰ亚基(cox1)基因部分(pcox1)序列的遗传变异情况,以长沙生态动物园金丝猴体内分离的毛首线虫作为研究对象,根据cox1序列构建其与其他毛首线虫的进化发育关系。使用PCR方法扩增金丝猴毛首线虫线粒体cox1,然后将所测得的序列应用Clustal X 1.81程序进行比对,最后用Mega 5.0程序NJ法绘制种系发育树。结果显示,本实验扩增获得的6条毛首线虫分离株cox1序列长度一致,均为411 bp,种内变异为0。种系发育分析结果表明,这6条毛首线虫分离株位于同一分支。鉴于金丝猴毛首线虫的cox1基因种内保守,而种间差异大(24.0%~34.1%),因此可以作为种间鉴定检测研究的遗传标记。本研究结果为进一步研究金丝猴毛首线虫的群体遗传结构奠定了基础。

基于线粒体COX Ⅰ基因犬复孔绦虫的分子鉴定及功能分析

目的探讨从犬复孔绦虫的固定标本和新鲜虫体中扩增保守序列线粒体COXⅠ鉴定虫种并分析功能。方法从犬小肠内获取犬复孔绦虫成虫节片提取DNA,PCR扩增线粒体COXⅠ,进行电泳鉴定并测序;用BLAST比对序列、构建进化树并预测生物信息学功能。结果固定标本和新鲜标本中DNA扩增产物电泳后均显示特异性明显的条带,测序显示COXⅠ基因总长为415 bp,其编码的蛋白为疏水性蛋白,具有3个典型的跨膜螺旋,7个B细胞抗原表位。结论虫体经70%乙醇固定处理后,不影响犬复孔绦虫的基因组提取和COXⅠ序列扩增,且线粒体COXⅠ适合作为犬复孔绦虫虫种鉴别的分子标记。

昌宁县中华蜜蜂种群遗传结构调查——基于线粒体DNA COX1分子标记

为了探究云南省昌宁县中华蜜蜂的种群遗传结构,以线粒体DNA C0X1基因片段为分子标记,利用生物信息学软件对该地区4个采样点共96群中华蜜蜂进行了遗传多样性分析,共获得了89条序列,所得线粒体DNA片段的序列长度为794bp。结果表明(1)序列碱基组成为:A+T74.3%,表现出显著的A+T偏倚性。(2)共发现23个变异位点其中转换变异位点21个,颠换变异位点2个。(3)共定义了16个线粒体单倍型,表现出昌宁地区丰富的遗传多样性和较高的单倍型多样度,显示出昌宁地区中华蜜蜂群体具有相对独立的遗传结构,同时与华南地区中华蜜蜂种群存在有限的基因交流。

基于cox1基因对中国青藏高原地区细粒棘球绦虫遗传多态性的研究

通过对中国青藏高原地区细粒棘球绦虫的遗传多态性分析,了解该地区细粒棘球绦虫的遗传变异情况,为细粒棘球蚴病的防治提供基础材料。基于线粒体cox1基因全序列(1 609bp)分析中国青藏高原地区47个细粒棘球绦虫分离株的序列变异情况,并结合NCBI数据库中已公布的中国青藏高原和中东地区所有细粒棘球绦虫cox1基因全长序列,对比分析两个种群的遗传多态性特征。结果显示,47个样品均被确定为G1基因型,分为10个单倍型(C1~C10),其中优势单倍型C1与中东优势单倍型相同,且该单倍型呈世界性分布。中国青藏高原地区细粒棘球绦虫的单倍型多样性(Hd)与核苷酸多样性(π)较低,明显低于中东种群,两个地区Tajima’s D和Fu’s Fs检验值均为负值,遗传结构差异不显著。研究结果表明:中国青藏高原细粒棘球绦虫可能是由一个起源于中东的有效种群进入该地区后,经历了近期群体扩张或遗传瓶颈,在高原地区天然的地理隔离作用下,逐渐发展成了现在的种群。

用cox1基因片段的PCR鉴别亚洲带绦虫和牛带绦虫

目的:用cox1基因片段的PCR技术对亚洲带绦虫和牛带绦虫的快速鉴别。方法:用亚洲带绦虫和牛带绦虫线粒体cox1基因片段的特异性引物以及带绦虫cox1基因片段的通用引物,对贵州省都匀地区和从江地区的带绦虫虫卵和节片DNA进行常规PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测和核酸序列测定,并用NC-BI Blast对扩增产物的核酸序列与NCBI数据库中带绦虫的cox1基因进行比对。结果:5株都匀带绦虫DNA样品经亚洲带绦虫cox1基因片段的特异性引物PCR,均扩增出约260 bp的产物,PCR产物的核酸序列与NCBI数据库中亚洲带绦虫线粒体cox1基因片段的同源性为100%;2株从江带绦虫的DNA样品用亚洲带绦虫特异性引物和牛带绦虫特异性引物的PCR均未见扩增产物,而通用引物PCR则扩增出约1 000 bp的产物,核酸序列与NCBI数据库中牛带绦虫线粒体cox1基因片段的同源性为99%,在牛带绦虫特异性引物的结合位点存在一个碱基差异。结论:常规PCR扩增特异性的cox1基因片段可快速鉴定亚洲带绦虫;从江牛带绦虫株的cox1基因特异性片段部分存在变异,导致与特异性引物结合能力的差异,可采用cox1基因通用引物PCR结合测序进行鉴定。

补益脾胃元气方药对SAMP8小鼠海马COX活性及神经营养因子表达的影响

目的观察人参、洗心汤、大补元煎三组补益脾胃元气方药对SAMP8快速老化模型小鼠空间、学习、记忆能力、海马细胞色素C氧化酶(cytochrome coxidase,COX)活性及神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响,初步揭示补益脾胃元气方药的益智机制。方法选用3月龄全雄性SAMP8小鼠,分为SAMP8组、盐酸多奈哌齐组(Donepezil HCI,DN)、人参组(RSD)、洗心汤组(XXD)、大补元煎组(DBYD),另以同源同性别同月龄抗快速老化小鼠(SAMR1)设立空白对照SAMR1组,每组14只。连续灌胃给药10周后进行相关指标检测。以Morris水迷宫法观察各实验组小鼠的空间、学习、记忆能力;以透射电镜观测各实验组小鼠海马CA3区超微结构;采用生化法检测各实验组小鼠海马COX活性;免疫组化法、蛋白印迹法检测各实验组小鼠海马神经营养因子NGF、BDNF表达水平。结果水迷宫结果显示,SAMP8组小鼠平均逃避潜伏期均值明显大于SAMR1组(P<0.05),且在目的象限活动时间与穿越逃生平台的次数显著降低(P<0.05)。DN组、RSD组、XXD组、DBYD组逃避潜伏期均值显著低于SAMP8组(P<0.05)。透射电镜结果显示:各实验组小鼠海马CA3区突触数量明显增加,突触结构较为清晰,脑囊泡显著减少,线粒体轮廓较清晰,其中DN组效果优于各中药组。生化法结果显示:含中药各组海马COX活性显著高于SAMP8组(P<0.05)。免疫荧光法显示:含中药各组海马神经营养因子NGF、BDNF表达水平未显著高于SAMP8组(P>0.05);蛋白印迹法显示各中药组海马神经营养因子NGF、BDNF表达水平未显著高于SAMP8组(P>0.05)。结论人参、大补元煎、洗心汤能显著改善SAMP8小鼠的空间学习记忆功能,提高海马COX活性,表现出促进SAMP8小鼠NGF、BDNF表达的趋势。

贵州黔南5条带绦虫的分类研究

目的用形态学方法和分子生物学方法对贵州黔南地区5条带绦虫进行分类学鉴定。方法在观察虫体头节、孕节等形态的基础上,采用带绦虫线粒体细胞色素C氧化酶亚单位1(cy-tochrome c oxidase subunit 1,cox1)基因片段的特异性引物对虫体DNA进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳分析。结果 5条带绦虫头节近方形,有4个吸盘,无顶突和小钩,孕节子宫每侧分支数为18～24支。以Tasia为引物的PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,均出现约260bp的条带,而以Tsag引物均未见扩增产物。结论经鉴定,所采集的4株都匀绦虫和1株独山绦虫均为亚洲带绦虫,提示贵州都匀、独山地区为亚洲带绦虫流行区。

中国近海外来囊藻(Colpomenia peregrina)种群遗传多样性研究

外来囊藻(Colpomeniaperegrina)是一种在潮间带分布广泛的褐藻,它能附着在牡蛎壳上进行跨海区扩散,因而是研究生物多样性变动和生物地理格局形成的良好模型。外来囊藻在中国沿海虽有分布,但关于其种群遗传多样性和分化研究的报道尚为空白。本研究采集了中国近海13个外来囊藻种群样本。通过扩增301条线粒体cox3序列,发现了26个单倍型;通过重建单倍型网络图和基于最大似然法与贝叶斯法重建系统进化树,发现外来囊藻种内遗传多样性较高, 13个种群划分为3个遗传世系,其中浙江南麂列岛的7个种群组成遗传世系A,辽宁和山东的样本则分化为遗传世系B和C。中国近海外来囊藻的这种种群遗传结构可能源于更新世末次盛冰期黄渤海、东海边缘海的环境变化和海平面的大幅下降。遗传世系A具有的较高单倍型多样性,其原因可能是南麂列岛独特的地理位置和潮间带环境的共同作用。

实时荧光PCR法检测食品中梅花鹿成分

采用实时荧光聚合酶链式反应技术检测食品中梅花鹿成分。通过对梅花鹿基因序列对比分析,选取种间差异大、种内差异小的线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因序列作为靶序列,利用Primer Express、Oligo和DNAMAN等软件设计了梅花鹿特异性的引物和Taq Man探针,并用已知样本对引物和Taq Man探针的物种特异性、检测灵敏度进行验证和检测。实验结果表明,引物和探针对梅花鹿成分检测的特异性良好,与其他物种DNA无非目标扩增,对梅花鹿DNA的扩增效率为91.68%,该方法的检测灵敏度达0.42 pg/反应。

中国近海重要生态建群红藻真江蓠的群体遗传多样性

真江蓠(Gracilaria vermiculophylla)是中国近海潮间带生态系统结构组成和功能维持的重要支撑物种,但有关其群体遗传结构和多样性分布模式的研究目前仍较缺乏。本研究利用线粒体cox1序列对我国近海19个真江蓠地理群体进行了系统发育和群体遗传分析。461个长度为641 bp的cox1序列片段共含有21个多态位点,产生15个单倍型。基于cox1序列的系统进化分析、单倍型分析和主成分分析显示,19个真江蓠群体分化为南北两个类群,其中浙江嵊泗以北的13个群体形成北方类群,福建厦门以南的6个群体形成南方类群。遗传距离和分子方差分析显示真江蓠南北各类群内的遗传分化较小,南北类群间的遗传分化达到亚种水平。南北类群间的差异是我国近海真江蓠群体遗传变异的主要来源。

加拿大–西北大西洋地区掌形藻的种群遗传结构与动态变化

探讨古气候波动(如更新世末期冰期)对典型生物的时空分布和有效种群大小变动的影响是生物地理学和进化遗传学的重要研究课题。本文利用线粒体cox2–3序列和RAPD两种分子标记,对分布于加拿大–西北大西洋地区8个地点(共138个个体)的掌形藻(Palmaria palmata)进行谱系地理学研究,试图阐明当更新世冰期来临时掌形藻如何衍生出适应性的进化机制,并形成当前的地理分布格局。结果表明,线粒体cox2–3间区序列共检测出11个单倍型,其中1个单倍型(C3)在所有种群中都有分布,并位于星状基因谱系的中心位置,可认为是祖先单倍型。St.Lawrence湾内北部的两个种群多样性最高,与其他地理种群分化最明显,这与基于RAPD数据的STRUCTURE聚类分析结果相一致。根据掌形藻遗传多样性及其单倍型谱系结构特征,推测掌形藻在加拿大–西北大西洋沿岸存在多个冰期避难所。分子多态性分析(AMOVA)显示掌形藻的遗传变异主要来自种群内,而St.Lawrence湾和Fundy湾群组间的遗传变异较小。cox2–3序列的Bayesianskylineplots分析结果反映出掌形藻种群在加拿大–西北大西洋沿岸经历了轻微的种群扩张,时间大概在0.18–0.13百万年前。St.Lawrence湾和Fundy湾群组间的K2P遗传距离为0.2%,相应的分化时间大约在0.36百万年前。由此推测,更新世末期的冰期及间冰期是影响掌形藻种群结构及变动的重要古气候环境因子。

肉制品中鸵鸟源性成分的实时荧光PCR检测

通过实时荧光PCR技术检测肉制品中鸵鸟源性成分。根据鸵鸟线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因(COX1)序列,用Primer Express和DNAMAN软件设计特异性的引物和Taq Man探针,并用阳性样本进行验证。结果表明,引物和探针对鸵鸟源性成分的特异性良好,与常见物种DNA无非目标扩增,该方法的检测灵敏度达0.27 pg/反应,适用于鸵鸟源性成分的鉴定,从而建立了肉制品中鸵鸟源性成分的实时荧光PCR鉴定方法 。