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玉米组氨酸三聚体核苷结合蛋白基因Zm-HINT1的克隆及其原核表达载体构建 被引量:1
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作者 吴刘记 吴连成 +2 位作者 祖小峰 王平安 陈彦惠 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期267-270,279,共5页
通过RT-PCR方法和基因克隆技术对玉米黄早4HINT1基因进行了分子克隆和序列分析.结果表明,黄早4HINT1 cDNA全长为729 bp,氨基酸序列与动物HINT1有较高的相似度,并且包含HITN1蛋白家族保守的活性位点区域.同时,为进一步研究玉米HINT1基因... 通过RT-PCR方法和基因克隆技术对玉米黄早4HINT1基因进行了分子克隆和序列分析.结果表明,黄早4HINT1 cDNA全长为729 bp,氨基酸序列与动物HINT1有较高的相似度,并且包含HITN1蛋白家族保守的活性位点区域.同时,为进一步研究玉米HINT1基因的理化性质及生物功能,利用PET-28 a构建了黄早4HINT1的原核表达载体. 展开更多
关键词 玉米 组氨酸三聚体核苷结合蛋白 分子克隆 原核表达
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组氨酸三聚体核苷结合蛋白研究进展 被引量:3
2
作者 吴刘记 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1499-1505,共7页
组氨酸三聚体核苷结合蛋白(HINT)是组氨酸三聚体蛋白超家族成员中分布最为广泛的一种蛋白,该蛋白在不同的物种中均有报道,最新研究发现,HINT具有肿瘤抑制剂的作用.本文对国内外近年来有关HINT的结构特征、生物学活性、转录调控作用以及... 组氨酸三聚体核苷结合蛋白(HINT)是组氨酸三聚体蛋白超家族成员中分布最为广泛的一种蛋白,该蛋白在不同的物种中均有报道,最新研究发现,HINT具有肿瘤抑制剂的作用.本文对国内外近年来有关HINT的结构特征、生物学活性、转录调控作用以及对肿瘤的抑制作用及其作用机制等方面的研究进展进行综述. 展开更多
关键词 组氨酸三聚体核苷结合蛋白 组氨酸三聚体蛋白超家族 生物学活性 肿瘤抑制剂
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组氨酸三聚体核苷结合蛋白1的研究进展 被引量:1
3
作者 施智甜 孙德云 王琳 《医学综述》 2013年第15期2692-2694,共3页
组氨酸三聚体核苷结合蛋白1(HINT1)是新近发现的一种肿瘤抑制因子。HINT1可以通过多种途径控制多种转录过程,发挥肿瘤抑制作用,涉及Wnt通路、p27KIP1、核因子κB、激活蛋白1和小眼畸形转录因子等,但具体机制尚未完全明确。HINT1在部分... 组氨酸三聚体核苷结合蛋白1(HINT1)是新近发现的一种肿瘤抑制因子。HINT1可以通过多种途径控制多种转录过程,发挥肿瘤抑制作用,涉及Wnt通路、p27KIP1、核因子κB、激活蛋白1和小眼畸形转录因子等,但具体机制尚未完全明确。HINT1在部分肿瘤细胞中的低表达可能与其启动子区超甲基化有关。该文就HINT1的分子结构、启动子区超甲基化现象、抑癌作用及目前发现的作用机制的研究进展予以综述。 展开更多
关键词 组氨酸三聚体核苷结合蛋白1 分子结构 肿瘤抑制
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组氨酸三联体核苷酸结合蛋白2通过调控巨噬细胞焦亡抑制动脉粥样硬化
4
作者 高慧 张昕怡 +4 位作者 郭玉莉 冯睿婷 王睿 刘宇 郭敏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期980-988,共9页
目的:探讨组氨酸三联体核苷酸结合蛋白2(HINT2)对动脉粥样硬化(AS)的影响及其可能机制。方法:分离胸痛患者的外周血单个核细胞(PBMCs)并诱导分化为巨噬细胞,检测细胞中HINT2的表达水平。体外培养RAW264.7小鼠巨噬细胞,检测细胞上清液炎... 目的:探讨组氨酸三联体核苷酸结合蛋白2(HINT2)对动脉粥样硬化(AS)的影响及其可能机制。方法:分离胸痛患者的外周血单个核细胞(PBMCs)并诱导分化为巨噬细胞,检测细胞中HINT2的表达水平。体外培养RAW264.7小鼠巨噬细胞,检测细胞上清液炎症因子的水平及细胞死亡情况。建立载脂蛋白E基因敲除(apoE^(−/−))小鼠AS模型,检测小鼠主动脉根部斑块形成及巨噬细胞的脂质代谢和泡沫化程度。RT-qPCR和Western blot法检测RAW264.7细胞和apoE^(−/−)小鼠主动脉内焦亡相关因子的表达水平。结果:急性冠脉综合征患者PBMCs源性巨噬细胞中HINT2的表达水平显著降低,且与血清中促炎因子水平呈负相关,与抗炎因子水平呈正相关,提示HINT2可能抑制AS的炎症反应。体外实验结果表明,过表达HINT2基因能够抑制氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激下巨噬细胞的脂质积累和泡沫化,降低细胞上清中白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、IL-18和肿瘤坏死因子α等炎症因子的分泌,减少细胞死亡和焦亡相关因子的mRNA及蛋白表达。动物实验结果表明,过表达HINT2基因能够减轻apoE^(−/−)小鼠主动脉根部的斑块负荷,降低巨噬细胞的泡沫化程度,抑制焦亡相关因子核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、caspase-1、消皮素D(GSDMD)、IL-1β和IL-18的mRNA及蛋白表达。结论:HINT2可以抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞焦亡,减轻AS过程中的炎症反应,减缓AS的发生与发展。 展开更多
关键词 组氨酸三联体核苷结合蛋白2 巨噬细胞 细胞焦亡 动脉粥样硬化
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组氨酸三聚体核苷结合蛋白1在肾透明细胞癌中的表达及意义 被引量:4
5
作者 杨斌 邢金春 +4 位作者 李伟 张开颜 吴准 陈志阳 杨盛华 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期436-441,共6页
目的:通过检测组氨酸三聚体核苷结合蛋白1(histidine triad nucleotide-binding protein1,HINT1)mRNA及其蛋白质在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)中的表达情况,探讨其与临床病理特征的关系。方法:应用实时荧光定... 目的:通过检测组氨酸三聚体核苷结合蛋白1(histidine triad nucleotide-binding protein1,HINT1)mRNA及其蛋白质在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)中的表达情况,探讨其与临床病理特征的关系。方法:应用实时荧光定量(real-time fluorescence quantitative,RFQ)-PCR和免疫组织化学分别从mRNA和蛋白质水平检测HINT1在36例新鲜ccRCC组织、37例新鲜正常肾组织(其中29例配对)、30例石蜡包埋ccRCC组织与12例石蜡包埋正常肾组织中的表达水平,并分析其与临床病理特征间的关系。结果:HINT1mRNA在29例配对ccRCC和癌旁正常肾组织中的表达量分别为0.209±0.033和0.733±0.136(P<0.001),在36例ccRCC和37例癌旁正常肾组织中的表达量分别为0.245±0.035和0.694±0.108(P<0.001)。HINT1蛋白在癌旁正常肾组织中的阳性表达率为100%(12/12),弥漫性分布于细胞核及细胞质中,其中近曲小管表达强度高于远曲小管。肾小球基膜、肾小囊壁层上皮细胞可见HINT1蛋白部分表达,其强度低于肾小管,肾间质未见阳性表达。HINT1蛋白在ccRCC中的阳性表达率为60%(18/30),同样分布于细胞核及细胞质,癌组织间质阴性(P<0.01)。HINT1在mRNA和蛋白质水平表达趋势一致,在ccRCC中表达水平低于癌旁正常肾组织,并且在T3-4晚期肿瘤中表达量低于T1-2早期肿瘤中的表达量(P<0.05);但2者在不同Fuhrman核分级、性别、年龄和肿瘤大小中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:HINT1可能在ccRCC发病机制中发挥肿瘤抑制作用,其表达异常可能与翻译水平之前的异常调控有关。推测HINT1mRNA和蛋白质的异常表达可作为ccRCC发生和进展的预后指标。 展开更多
关键词 肾肿瘤 基因表达 反转录酶聚核酶链反应 免疫组织化学 组氨酸三聚体核苷结合蛋白1
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组氨酸三聚体核苷结合蛋白1和2与疾病相关的研究进展 被引量:1
6
作者 马赛男 李铁松 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2021年第3期626-633,共8页
组氨酸三聚体核苷结合蛋白(HINT)属于HIT蛋白超家族,HINT1和HINT2基因分别位于人类染色体5q31.2和9p11区域,编码产物分别是含126和163个氨基酸的蛋白,相对分子质量分别约14 kDa和17 kDa,二者之间有61%的序列同源性。HINT1在细胞中定位... 组氨酸三聚体核苷结合蛋白(HINT)属于HIT蛋白超家族,HINT1和HINT2基因分别位于人类染色体5q31.2和9p11区域,编码产物分别是含126和163个氨基酸的蛋白,相对分子质量分别约14 kDa和17 kDa,二者之间有61%的序列同源性。HINT1在细胞中定位于细胞质和细胞核,HINT2定位于线粒体,二者在组织中分布广泛。HINT1和HINT2两个亚型均为肿瘤抑制因子,参与细胞增殖和凋亡,HINT1可通过调节Wnt/β-catenin信号通路以及p27^(KIP1)、AP1、TFIIH、MITF等转录因子的活性抑制肿瘤,HINT2可通过线粒体自噬和线粒体凋亡途径抑制肿瘤。该文就HINT1和HINT2的发现、分布、结构、酶活性、肿瘤作用机制及其与其他疾病的关系进行了系统综述并进行展望。为进一步揭示HINT1和HINT2在不同类型肿瘤中的分子抑制机制以及靶向治疗和药物研发奠定了理论基础。 展开更多
关键词 组氨酸三聚体核苷结合蛋白 HINT1 HINT2 肿瘤 增殖和凋亡
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三联组氨酸核苷酸结合蛋白1与人类疾病 被引量:2
7
作者 党永辉 刘仲伟 +2 位作者 陈峰 郭坤 王家蓓 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期454-460,共7页
三联组氨酸核苷酸结合蛋白1(HINT1)是三联组氨酸蛋白超家族成员之一,三联组氨酸因为具有保守的核苷酸结合基序组氨酸-x-组氨酸-x-组氨酸-xx(x代表1个疏水氨基酸)而得名,HINT1广泛参与肿瘤、神经精神疾病等人类疾病的病理生理过程。本文... 三联组氨酸核苷酸结合蛋白1(HINT1)是三联组氨酸蛋白超家族成员之一,三联组氨酸因为具有保守的核苷酸结合基序组氨酸-x-组氨酸-x-组氨酸-xx(x代表1个疏水氨基酸)而得名,HINT1广泛参与肿瘤、神经精神疾病等人类疾病的病理生理过程。本文主要综述HINT1的结构、分布、酶活性基本功能,以及与人类疾病的关联。 展开更多
关键词 三联组氨酸核苷结合蛋白1 肿瘤 神经精神疾病 2型糖尿病 肝脏缺血 再灌注 肝纤维化
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氧化损伤对视网膜色素上皮细胞三联组氨酸核苷结合蛋白1(HINT1)表达的影响 被引量:1
8
作者 周圆 尹悦 +5 位作者 冯俊侨 杨敏 蔡嘉慧 吴昌睿 马乐 张玮 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2019年第1期17-21,共5页
目的探讨过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞氧化损伤对三联组氨酸核苷结合蛋白1(histidine triad nucleotide binding protein 1,HINT1)表达的影响。方法将人ARPE-19细胞系... 目的探讨过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞氧化损伤对三联组氨酸核苷结合蛋白1(histidine triad nucleotide binding protein 1,HINT1)表达的影响。方法将人ARPE-19细胞系分别用0μmol·L^(-1)H_2O_2(对照组)、50μmol·L^(-1)H_2O_2、100μmol·L^(-1)H_2O_2、200μmol·L^(-1)H_2O_2、400μmol·L^(-1)H_2O_2、600μmol·L^(-1)H_2O_26个浓度梯度处理。采用Live/Dead荧光双染法和MTT法分别检测细胞活力和增殖能力;采用Western blot检测RPE细胞内BAX、BCL-2以及HINT1的表达水平。结果 H_2O_2处理6 h后,对照组及50μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)、200μmol·L^(-1)、400μmol·L^(-1)及600μmol·L^(-1)H_2O_2组RPE细胞死亡率分别为(0. 35±0. 11)%、(2. 03±0. 87)%、(3. 76±1. 41)%、(12. 17±1. 26)%、(17. 69±2. 24)%、(25. 22±0. 59)%,RPE细胞死亡率呈剂量依赖性升高(P <0. 05)。H_2O_2作用后对照组及50μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)、200μmol·L^(-1)、400μmol·L^(-1)、600μmol·L^(-1)H_2O_2组RPE细胞生存率分别为(40. 72±2. 71)%、(37. 75±0. 62)%、(35. 30±0. 68)%、(34. 10±0. 74)%、(33. 61±0. 71)%、(31. 05±1. 41)%,RPE细胞增殖明显减少(P <0. 05),具有剂量-效应关系。随着H_2O_2浓度的增加,BAX蛋白表达逐渐上升(P <0. 01),而抗凋亡BCL-2蛋白表达则逐渐下降(P <0. 01),BAX/BCL-2比值相比对照组分别升高1. 85倍(50μmol·L^(-1)H_2O_2组)、2. 35倍(100μmol·L^(-1)H_2O_2组)、2. 86倍(200μmol·L^(-1)H_2O_2组)、3. 97倍(400μmol·L^(-1)H_2O_2组)、8. 50倍(600μmol·L^(-1)H_2O_2组); HINT1在H_2O_2处理的RPE细胞中以剂量依赖性方式逐渐下降(P <0. 01),分别下降0. 78倍(50μmol·L^(-1)H_2O_2组)、0. 59倍(100μmol·L^(-1)H_2O_2组)、0. 45倍(200μmol·L^(-1)H_2O_2组)、0. 42倍(400μmol·L^(-1)H_2O_2组)、0. 38倍(600μmol·L^(-1)H_2O_2组)。结论 H_2O_2氧化损伤诱导RPE细胞活力显著减弱,细胞凋亡相关蛋白BAX表达升高;同时,细胞中HINT1表达下调,表明HINT1可能通过影响细胞凋亡参与年龄相关性黄斑变性的发生,为其药物作用的潜在靶点。 展开更多
关键词 过氧化氢 视网膜色素上皮细胞 凋亡 三联组氨酸核苷结合蛋白1
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三联组氨酸核苷结合蛋白1及其在神经精神疾病中的功能 被引量:1
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作者 党永辉 刘仲伟 +1 位作者 刘鹏 王家蓓 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期711-720,共10页
三联组氨酸核苷结合蛋白1(HINT1)是三联组氨酸(HIT)酶家族成员,作为核苷水解酶或转移酶起作用,其生物学功能尚不清楚。HINT1蛋白可在多种组织中表达,在转录和信号转导中发挥重要作用。早期研究已经明确HINT1是单倍剂量不足的肿瘤抑制因... 三联组氨酸核苷结合蛋白1(HINT1)是三联组氨酸(HIT)酶家族成员,作为核苷水解酶或转移酶起作用,其生物学功能尚不清楚。HINT1蛋白可在多种组织中表达,在转录和信号转导中发挥重要作用。早期研究已经明确HINT1是单倍剂量不足的肿瘤抑制因子;也有研究表明HINT1广泛参与一系列生理过程,且部分功能与其基本的酶活性无关;新近研究表明这一蛋白与诸多外周、中枢神经系统疾病存在密切关系,在遗传性周围神经病、精神分裂症、心境障碍、药物成瘾、唐氏综合征等神经精神疾病中起作用。本文针对HINT1蛋白在以上不同神经精神疾病中的作用做了详细综述,分析归纳了HINT1在上述每一种疾病中的研究发现,以期对今后该蛋白的深入研究起到一定的指导作用。 展开更多
关键词 三联组氨酸核苷结合蛋白1 神经病理
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TMEM166在大鼠酒精使用障碍脑卒中中的作用及其与Hint2表达的关系
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作者 郝丹丹 王丹阳 李丽 《临床和实验医学杂志》 2024年第15期1569-1572,共4页
目的探讨跨膜蛋白166(TMEM166)在大鼠酒精使用障碍(AUD)脑卒中中的作用及其与组氨酸三核苷酸结合蛋白2(Hint2)表达的关系。方法实验动物为SPF级成年SD雄性大鼠54只,实验中将大鼠按照随机数字表法分为3组:AUD组、AUD+大脑中动脉栓塞(MCAO... 目的探讨跨膜蛋白166(TMEM166)在大鼠酒精使用障碍(AUD)脑卒中中的作用及其与组氨酸三核苷酸结合蛋白2(Hint2)表达的关系。方法实验动物为SPF级成年SD雄性大鼠54只,实验中将大鼠按照随机数字表法分为3组:AUD组、AUD+大脑中动脉栓塞(MCAO)组及AUD+MCAO+TMEM166siRNA(TMEM166 siRNA)组,每组各18只。AUD组用双瓶法建立AUD动物模型,AUD+MCAO组在AUD基础上制作大鼠MCAO局部脑缺血模型,AUD+MCAO+TMEM166siRNA在AUD+MCAO大鼠基础上侧脑室注射TMEM166 siRNA。记录各组大鼠乙醇摄入量、乙醇偏好变化及神经功能评分。免疫荧光染色观察各组大鼠大脑皮层TMEM166与Hint2的表达,蛋白质印迹法检测各组大鼠脑组织TMEM166表达及Hint2的蛋白水平。结果与AUD组相比,AUD+MCAO组大鼠大脑皮质TMEM166表达升高,大鼠神经功能缺损明显,缺血侧出现大面积脑梗死,免疫荧光及蛋白质印迹法检测发现伴有Hint2的表达降低。TMEM166 siRNA侧脑室注射低表达TMEM166后,TMEM166蛋白荧光强度明显减弱,而Hint2蛋白荧光强度明显增强,阳性细胞数量增加,大鼠脑梗死面积明显减少,神经功能缺损症状改善。同时,TMEM166与Hint2存在共定位。结论TMEM166在大鼠酒精使用障碍脑卒中神经功能障碍中发挥重要作用,其机制可能是通过抑制Hint2的表达实现的。 展开更多
关键词 大鼠 酒精使用障碍 脑卒中 跨膜蛋白166 组氨酸核苷结合蛋白2
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三联组氨酸核苷酸结合蛋白1在食管癌中的表达及机制 被引量:1
11
作者 吕俊杰 陈玉兄 +1 位作者 张振中 吴旭 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1551-1553,共3页
目的探讨三联组氨酸核苷酸结合蛋白1在食管癌中的表达及机制.方法选择Eca-109食道癌细胞株实验室细胞培养,用pLVX-IRES-ZsCreen1慢病毒表达Hint1载体,感染293T细胞纯化浓缩后,感染Eca-109细胞得到Eca-109^Hint1+组细胞;测定两组细胞绿... 目的探讨三联组氨酸核苷酸结合蛋白1在食管癌中的表达及机制.方法选择Eca-109食道癌细胞株实验室细胞培养,用pLVX-IRES-ZsCreen1慢病毒表达Hint1载体,感染293T细胞纯化浓缩后,感染Eca-109细胞得到Eca-109^Hint1+组细胞;测定两组细胞绿色荧光蛋白的表达,检测转染是否成功;用蛋白质印迹法(Western blot)法检测细胞Hint1蛋白的表达;用Transwell侵袭实验检测不同组细胞的侵袭能力;用流式细胞仪检测细胞周期;用噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况.结果Eca-109Hint1+组细胞中荧光蛋白平均表达率(68.26±3.12)%,而对照组细胞未见绿色荧光表达(t=8.250,P<0.01);Western blot法检测Eca-109^Hint1+组细胞中Hint1表达为(1.86±0.02),而Eca-109组细胞中Hint1表达为(0.61±0.01,t=5.529,P<0.05);Eca-109^Hint1+组细胞的侵袭能力为(49.36±3.02),而Eca-109组细胞侵袭能力为(114.11±10.01),Eca-109^Hint1+组细胞的侵袭能力低于Eca-109组细胞的侵袭能力(t=8.988,P<0.05);Eca-109组细胞细胞周期为(50.31±0.41),Eca-109^Hint1+组细胞的细胞周期为(41.24±0.62);MTT实验显示Eca-109^Hint1+组细胞的吸光度(A)值为(0.82±0.01),Eca-109组细胞的A值为(0.57±0.02),Eca-109^Hint1+组细胞的A值高于Eca-109组细胞的A值(t=6.527,P<0.05).结论三联组氨酸核苷酸结合蛋白1在食管癌中的表达时,细胞周期变长,细胞活力增加,对于食管癌细胞具有抑制作用. 展开更多
关键词 三联组氨酸核苷结合蛋白1 食管癌 细胞表达及抑制
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三联组氨酸核苷酸结合蛋白2对结肠癌细胞SW620侵袭迁移的影响
12
作者 周飙寰 王欢 +3 位作者 蔡少鑫 杨常顺 王乐 李伟华 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期2151-2153,共3页
目的 观察上调三联组氨酸核苷酸结合蛋白2(Hint2)表达对结肠癌细胞SW620侵袭迁移能力的影响,探讨Hint2表达调控SW620侵袭迁移的可能机制.方法 用慢病毒pLVX-IRES-ZsGreen1-Hint2载体转染293T后构建Hint2过表达SW620^Hint2+细胞株;Wes... 目的 观察上调三联组氨酸核苷酸结合蛋白2(Hint2)表达对结肠癌细胞SW620侵袭迁移能力的影响,探讨Hint2表达调控SW620侵袭迁移的可能机制.方法 用慢病毒pLVX-IRES-ZsGreen1-Hint2载体转染293T后构建Hint2过表达SW620^Hint2+细胞株;Western blot检测细胞Hint2的表达水平,Transwell侵袭迁移实验以及划痕实验检测结肠癌细胞侵袭数目和迁移距离,分析其与Hint2表达的关系.结果 成功构建Hint2过表达的SW620^Hint2+细胞;SW620^Hint2+组细胞Hint2蛋白表达量为SW620组的3.1倍;SW620^Hint2+组穿透基质胶的细胞数显著少于SW620组[(52.33±5.05)%比(112.83±10.11)%,P<0.05].SW620^Hint2+组迁移的细胞数显著少于SW620组[(51.17±11.64)%比(111.17 ±11.64)%,P<0.05].划痕实验24 h后SW620^Hint2+组细胞迁移的平均距离显著短于SW620组[(0.37 ±0.03) mm比(0.71±0.04)mm,P<0.05].细胞Hint2的表达水平与其侵袭及迁移能力呈负相关(r=-1.000,P<0.01).结论 成功构建后的SW620^Hint2+细胞株稳定过表达Hint2,其侵袭及迁移的能力明显下降,由此提示Hint2的上调可能参与结肠癌细胞转移和迁移能力的负性调控。 展开更多
关键词 三联组氨酸核苷结合蛋白2 结肠癌 侵袭 迁移
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pcDNA.3.1/myc-His(-)A-HINT1真核表达载体的构建及其在人黑素瘤细胞A375中的表达 被引量:3
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作者 关杨 姜祎群 +2 位作者 高莹 曾学思 孙建方 《中国麻风皮肤病杂志》 2009年第9期660-664,共5页
目的:构建真核表达载体pcDNA.3.1/myc-His(-)A-HINT1并检测其在人黑素瘤细胞A375中的表达。方法:采用巢式RT-PCR的方法扩增带有Xba I和Kpn I酶切位点的人HINT1编码区基因,经TA克隆技术,将基因测序正确的序列克隆到空白真核表达载体pcDNA... 目的:构建真核表达载体pcDNA.3.1/myc-His(-)A-HINT1并检测其在人黑素瘤细胞A375中的表达。方法:采用巢式RT-PCR的方法扩增带有Xba I和Kpn I酶切位点的人HINT1编码区基因,经TA克隆技术,将基因测序正确的序列克隆到空白真核表达载体pcDNA.3.1/myc-His(-)A,构建真核表达载体pcDNA.3.1/myc-His(-)A-HINT1。经菌落PCR、双酶切及基因测序鉴定后,用脂质体转染法转染A375细胞,通过G418筛选,获得稳定转染的A375单克隆细胞。用免疫细胞化学法及Western blot(WB)法检测HINT1蛋白在细胞中的表达。结果:pcDNA.3.1/myc-His(-)A-HINT1真核表达载体构建成功,通过脂质体转染,G418筛选,获得稳定转染的A375单克隆细胞,免疫细胞化学及WB检测均显示稳定转染真核表达载体pcDNA.3.1/myc-His(-)A-HINT1的A375单克隆细胞有更高的HINT1蛋白的表达。结论:成功构建了pcDNA.3.1/myc-His(-)A-HINT1真核表达载体,并获得稳定转染且能高表达HINT1的单克隆A375细胞。 展开更多
关键词 组氨酸三聚体核苷结合蛋白1 黑色素瘤 真核表达 稳定转染
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Hint2促进乳腺癌细胞株MCF7对紫杉醇注射液的敏感性 被引量:1
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作者 蔡少鑫 陈成 +4 位作者 杨熹 邓豫 李兆明 李小兰 胡俊波 《医药导报》 CAS 北大核心 2013年第4期442-445,共4页
目的探讨高表达三联组氨酸核苷酸结合蛋白2(Hint2)增强人乳腺癌细胞株MCF7对紫杉醇注射液敏感性的影响。方法构建高表达Hint2的载体pCMV-HA-Hint2并转染MCF7细胞,通过免疫荧光和Western blot方法检测Hint2的表达,采用噻唑蓝(MTT)法检测... 目的探讨高表达三联组氨酸核苷酸结合蛋白2(Hint2)增强人乳腺癌细胞株MCF7对紫杉醇注射液敏感性的影响。方法构建高表达Hint2的载体pCMV-HA-Hint2并转染MCF7细胞,通过免疫荧光和Western blot方法检测Hint2的表达,采用噻唑蓝(MTT)法检测高表达Hint2后MCF7细胞对紫杉醇注射液的敏感性,采用流式细胞AnnexinV方法检测细胞凋亡。结果 pCMV-HA-Hint2转染36 h后,细胞的Hint2基因表达明显增加,5μmol.L-1的紫杉醇注射液处理24 h后,Hint2高表达组细胞活性为33.78%,而对照组细胞活性为44.12%。结论 Hint2高表达能显著增加MCF7细胞对紫杉醇注射液的敏感性。 展开更多
关键词 紫杉醇注射液 三联组氨酸核苷结合蛋白2 乳腺癌 MCF7
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HINT1对人黑素瘤细胞A375增殖和凋亡的影响 被引量:2
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作者 关杨 姜祎群 +3 位作者 高莹 陈浩 曾学思 孙建方 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期10-13,共4页
目的探讨HINT1基因对人黑素瘤细胞A375增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法应用构建的pcDNA.3.1/myc-His(-)A-HINT1真核表达载体,建立稳定转染且能高表达HINT1的A375细胞模型。用MTT法检测细胞增殖活性变化,流式细胞仪检测细胞... 目的探讨HINT1基因对人黑素瘤细胞A375增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法应用构建的pcDNA.3.1/myc-His(-)A-HINT1真核表达载体,建立稳定转染且能高表达HINT1的A375细胞模型。用MTT法检测细胞增殖活性变化,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率,TUNEL法检测细胞凋亡。分光光度法检测Caspase3,Caspase8及Caspase9的相对活性。Western印迹法检测bcl-2、bax、细胞色素C及p53的表达。结果与空载体-A375及未转染A375细胞相比,HINT1-A375细胞生长速度明显减慢(P〈0.05);G1期细胞增多(73.17%±3.99%,F=25.65,P〈0.05),S期细胞减少(16.75%±1.62%,F=75.48,P〈0.01),细胞出现明显的晚期凋亡(23.57%±9.58%,F=11.71,P〈0.01)。TUNEL法显示凋亡阳性细胞百分比(12%±1%)显著增高(F=358.02,P〈0.01);Caspase9(0.45±0.03,F=135.62,P〈0.01)和Caspase3表达(0.46±0.04,F=90.28,P〈0.01)升高。凋亡相关蛋白bax、细胞色素C及p53表达增加,bcl-2表达降低。结论高表达HINT1可抑制A375细胞的增殖,促进其凋亡,细胞周期出现G。期阻滞,提示HINT1可能是人黑素瘤的抑癌基因。 展开更多
关键词 肿瘤细胞 培养的 黑色素瘤 细胞增殖 细胞凋亡 组氨酸三聚体核苷结合蛋白1
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Hint1诱导胃癌化疗耐药的临床观察及分子机制研究 被引量:2
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作者 魏晓为 周琎 +2 位作者 洪灵芝 吴晓敏 陈锦飞 《武警后勤学院学报(医学版)》 CAS 2015年第12期933-937,共5页
【目的】观察组氨酸三聚体核苷结合蛋白1基因(Histidine triad nucleotide binding protein 1 gene,Hint1)对胃癌患者化疗疗效的影响并初步研究其可能机制。【方法】收集临床胃癌及癌旁组织,检测Hint1基因及蛋白表达并评估与化疗疗效的... 【目的】观察组氨酸三聚体核苷结合蛋白1基因(Histidine triad nucleotide binding protein 1 gene,Hint1)对胃癌患者化疗疗效的影响并初步研究其可能机制。【方法】收集临床胃癌及癌旁组织,检测Hint1基因及蛋白表达并评估与化疗疗效的相关性,随后建立Hint1沉默胃癌细胞株,MTT观察沉默组及对照组对顺铂的敏感性,,免疫荧光检测DNA双链断裂(DNA double strands breaks,DSB),蛋白印迹测定共济失调毛细血管扩张综合征突变基因(ataxia telangiectasis mutated,ATM)-周期素依赖性激酶2(Cyclin-dependent kinase 2,Chk2)信号通路。【结果】Hint1肿瘤组织低表达组患者化疗有效率达82.35%,而非低表达组仅为61.54%,细胞实验显示沉默Hint1后胃癌细胞对顺铂敏感性增加,DSB损伤持续时间延长,ATM-Chk2活性显著低于对照组。【结论】Hint1可能通过调控ATM-Chk2信号通路,参与DSB损伤修复,降低胃癌化疗的敏感性。 展开更多
关键词 组氨酸三聚体核苷结合蛋白1基因 胃癌 化疗耐药 DNA损伤
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HINT1对人黑素瘤A375细胞裸鼠皮下异种移植瘤模型肿瘤生长及凋亡的影响
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作者 关杨 徐秀莲 +3 位作者 刘毅 李阿梅 姜祎群 孙建方 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期829-832,共4页
目的 探讨组氨酸三聚体核苷结合蛋白1(HINT1)对人黑素瘤A375细胞裸鼠皮下异种移植瘤模型肿瘤生长及凋亡的影响.方法 三组裸鼠随机皮下接种HINT1-A375、neo-A375及未转染的A375细胞,观察各组移植瘤的生长情况,计算成瘤率.组织病理切片... 目的 探讨组氨酸三聚体核苷结合蛋白1(HINT1)对人黑素瘤A375细胞裸鼠皮下异种移植瘤模型肿瘤生长及凋亡的影响.方法 三组裸鼠随机皮下接种HINT1-A375、neo-A375及未转染的A375细胞,观察各组移植瘤的生长情况,计算成瘤率.组织病理切片观察移植瘤组织形态学改变,并应用TUNEL法检测移植瘤组织中细胞凋亡情况.结果 三组裸鼠皮下异种移植瘤成瘤率均为100%.HINT1组移植瘤生长速度慢,接种后18 d移植瘤生长速度显著低于neo组及A375细胞组(P<0.01).HINT1组、neo组及A375细胞组肿瘤重量分别为(0.04±0.00)g、(0.23±0.00)g、(0.29±0.03)g;肿瘤体积分别为(0.06±0.04)cm^3、(0.34±0.15)cm^3、(0.43±0.19)cm^3.HINT1组肿瘤重量及体积均显著低于neo组及A375细胞组(P值均<0.01).组织病理结果显示,与neo组及A375细胞组相比,HINT1组肿瘤团块较小,细胞异形小,病理性核分裂象少见,瘤团内未见大片坏死灶.HINT1组中平均凋亡细胞百分比为12.87%±1.18%,显著高于neo组(3.22%±0.49%)及A375细胞组(3.00%±0.53%)(P值均<0.01).结论 高表达HINT1可显著抑制A375细胞裸鼠皮下异种移植瘤模型肿瘤的生长,促进其凋亡,提示HINT1基因可能是人黑素瘤的抑癌基因之一. 展开更多
关键词 组氨酸三聚体核苷结合蛋白1 黑色素瘤 实验性 基因 肿瘤抑制 细胞凋亡
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非小细胞肺癌组织miR-148a-3p、Hint1 mRNA表达水平与患者预后的相关性分析
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作者 张伟萍 应海峰 +2 位作者 周灵芳 龚柳阳 徐有祖 《中国卫生检验杂志》 CAS 2022年第18期2190-2194,共5页
目的检测非小细胞肺癌组织中微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)、组氨酸三聚体核苷结合蛋白1(Hint1)信使核糖核酸(mRNA)表达水平,并分析其与患者预后的关系。方法选取2014年6月—2016年10月于浙江省台州医院就诊的86例非小细胞肺癌患者,术... 目的检测非小细胞肺癌组织中微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)、组氨酸三聚体核苷结合蛋白1(Hint1)信使核糖核酸(mRNA)表达水平,并分析其与患者预后的关系。方法选取2014年6月—2016年10月于浙江省台州医院就诊的86例非小细胞肺癌患者,术中收集患者肺癌组织和配对的癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测所有组织miR-148a-3p、Hint1 mRNA表达水平,分析肺癌组织miR-148a-3p、Hint1 mRNA表达水平与患者临床病理特征的关系及二者之间的相关性,Kaplan-Meier法分析肺癌组织miR-148a-3p、Hint1 mRNA表达水平与患者5年总生存率的关系;多因素logistic回归分析影响非小细胞肺癌患者预后的危险因素。结果肺癌组织miR-148a-3p表达水平高于癌旁组织(P<0.05),Hint1 mRNA表达水平低于癌旁组织(P<0.05);无淋巴结转移患者肺癌组织miR-148a-3p表达水平低于有淋巴结转移患者,Hint1 mRNA表达水平高于有淋巴结转移患者(P<0.05);I期~Ⅱ期患者肺癌组织miR-148a-3p表达水平低于Ⅲ期患者,Hint1 mRNA表达水平高于Ⅲ期患者(P<0.05);肺癌组织miR-148a-3p与Hint1 mRNA表达水平成负相关(P<0.05);肺癌组织miR-148a-3p高表达、Hint1 mRNA低表达是非小细胞肺癌患者不良预后的危险因素(P<0.05)。结论非小细胞肺癌组织中miR-148a-3p表达上调、Hint1 mRNA表达下调,与患者临床病理特征和预后密切相关,可能成为新的肺癌治疗靶点。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌组织 微小RNA-148a-3p 组氨酸三聚体核苷结合蛋白1 临床病理特征 预后
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Hint1基因抑制HepG2细胞AP-1转录因子活性的实验研究 被引量:1
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作者 戈佳云 王琳 +2 位作者 陆晓青 李晓 吴涛 《中华普通外科杂志》 CSCD 北大核心 2009年第8期663-666,共4页
目的探索体外过表达Hint1基因对人肝肿瘤HepG2细胞AP-1转录因子活性的影响。方法分子克隆获得Hint1基因序列,构建pHA—Hint1重组融合基因表达载体。阳离子脂质体介导,pHA—Hint1转导人肝母细胞瘤HepG2细胞,RT—PCR和Western blot检测... 目的探索体外过表达Hint1基因对人肝肿瘤HepG2细胞AP-1转录因子活性的影响。方法分子克隆获得Hint1基因序列,构建pHA—Hint1重组融合基因表达载体。阳离子脂质体介导,pHA—Hint1转导人肝母细胞瘤HepG2细胞,RT—PCR和Western blot检测HepG2细胞中外源HA—Hintl表达。pHA—Hint1质粒、启动子荧光素酶报告质粒AP-1/Luc及巨细胞病毒-β-半乳糖酶报告质粒(β—gel)共转导HepG2细胞。36h后测定荧光素酶活性及β—gel活性。结果重组质粒经EcoR I和BamH I双酶切,获约100bp特异条带,测序证实成功构建pHA—Hint1表达载体。pHA—Hint1及空载体pcDNA3/HA转导HepG2细胞,半定量RT-PCR结果显示pHA—Hint1组Hint1 mRNA表达高于空载体组(t=3.89,P〈0.05);Western blot结果显示pHA-Hint1组HA标签蛋白表达高于空载体组(t=3.12,P〈0.05)。AP-1转录因子活性检测结果:pHA—Hint1终浓度为0μg/ml,0.5μg/ml,1.0μg/ml,1.5μg/ml,2.0μg/ml时,AP-1转录因子相对活性(10^6)为:5.12±0.25、4.24±0.74、3.43±0.31、2.62±0.48、2.09±0.21。随着pHA—Hint1浓度增加,荧光素酶活性呈明显下降,当pHA—Hint1浓度达到1.5μg及2.0μg时,差异有统计学意义(F=72.009,P〈0.05)。结论过表达Hint1基因可抑制HepG2细胞AP-1转录因子活性。 展开更多
关键词 肝肿瘤 转录因子AP-1 组氨酸核苷结合蛋白1
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