D-氨基酸营养缺陷型减毒鼠伤寒沙门氏菌口服疫苗的构建与评价

目的研究D-谷氨酸和D-丙氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌的安全性和免疫原性,探讨D-氨基酸营养缺陷株作为口服减毒活疫苗或载体的可行性.方法通过聚合酶链式反应(PCR)扩增并测序进行基因型分析,同时利用生长曲线实验、扫描电镜和透射电镜观察菌株生长状态和形态,确认敲除相应基因后D-氨基酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌表型稳定;药敏试验探讨外源补充D-氨基酸后,营养缺陷株对作用于细胞壁的青霉素和氨苄青霉素的敏感性;安全性评价有设置不同免疫剂量攻毒,脏器病理切片,小鼠活体成像,菌株计数和粪便16s rRNA全长测序,以检测D-氨基酸营养缺陷型菌株的定植和侵袭能力;免疫小鼠测抗体滴度检测疫苗引起的免疫应答,免疫后攻毒测定D-氨基酸营养缺陷株的保护效力.结果D-氨基酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌生长稳定,口服有效减毒,在小鼠体内停留时间缩短,激发的炎症反应较低.尤其是D-谷氨酸营养缺陷株,即使在外源补充D-谷氨酸的条件下耐药性也明显降低,既减少了对小鼠机体的损伤又能激发有效的保护性免疫应答.结论D-谷氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌有希望作为减毒活疫苗或载体递送抗原,预防病原体感染.

asdA缺陷型减毒鼠伤寒沙门氏菌载体协助外源蛋白在Caco-2细胞和鸡小肠细胞中的表达

目的测试1株asdA缺陷型鼠伤寒沙门氏菌作为潜在疫苗载体在体内及体外的外源蛋白传递能力。方法以含真核表达质粒pIRES-eGFP的asdAΔS129感染人结肠癌细胞Caco-2,在添加DAP的情况下检测其对绿色荧光蛋白表达的调节;以该株细菌感染15d龄幼鸡,检测鸡小肠绿色荧光蛋白的表达。结果成功构建asdAΔS129-pIRESeGFP,在感染后的Caco-2细胞中检测到绿色荧光蛋白表达,且与DAP用量呈量效关系;在感染后第3d和第4d的幼鸡小肠均检测到绿色荧光蛋白表达,且表达自十二指肠向结肠发展。结论 asdA缺陷型减毒株能传递外源蛋白基因,并证实有外源蛋白表达,为特异性疫苗呈递和肿瘤治疗研究提供了潜在候选载体。

三硝基甲苯及其代谢产物的Ames试验

本文对三硝基甲苯(TNT）及其代谢产物4—氨基2，6—二硝基甲苯（4A），2—氨基4，6—二硝基甲笨(2A)、2，4—二氨基6—硝基甲苯（2，4—DA)、4，4′—偶氨2，2′，6，6′—四硝基甲苯(4，4′—AZ)、4—羟氨基2,6—二硝基甲苯(4—HA)进行了Ames试验，选用TA97、TA98、TA100、TA102 4种组氨酸缺陷型鼠静伤寒沙门氏菌株，

托品酸的致突变机制研究

目的:研究托品酸的致突变机制。方法:采用鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验,设5 000、2 500、1 250、625μg/皿4个剂量托品酸组、自发回变组、溶剂对照组和阳性对照[非代谢活化条件下:对二甲基氨基苯重氮磺酸钠(Dexon)50μg/皿、注射用丝裂霉素(MMC)0.5μg/皿;代谢活化条件下:2-氨基芴(2-AF)20μg/皿]组,每组6皿,各组在加和不加代谢活化系统S9的条件下,计数组不同致突变类型的氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102的回变菌落数。结果:与溶剂对照组和自发回变组比较,非活化条件下2 500、5 000μg/皿托品酸组和Dexon阳性对照组TA97、TA98、TA100菌株的回变菌落数均明显增加(P<0.01),MMC阳性对照组TA102菌株的回变菌落数明显增加(P<0.01);活化条件下2 500、5 000μg/皿托品酸组TA98菌株的回变菌落数明显增加(P<0.01),2-AF阳性对照组TA97、TA98、TA100、TA102菌株的回变菌落数均明显增加(P<0.01),其余条件的回变菌落数差异无统计学意义。结论:托品酸的致突变作用机制为诱导组氨酸靶基因中鸟嘌呤-胞嘧啶位点碱基置换和移码突变,活化条件的存在会使其诱变性减弱。

三种食品致突能力的研究

目的检测热干面、油条和方便面三种食品的致突变能力。方法采用Ames试验方法原理,用点试法和掺入法对三种食品进行定性和定量检测。结果在热干面组和油条组中,TA98发生回复突变菌落数的比值呈现阳性,且随受试物的浓度增大而明显增加,而方便面的表现不明显。用点试法进行检测时,热干面和方便面均出现阳性,油条的结果为阴性。而用掺入法进行检测时,热干面和油条均出现阳性,方便面的结果为阴性。结论三种食品均有不同程度的致突性能力。