Lowry2法检测组分百日咳疫苗中间产品蛋白含量的适用性验证

目的对组分百日咳疫苗中间产品的蛋白含量检测方法-Lowry2法[《中国药典》三部(2020版)福林酚法-第二法]进行适用性验证。方法标准品和样品经脱氧胆酸盐-三氯乙酸沉淀预处理去除杂质,随后与福林酚反应,在750 nm波长处测定吸光度值。以标准品浓度-吸光度绘制标准曲线,计算样品浓度。对该方法进行专属性、线性、准确性、精密性验证;并采用该方法检测3批组分百日咳疫苗中间产品的蛋白含量。结果该方法检测中间产品背景缓冲液蛋白含量与超纯水比较,差异无统计学意义(t=0.277~1.178,P=0.304~0.795);蛋白浓度在0~50μg/mL之间标准曲线线性关系良好,R^(2)均>0.98;准确性验证加标回收率在90%~110%之间;重复性及中间精密性验证的RSD均<3%。3批组分百日咳疫苗中间产品蛋白含量检测结果均符合企业内部《制造与检定规程》要求。结论Lowry2法专属性、准确性、精密性良好,可用于测定组分百日咳中间产品的蛋白含量,为Lowry2法的适用性提供了依据。

含组分百日咳联合疫苗境内临床试验现况分析

本文梳理了境内外含组分百日咳联合疫苗的上市和使用现况,对境内已完成和正在进行的注册临床试验进行了汇总,重点分析了此类品种境内临床试验设计的特点和组织实施的难点,为同类品种后续开展临床试验和技术评价提供参考。

首批百日咳杆菌鼠源抗血清国家参考品的制备和标定

目的制备和标定百日咳杆菌鼠源抗血清国家参考品。方法按《中华人民共和国药典》2015版(三部)(简称《中国药典》)相关要求,制备候选百日咳杆菌鼠源抗血清参考品(简称候选参考品),以WHO百日咳杆菌鼠源抗血清标准品(编号97/642)为标准,组织3家单位进行协作标定,并采用热加速试验对候选参考品进行稳定性观察。结果共制备合格候选参考品300支,其外观、水分、分装精度均符合《中国药典》的相关要求;协作标定结果显示,室内和室间几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)均低于20%;经统计学分析,最终确定候选参考品中含PT-Ig G、FHA-Ig G、PRN-Ig G分别为95 IU/m L、917 IU/m L、102 IU/m L,95%可信区间分别为91.7~103.7 IU/m L、900.2~944.5 IU/m L、99.4~106.1 IU/m L;每支安瓿分别含PT-Ig G 19 IU、FHA-Ig G 183 IU、PRN-Ig G21 IU;候选参考品于-20℃放置15个月及37℃放置7 d、14 d、21 d和28 d后,各种百日咳组分抗体的酶标单位值均变化不大,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论首批百日咳杆菌鼠源抗血清国家参考品均符合《中国药典》的各项要求,且一致性、稳定性良好,可用于百日咳组分疫苗小鼠效力血清学方法的质量控制评价。

2月龄-6岁儿童接种吸附无细胞百日咳(三组分)白喉破伤风联合疫苗的安全性Ⅰ期临床试验

目的评价一款吸附无细胞百日咳(三组分)白喉破伤风联合疫苗(DTcP)应用于2月龄-6岁儿童的安全性。方法采用随机、盲法和同类疫苗对照的Ⅰ期临床试验在河南省某地区招募2月龄、3月龄、18-24月龄和4-6岁受试者,每个年龄组受试者按不同免疫程序随机接种DTcP或对照疫苗,对照疫苗包括已上市使用的吸附无细胞百白破联合疫苗(DTaP)、吸附无细胞百白破灭活脊髓灰质炎和b型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗(DTaP-IPV/Hib)、吸附白喉破伤风联合疫苗(DT),观察接种后0-30 d不良反应和12个月内严重不良事件(SAE),比较DTcP和对照疫苗的不良反应发生率。结果2月龄受试者接种3剂次DTcP(2-3-4月龄免疫程序)、DTaP-IPV/Hib(2-3-4月龄免疫程序)和DTcP(2-4-6月龄免疫程序)的总不良反应发生率分别为21.37%(25/117)、25.42%(30/118)和18.33%(22/120),其中局部反应分别为13.68%、16.10%和12.50%,全身反应分别为11.97%、11.02%和7.50%。3月龄受试者按3-4-5月龄程序接种3剂次DTcP、DTaP和DTaP-IPV/Hib的总不良反应发生率分别为11.67%(14/120)、20.00%(24/120)和32.50%(39/120),其中局部反应分别为7.50%、14.17%和19.17%,全身反应分别为5.00%、7.50%和15.83%。18-24月龄受试者接种1剂次DTcP和DTaP的总不良反应发生率分别为22.50%(9/40)和20.00%(8/40),其中局部反应分别为17.50%和15.00%,全身反应分别为7.50%和5.00%。4-6岁受试者接种1剂次DTcP和DT的总不良反应发生率分别为67.50%(27/40)和17.50%(7/40),其中局部反应分别为67.50%和17.50%,全身反应分别为5.00%和0.00%。所有不良反应的严重程度为1级和2级。9例受试者发生14例次SAE,均与疫苗接种无关。结论本研究初步显示DTcP在2月龄-6岁儿童中接种后具有良好的安全性和耐受性。

基础免疫用组分百日咳联合疫苗临床评价的考虑

随着中国对联合疫苗的需求增加,组分百日咳疫苗成为近年来预防用疫苗研发的热点,但此类疫苗在抗原配比与含量、抗体检测方法与阳性标准、临床试验设计与实施等方面存在共性问题,制约了组分百日咳疫苗临床开发的进程。本文在充分调研国内外百日咳疫苗研发现状和国内临床实践的基础上,提出对基础免疫用组分百日咳联合疫苗临床评价的几点考虑,为中国组分百日咳联合疫苗的研发提供借鉴。