组织型纤溶酶原激活剂突变体Reteplase(r-PA)基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

通过PCR的方法从人t PA基因上扩增到r PA基因的编码序列 ,并克隆到 pMD18 T载体中 ,DNA测序与文献报道完全一致。该基因被克隆到多用途表达载体pET2 8a中 ,重组表达载体r PA/ pET 2 8a转化E coliBL2 1(DE3) ,培养表达 ,SDS PAGE分析可见Mr 约 390 0 0的蛋白条带 ,约占细胞内总蛋白的 30 %以上。体外溶圈法测定活性表明该重组蛋白具有较好的纤溶活性。

阿托伐他汀及血管紧张素Ⅱ对人体脂肪组织白细胞介素6及Ⅰ型纤溶酶原激活剂抑制物分泌的影响

目的 观察不同部位脂肪组织的分泌功能 ,以及血管紧张素Ⅱ和他汀类药物对脂肪组织分泌白细胞介素 6和Ⅰ型纤溶酶原激活剂抑制物的影响。方法 检测体外培养的人内脏及腹部皮下脂肪组织在加用阿托伐他汀及血管紧张素Ⅱ作用前后白细胞介素 6和Ⅰ型纤溶酶原激活剂抑制物的分泌水平。结果 内脏脂肪组织分泌白细胞介素 6 (16 5 3± 339pg/ g组织 )高于皮下脂肪组织 (116 3± 733pg/ g组织 ,P <0 .0 1) ,内脏脂肪组织分泌Ⅰ型纤溶酶原激活剂抑制物 (10 0± 30ng/ g组织 )也高于皮下脂肪组织 (6 8± 14ng/ g组织 ,P <0 .0 1)。内脏及皮下脂肪组织分泌的白细胞介素 6与体质指数呈正相关 (r分别为 0 .85和 0 .6 9,P <0 .0 1)。内脏及皮下脂肪组织分泌的Ⅰ型纤溶酶原激活剂抑制物与体质指数呈正相关 (r分别为 0 .6 3和 0 .71,P <0 .0 1)。血管紧张素Ⅱ使内脏及皮下脂肪分泌白细胞介素 6分别增加 19%和 18% ,使内脏及皮下脂肪分泌Ⅰ型纤溶酶原激活剂抑制物分别增加 15 %和 14 % ;阿托伐他汀使内脏及皮下脂肪分泌白细胞介素 6分别减少 2 5 %和 2 1% ,使内脏及皮下脂肪分泌Ⅰ型纤溶酶原激活剂抑制物分别减少 17%和 16 %。结论 人体不同部位的脂肪组织分泌炎性细胞因子和纤溶物质存在差异 ,且与肥胖有关。血管紧张?

组织型纤溶酶原激活剂的发光分析法及其应用

本文建立了组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)活力的发光固相测定方法。用氨基乙基丁基异鲁米诺(ABEI)标记纤维蛋白原(Fg),在一定条件下,t-PA作用于固相(包被ABEI-Fg),产生纤维蛋白的降解产物。测定可溶性降解产物的发光强度,即能计算t-PA活性。该方法的标准曲线范围对t-PA为0.156IU/mL～40IU/mL。灵敏度可达0.156IU/mL。回收率为98.6％(n=27)。批内批间变异系数分别为6.6％及10.3％。该方法曾用于检测细胞培养液中提取t-PA样品及t-PA基因表达时培养液中t-PA的活性。也曾用于检测从组织中纯化t-PA样品及血浆中t-PA活性的测定。文中讨论了该方法与其它方法优缺点的比较。

重组组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)动脉溶栓结合丁苯酞治疗急性脑梗死的疗效分析

目的探究重组组织型纤溶酶元激活剂(t-PA)动脉溶栓结合丁苯酞治疗急性脑梗死的临床疗效。方法选取2017年1月~2018年1月我院收治的急性脑梗死患者116例,随机分为对照组和观察组各58例。对照组单独使用tPA动脉溶栓治疗,观察组在此基础上联合丁苯酞治疗。比较两组的治疗效果,治疗前后的神经功能缺损情况及生活活动能力情况,观察比较治疗后的不良事件发生情况。结果观察组治疗总有效率为89.66%,高于对照组的68.97%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组NIHSS评分、ADL评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,观察组NIHSS评分低于对照组,ADL评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗后不良事件发生率为6.90%,低于对照组的31.03%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在急性脑梗死的治疗中,采用t-PA动脉溶栓结合丁苯酞,能够更显著的提高治疗效果,改善神经功能缺损及生活活动能力情况,减少治疗后不良事件的发生,有效性及安全性均较为理想。

丹参川芎嗪注射液联合重组组织型纤溶酶原激活剂静脉溶栓对急性脑梗死患者NIHSS评分及血清神经元特异性烯醇化酶 髓鞘碱性蛋白水平变化的影响

急性脑梗死(αcute cerebral infarction,ACI)多由血液、血管或血液流动力学异常等因素造成脑部动脉狭窄或闭塞而发病,李玉艳等[1]研究指出,颅脑损伤患者的脑神经损伤严重程度与血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)、髓鞘碱性蛋白(MBP)表达水平密切相关。近些年随着医疗技术水平不断提高,静脉溶栓技术已成为早期ACI患者降低脑神经功能缺损程度的有效治疗措施[2]。

机械介入取栓术联合重组组织型纤溶酶原激活剂溶栓治疗对急性脑梗死患者血清因子水平及神经功能的影响研究

目的探讨机械介入取栓术联合重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)溶栓治疗对急性脑梗死患者血清超敏C反应对白(hs-CRP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平及神经功能的影响。方法选择我院于2020年1月至2021年10月期间收治的186例急性脑梗死患者为研究对象,随机分为2组,各包括93例患者,对照组患者的治疗方法选择阿替普酶静脉溶栓,观察组加用机械介入取栓术。比较2组治疗前后美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、Barthel指数(BI)评分及血清hs-CRP、NSE水平的变化,以及临床疗效。结果2组治疗后,NIHSS评分明显降低、BI评分升高,且观察组明显优于对照组(P<0.05);观察组治疗总有效率为88.2%,明显高于对照组的77.3%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,血清hs-CRP及NSE水平在2组均有明显下降,且观察组与对照组比较更低(P<0.05)。结论急性脑梗死选择机械介入取栓术联合rt-PA溶栓治疗,可明显降低血清hs-CRP、NSE水平,对神经功能改善有利。

重组组织型纤溶酶原激活剂对实验性缺血心肌的保护

目的 :探讨重组组织型纤溶酶原激活剂 (rt PA)对实验性心肌梗塞缺血损伤心肌的保护作用及其机制。方法 :以SD大鼠腹腔注射异丙肾上腺素 (5mg/kg)造成心肌缺血损伤模型 ,观察心肌含水量、心肌酶 (CK、LDH)释放量、丙二醛含量、心肌病理损伤程度以及rt PA的影响。结果 :模型组心肌含水量、心肌酶 (CK、LDH )释放量和丙二醛含量以及心肌病理损伤程度均显著增加 (P均 <0 0 1) ,如同时腹腔注射rt PA 10mg/kg则对上述指标均有不同程度减轻作用 (P均 <0 0 1)。结论 :rt PA对实验性心肌缺血损伤具有明显的保护作用 ,其机理主要是rt

人精子中尿激酶型纤溶酶元激活因子的免疫组织化学定位观察

本文采用免疫组织化学和免疫电镜对正常人精子中尿激酶型纤溶酶元激活因子（ＵＰＡ）的分布进行了定位观察。结果发现尿激酶型纤溶酶元激活因子分布在精子顶部体内外膜和精子头部浆膜上，且精子尾部浆膜上也有阳性着色，提示尾部浆膜上也有尿激酶型纤溶酶元激活因子的存在。推测精子中尿激酶型纤溶酶元激活因子可能与精子的运行、获能、顶体反应及受精有关联。

人组织型纤溶酶原激活剂牛乳腺表达的研究

目的：采用基因工程和转基因技术，以牛乳腺作为生物发酵器，生产天然高活性的人组织型纤溶酶原激活剂(tPA)，探索生物制药的新方法。方法：RT-PCR法克隆人tPA cDNA，经体外扩增、测序和酶切鉴定后，装入含酪蛋白基因β-casein启动子的乳腺特异性表达载体上，扩增、酶切、纯化。采用脂质体介导法，

组织型纤溶酶原激活剂cDNA的克隆

组织型纤溶酶原激活剂(tissue type plas-minogen activator,tPA)是一个由527个氨基酸残基组成的蛋白质,分子质量约69ku。 tPA是一种丝氨酸蛋白水解酶,在纤维蛋白存在的条件下,可使血浆纤溶酶原转变为纤溶酶;如果没有纤维蛋白的存在,它使纤溶酶原转变为纤溶酶的能力有限。当静脉给予药理剂量的tPA时,它与血栓处的纤维蛋白结合,同时把捕捉的纤溶酶原转变为纤溶酶,使纤维蛋白的溶解在血栓处发生,而并非全身性。这样可以减少全身性出血副作用,这也更是tPA优于尿激酶和链激酶之处。tPA临床上主要用于治疗血栓性疾病,如急性心肌梗塞,肺栓塞。

低剂量坎地沙坦对小鼠脑梗死使用重组组织型纤溶酶原激活剂溶栓的出血并发症的影响及机制

目的探讨低剂量坎地沙坦(Cand)对小鼠脑梗死用重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)溶栓出血并发症的影响及机制。方法160只小鼠随机分为对照组(56只)、rt-PA组(52只)、rt-PA+Cand组(52只)。用线栓法建立大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,rt-PA组和rt-PA+Cand组在MCAO开始后2 h股静脉注射rt-PA(10 mg/kg),rt-PA+Cand组MCAO术前口服Cand 2周[0.5 mg/(kg·d)]。术后24 h评价各组神经功能、脑出血转化情况、出血转化体积及伊文思蓝渗出浓度,定量反转录聚合酶连锁反应法检测脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Claudin-5基因表达变化,免疫荧光法检测MMP-9、Claudin-5蛋白表达变化,Western blotting法检测脑组织血浆激肽释放酶(Pkal)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体(AT1R)及缓激肽受体(B2R)蛋白表达变化。结果对照组及rt-PA+Cand组一般功能损伤评分、局灶功能损伤评分、出血转化评分、血红蛋白水平及伊文思蓝渗出浓度显著低于rt-PA组(均P<0.01)。与rt-PA组比较,对照组及rt-PA+Cand组MMP-9 mRNA相对表达量及阳性细胞率显著降低,Claudin-5 mRNA相对表达量及阳性细胞率显著升高(P<0.05~0.01)。对照组及rt-PA+Cand组Pkal、AT1R、B2R表达显著低于rt-PA组(P<0.05~0.01)。结论低剂量Cand可以一定程度上预防并减轻小鼠脑缺血再灌注后使用rt-PA的出血并发症,这可能是通过减少AngⅡ-AT1R/Pkal表达实现的。

缺血性脑卒中患者重组组织型纤溶酶原激活剂静脉溶栓24h内症状反复波动的列线图预测模型

目的 基于列线图模型分析缺血性脑卒中(CIS)患者重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)静脉溶栓24 h内发生症状反复波动的影响因素。方法 回顾性分析2016年1月—2021年6月苏州市第九人民医院收治的512例CIS患者的病历资料(内部验证组),用于建模和内部验证;另筛选苏州大学附属第一医院、苏州市相城人民医院的1 020例CIS患者的病历资料(外部验证组),用于外部验证。记录患者的基线资料,依据CIS患者接受rt-PA静脉溶栓24 h内症状反复波动发生情况分为发生组和未发生组。采用Logistic回归分析探讨CIS患者rt-PA静脉溶栓24 h内发生症状反复波动的影响因素。依据影响因素建立列线图,采用Bootstrap法进行模型验证,计算一致性指数(C-index),检验模型准确性;采用受试者工作特征(ROC)曲线的曲线下面积(AUC)和校准曲线评估预测模型的区分度和校准度。结果 512例内部验证组患者中,有140例患者发生症状反复波动,发生率为27.34%。Logistic回归分析结果显示,梗死部位(后循环)、年龄、溶栓前美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分和血糖水平是CIS患者rt-PA静脉溶栓24 h内发生症状反复波动的影响因素(OR>1,P<0.05)。构建的列线图预测模型校准度良好,C-index值为0.673,说明模型具有良好的区分度。对列线图模型进行内部验证,绘制ROC曲线发现,列线图模型预测CIS患者rt-PA静脉溶栓24 h内症状反复波动发生风险的AUC为0.788,有一定的预测价值。对列线图模型进行外部验证,绘制ROC曲线发现,列线图模型预测CIS患者rt-PA静脉溶栓24 h内症状反复波动发生风险的AUC为0.866,有较好的预测价值。结论 基于CIS患者rt-PA静脉溶栓24 h内发生症状反复波动的多种影响因素建立的列线图模型具有一定的应用价值,可为临床合理预测提供有效参考。

分析重组组织型纤溶酶原激活剂早期静脉溶栓对急性脑梗死的临床效果

目的:研究分析重组组织型纤溶酶激活剂早期静脉溶栓在急性脑梗死治疗的临床效果。方法:选取2018年5月-2019年5月于本院就诊的急性脑梗死(发病≤6 h)患者78例,应用随机数字表法分组为观察组和对照组,各39例。观察组应用重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)进行早期静脉溶栓治疗,对照组应用尿激酶(UK)进行溶栓治疗,比较两组凝血指标、神经功能缺损评分(NIHSS)、临床疗效以及不良事件发生率。结果:两组患者治疗后血小板均有降低,差异均无统计学意义(P>0.05);在治疗后2 h,观察组的D-二聚体、纤维蛋白降解产物水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后观察组NIHSS评分均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组不良事件发生率与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:重组组织型纤溶酶激活剂早期静脉溶栓治疗急性脑梗死有较好疗效,且存在一定安全性。

重组组织型纤溶酶原激活剂静脉溶栓治疗急性脑梗死的疗效

目的:为急性脑梗死患者提供重组组织型纤溶酶原激活剂(rtpA)静脉溶栓治疗,对临床疗效进行观察分析。方法:选择于某医院接受治疗的80例急性脑梗死患者为研究对象,采用随机数表法将其分入观察组(40例)和对照组(40例)。对照组应用常规治疗方案干预,而观察组则在常规治疗的同时,为其提供rtpA静脉溶栓治疗,对治疗效果进行分析对比。结果:观察组患者的治疗总有效率明显高于对照组(P<0.05)。治疗后两组患者的NIHSS评分明显低于同组治疗前(P<0.05),而GCS评分、Barthel评分则明显高于同组治疗前(P<0.05);治疗后各项评分相比较,观察组显著优于对照组(P<0.05)。结论:在开展常规治疗的同时,为急性脑梗死患者提供rtpA静脉溶栓治疗能让其神经功能缺损程度明显减轻,对其意识障碍程度进行显著改善,提升日常生活能力,治疗效果令人满意,值得推广。

江浙蝮蛇抗栓酶对肾病综合征患者血浆组织型纤溶酶原激活剂及其抑制物的影响

本文观察了江浙蝮蛇抗栓酶(Svate)对肾病综合征(NS)患者血浆组织型纤溶酶原激活剂(tPA)及其抑制物(PAI)活性的影响。结果示:Svate治疗后血浆PAI活性明显降低,tPA活性轻度升高。提示Svate可能通过影响tPA及PAI而改善NS患者的纤溶状态。

组织型纤溶酶原激活剂重组DNA的细菌克隆

采用Ca（2+）处理大肠杆菌RR1进行转化实验，使含组织型纤溶酶原激活剂（t－PA）cDNA的重组质粒转化入细菌进行克隆获得成功，经氨苄青霉素（AP）培养基筛选及限制性内切酶鉴定，证明转化子为阳性。

重组组织型纤溶酶原激活剂对缺血性脑卒中患者LDH、NO、MDA、SOD的影响

目的研究重组组织型纤溶酶原激活剂对缺血性脑卒中患者血清乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的影响。方法选取2012年3月至2018年8月来该院治疗的86例缺血性脑卒中患者为研究对象,将其分为对照组和治疗组,每组43例,治疗组采用重组组织型纤溶酶原激活剂结合阿司匹林治疗,对照组采用阿司匹林治疗。比较治疗后2组患者的临床疗效,检测血清LDH、NO、MDA、SOD水平。结果治疗组总有效率(90.70%)高于对照组(62.80%),LDH、NO、MDA水平低于对照组,SOD水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,治疗组基本痊愈、显效及有效患者的血清LDH、NO及MDA水平低于对照组,SOD水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。随着临床疗效的逐渐增强,患者血清中LDH、NO、MDA水平降低,SOD水平升高,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论重组组织型纤溶酶原激活剂对缺血性脑卒中患者有显著的临床治疗效果。

MiR-340经组织型纤溶酶原激活剂调控施万细胞的纤溶能力

目的:探讨microRNA-340(miR-340)对施万细胞纤溶能力的调控作用及作用的靶基因。方法:采用溶圈实验来检测miR-340对施万细胞纤溶能力的影响,用荧光素酶双报告基因系统确定miR-340与组织型纤溶酶原激活剂的靶向关系,用实时定量聚合酶链反应检测坐骨神经夹伤后组织型纤溶酶原激活剂mRNA和miR-340的表达变化。结果:miR-340能够抑制施万细胞的纤溶能力,并直接靶向作用于组织型纤溶酶原激活剂的3'UTR,坐骨神经夹伤后组织型纤溶酶原激活剂mRNA与miR-340的表达呈负相关性。结论:miR-340通过直接靶向组织型纤溶酶原激活剂的3'UTR,从而下调靶基因组织型纤溶酶原激活剂的表达抑制施万细胞的纤溶能力。

注射用重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂对比阿替普酶在急性ST段抬高型心肌梗死治疗中的疗效观察

观察比较注射用重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂、阿替普酶溶栓在治疗急性ST段抬高型心肌梗死中的临床疗效。方法:纳入2020年1月-2022年2月我院急诊科收入的52例急性ST段抬高型心肌梗死患者作为研究对象,随机分为对照组和观察组,每组26例。其中,对照组应用阿替普酶治疗,观察组应用重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂治疗。对比两组溶栓后90min的总有效率、心电图ST段回落率以及出血发生情况。结果:溶栓后90min,观察组的临床总有效率96.15%明显高于对照组的69.23%(P<0.05);观察组的的心电图ST段回落率明显高于对照组(P<0.05);而两组的鼻黏膜出血、消化道出血、牙龈出血发生率比较,未见明显的统计学差异(P>0.05)。结论:在急性ST段抬高型心肌梗死患者治疗中,应用重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂临床效果更佳,促进心电图ST段回落,且不增加出血发生率,具有一定安全性。