基于离线二维液质联用技术的多黏菌素E新组分的研究

目的建立一种基于离线二维高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱技术(off-line 2D HPLC-Q/TOF-MS)的多黏菌素E(PME)组分的结构分析方法。方法采用《欧洲药典》10版中的硫酸多黏菌素E的分析方法,经半制备液相色谱分别收集含量超过0.15%的馏分,去除溶剂后,注入液质联用系统。在HPLC-Q/TOF-MS方法中,根据建立的基于高分辨质谱的PME的结构解析策略推导其他未知组分的结构。结果通过离线半制备技术既可以富集含量较低的组分,也可以继续通过第二维色谱进行分离,提高峰容量。经质谱分析,共检测到31个组分。除《欧洲药典》中收载的11个组分外,还检测到包括已知组分如多黏菌素E1(PME1)、多黏菌素E2(PME2)、多黏菌素E4(PME4)、多黏菌素E2-缬氨酸(PME2-Val)的异构体和氨基酸取代产物,如2位苏氨酸转化为丝氨酸的PME组分[PME-Ser(2位)]及脂肪酰基链上的取代产物如3′位羟基化的PME2组分(3′-OHPME2),并首次解析出5个PME的脱水化合物,即2位或10位苏氨酸脱水形成脱氢丁氨酸而产生的PME1或PME2脱水物。结论本研究中的off-line 2D HPLC-Q/TOF-MS可以更全面的评价PME产品中的组分,特别是新型PME脱水物的发现扩展了对PME结构多样性的认识,本方法能够更严格地控制该类产品的质量。