恶性疟原虫HRP-Ⅲ基因的克隆及序列分析

目的 克隆并测定恶性疟原虫海南 (FCC1/ HN)株 HRP- 基因序列 ,比较 FCC1/ HN株与国外分离株 HRP- 基因序列的差异。方法 根据 HRP- 基因已知序列设计合成一对引物 ,应用 PCR技术从 FCC1/ HN株基因组 DNA中扩增 HRP- 基因。通过定向克隆 ,构建真核表达重组质粒 pc DNA3- HRP- 。阳性克隆的重组质粒经酶切及 PCR鉴定后 ,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定。应用分子生物学软件进行不同分离株 HRP- 基因序列的同源性比较。结果 PCR扩增得到特异的 FCC1/ HN株 HRP- 基因序列。酶切及 PCR鉴定获得了正确的 pc DNA3- HRP- 重组质粒。测序表明 ,恶性疟原虫 FCC1/ HN株 HRP- 基因全长 80 2 bp,包含一个内含子 ,编码 2 2 4个氨基酸。序列分析表明 ,我国恶性疟原虫 FCC1/ HN株与国外的 Itg2、FC2 7及 IMTM2 2株 HRP- 基因序列有较高的同源性。 结论 成功克隆恶性疟原虫 FCC1/ HN株 HRP- 基因。序列测定及同源性分析表明 ,FCC1/ HN株与其它分离株的 HRP- 基因序列有高度的同源性。