细胞免疫组织化学显微图像分析及实现

病理细胞免疫组织化学图像分析是显微图像分析中的一个重要内容,文章采用细胞形态学和病理学相结合的方法,将医学病理常用的手术切除组织切片经固定后,用Feulgen 染色,由图像采集系统将原始细胞图像存入计算机中,并对细胞图像进行分析、计算,得到阳性细胞的数量、面积分布、百分比分布、积分光密度以及阳性单细胞平均面积等参数,过程快速、准确,可应用于临床分析诊断.

体外培养的人骨髓间充质干细胞多能性特征——超微结构和细胞化学代谢分析

目的:探讨体外培养的人骨髓间充质干细胞多能性的超微结构和细胞化学代谢特征。方法:实验于2001-10/2003-03在吉林大学基础医学院病理生物学教育部重点实验室完成。标本来源于吉林省人民医院胸外科采集的穿刺骨髓血和胸外科手术切弃的肋骨,男7例,女3例,年龄>40岁5例,≤40岁5例(患者知情同意)。采用Percoll密度分离与贴壁筛选结合法,从人骨髓血中分离纯化人骨髓间充质干细胞,通过流式细胞分析、细胞化学检测和透射电镜观察对其多能性和超微结构及细胞化学变化。结果:①流式细胞分析显示,采用聚乙烯吡咯酮包被的二氧化硅壳粒的无菌胶体悬液分离剂与贴壁筛选法能获得高度同源的细胞群;原代人骨髓间充质干细胞的增殖生长速度与年龄因素无关。②阿利辛兰-过碘酸雪夫染色,苏丹黑-B和碱性磷酸酶染色均证明人骨髓间充质干细胞具有特殊的代谢特点,含有大量无酸性粘多糖,无自发分化现象,并维持未分化状态。③超微结构显示人骨髓间充质干细胞表面有许多微绒毛,含有丰富的细胞器和糖原形成糖原池。结论:原代人骨髓间充质干细胞增殖生长速度不受年龄因素影响,提示利用自体人骨髓间充质干细胞移植治疗疾病成为可能。该细胞群在体外能很好地维持未分化增殖状态,提示其具有多向分化潜能。

N-cadherin在非小细胞肺癌组织中的表达及临床生物学意义

目的:研究N cadherin(神经性钙黏附分子)在非 小细胞肺癌组织中的表达及临床生物学意义.方法:常规石 蜡包埋切片行免疫组织化学检测90例非小细胞肺癌组织中 N cadherin的表达.结果:90例非小细胞肺癌组织中N cad herin表达阳性的例数为30例(33.3%);34例Ⅲ期患者中N cadherin阳性率47.06%,56例Ⅰ、Ⅱ期患者中N cadherin阳 性率25%,差异具有显著性意义(P<0.05).有淋巴结转移 的患者中N cadherin阳性率42.31%,无淋巴结转移的患者中 N-cadherin阳性率21.05%,差异具有显著性意义(P< 0.05).N cadherin在肺腺癌和鳞癌中的表达无显著性差异 (P>0.05).N cadherin在非小细胞肺癌组织中的表达与其分 期、淋巴结转移有关.结论:N cadherin可能参与非小细胞肺 癌侵袭和转移.

细胞蜡块免疫组织化学与胸腔积液CRKL、MIC-1诊断恶性胸腔积液的价值

目的研究细胞蜡块免疫组织化学与胸腔积液Crk样蛋白(CRKL)、巨噬细胞抑制细胞因子-1(MIC-1)诊断恶性胸腔积液的价值。方法回顾性选取2020年2月至2021年2月于汕头市中心医院接受治疗的98例胸腔积液患者作为研究对象,其中良性58例,恶性40例。采用酶联免疫吸附法检测胸腔积液中CRKL、MIC-1水平,并对胸腔积液进行细胞蜡块免疫组织化学分析。比较良性组、恶性组患者各指标水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析细胞蜡块免疫组织化学与胸腔积液CRKL、MIC-1对于胸腔积液良恶性的诊断价值。结果以病理结果为金标准,细胞蜡块免疫组织化学诊断良性54例,恶性44例,诊断准确率为75.5%(74/98),敏感性、特异性分别为75.0%(30/40)、75.9%(44/58)。恶性组患者胸腔积液CRKL[2.84(2.17,3.98)ng/ml比1.88(0.94,2.62)ng/ml]、MIC-1[2.28(1.67,2.98)ng/ml比1.76(1.22,2.32)ng/ml]水平高于良性组,差异有统计学意义(Z=-4.57,P<0.001;Z=-3.09,P<0.001)。胸腔积液中CRKL诊断恶性胸腔积液的最佳临界值为2.33 ng/ml,曲线下面积(AUC)为0.76(95%CI为0.66~0.85),敏感性、特异性分别为67.5%(27/40)、74.1%(43/58)。胸腔积液中MIC-1诊断恶性胸腔积液的最佳临界值为2.10 ng/ml,AUC为0.74(95%CI为0.64~0.85),敏感性、特异性分别为60.0%(24/40)、82.8%(48/58)。胸腔积液中MIC-1、CRKL联合细胞蜡块免疫组织化学诊断恶性胸腔积液的AUC为0.83(95%CI为0.75~0.91),敏感性、特异性分别为85.0%(34/40)、70.7%(41/58)。联合诊断的敏感性和AUC显著高于CRKL、MIC-1单独检测(敏感性:χ^(2)=4.26,P=0.046;χ^(2)=6.27,P=0.012;AUC:Z=3.53,P<0.001;Z=4.14,P<0.001)。结论恶性胸腔积液患者胸腔积液CRKL、MIC-1处于高水平状态,可作为诊断恶性胸腔积液的指标,联合细胞蜡块免疫组织化学检测可提高对于恶性胸腔积液的诊断价值。

水蛭素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

为研究重组水蛭素对凝血酶诱导的兔胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制。选用第2～5代培养的血管平滑肌细胞,在与凝血酶(4.0 ku/L)共同孵育的条件下,分别给予水蛭素(6.0 ku/L)和肝素(6.0ku/L)进行干预。通过四唑盐比色实验检测细胞生长活性,流式细胞术检测细胞周期,免疫组织化学检测血小板生长因子和增殖细胞核抗原在血管平滑肌细胞中的表达。结果发现,重组水蛭素能明显抑制凝血酶诱导的平滑肌细胞增殖,其抑制作用可能与减低了血管平滑肌细胞对血小板生长因子和增殖细胞核抗原的表达有关。

ARD1在人大肠腺癌细胞SW620、LS-174T和HCT-8中的表达

目的检测大肠腺癌细胞SW620、LS-174T、HCT-8中ARD1(arrest defective1)的表达。方法应用RT-PCR、Westernblot和细胞免疫组织化学法测定ARD1在三株大肠腺癌细胞中的表达水平。结果 ARD1在三株大肠腺癌细胞中分别在mRNA水平、蛋白水平和细胞水平上均有表达。定量分析显示,ARD1在SW620中表达高于其他两株(P<0.05)。细胞免疫化学法染色显示,ARD1在三种大肠腺癌细胞株中,细胞膜及细胞浆中呈阳性表达,LS-174T细胞株中可见部分胞核呈阳性表达。结论 ARD1在HCT-8、LS174T和SW620三种腺癌细胞株中均有较高表达。

褪黑素联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用

目的:探讨褪黑素(MLT)、顺铂(DDP)单独及联合应用对人卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用,为MLT作为卵巢癌化疗辅助药物的研究提供理论依据。方法:将体外培养至对数生长期的卵巢癌SKOV3细胞分为对照组、单用MLT组(0.5、1.0和2.5mmol·L-1)、单用DDP组(25和50mg·L-1)、联合应用MLT及DDP组(MLT0.5mmol·L-1联合DDP25mg·L-1;MLT0.5mmol·L-1联合DDP50mg·L-1;MLT1.0mmol·L-1联合DDP25mg·L-1;MLT1.0mmol·L-1联合DDP50mg·L-1;MLT2.5mmol·L-1联合DDP25mg·L-1;MLT2.5mmol·L-1联合DDP50mg·L-1)。应用显微镜观察法、MTT法测定用药后卵巢癌SKOV3细胞的凋亡及增殖抑制率,并采用免疫化学方法测定卵巢癌SKOV3细胞用药后的血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果:显微镜下观察结果显示用药组细胞贴壁能力减弱、变小变圆、折光性减弱、细胞皱缩、核固缩、染色质凝集、核碎裂。联合用药组凋亡细胞增多;MTT法检测结果显示0.5、1.0和2.5mmol·L-1的MLT单独应用或与25和50mg·L-1的DDP联合应用均有抑制细胞生长作用(P<0.05),且随浓度升高抑制率升高,联合用药组两药物间均有协同作用,两药相互作用指数(CDI)<1;免疫化学染色法显示单用药组及联合用药组VEGF表达较对照组均降低,联合用药组VEGF表达明显降低(P<0.05)。结论:MLT对卵巢癌细胞生长有抑制作用,MLT联合DDP对VEGF表达下调有协同作用,提示适当浓度的MLT配伍DDP作用于卵巢癌细胞SKOV3可达到较好疗效。

前列腺癌细胞系中TMSG-1的表达及其意义

目的探讨一种新的肿瘤转移抑制基因TMSG-1(tumor metastasis suppressor gene 1,TMSG-1)在不同转移潜能前列腺癌细胞系中的表达及其意义。方法采用半定量RT-PCR、Western blotting、细胞爬片免疫组化PV-9000法来检测TMSG-1在人不同转移潜能前列腺癌细胞系PC-3M-2B4(低转移潜能)和PC-3M-IE8(高转移潜能)中的表达情况。结果 TMSG-1在PC-3M-2B4(低转移潜能)细胞系中的mRNA及蛋白表达量均明显高于在PC-3M-IE8(高转移潜能)细胞系中的表达,具有统计学意义(P<0.05)。结论 TMSG-1在低转移潜能前列腺癌细胞系中的表达明显高于在高转移潜能前列腺癌细胞系中的表达,证明它是一种肿瘤转移抑制基因,有可能成为判断前列腺癌细胞浸润及转移的重要预后指标。

抗人胆囊癌杂交瘤细胞系的建立及其特性鉴定

目的建立抗人胆囊癌杂交瘤细胞系,对其抗体特异性进行研究。方法以胆囊癌细胞系SGC-996免疫Balb/c小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术,获得稳定分泌抗SGC-996单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞。采用免疫细胞化学和免疫组织化学方法,检测所获单抗对胆囊癌,部分消化道肿瘤以及乳腺癌、膀胱癌等其他肿瘤的特异性;Western blot检测抗体所特异结合抗原的性质。结果杂交瘤细胞符合融合细胞核型特点,有较强的成瘤性。抗体的Ig亚类为IgG3。相对应的抗原主要表达在细胞质和细胞膜,细胞核阴性。抗体对胆囊癌有较强的免疫反应。结论建立抗人胆囊癌杂交瘤细胞系,能稳定分泌单克隆抗体,该抗体具有较高特异性。

SDF-1对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力作用的相关通路研究

目的:探讨PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002、MEK通路抑制剂PD98059对基质衍生因子-1(SDF-1)作用下卵巢癌细胞SKOV3的增殖、侵袭能力的影响,初步探讨SDF-1在卵巢癌中的相关作用通路。方法:细胞免疫化学法检测SDF-1不同作用时间及不同作用浓度对卵巢癌细胞中磷酸化Akt(p-Akt)和ERK(p-ERK)表达的影响。选取对数生长期细胞,分别加SDF-1 100ng/ml、CXCR4中和抗体10μg/ml、CXCR4抑制剂AMD3100 1μg/ml、LY294002 50μmol/L、PD98059 50μmol/L。MTT、Transwell细胞侵袭实验检测细胞的增殖、侵袭能力的变化。结果:随着SDF-1作用时间的延长,p-Akt、p-ERK蛋白表达水平增高;Akt、ERK蛋白的最佳活化时间为30min。作用30min时,随着SDF-1作用浓度的增加,p-ERK1、p-Akt蛋白表达水平增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。SDF-1可明显促进SKOV3细胞的增殖、侵袭能力(P<0.05);但加入CXCR4中和抗体、CXCR4抑制剂AMD3100、通路抑制剂PD98059、LY294002后,SKOV3细胞的增殖、侵袭能力无明显变化(P<0.05)。结论:SDF-1对卵巢癌SKOV3细胞的增殖、侵袭能力的增强作用可被PI3K/Akt信号通路抑制剂、MEK通路抑制剂所阻断。SDF-1可能通过Ras/ERK信号转导通路、PI3K/Akt信号通路发挥作用。

黄芩苷对牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞上ICAM-1表达调节的研究

目的 :观察黄芩苷对IL - 1β诱导的牙龈成纤维细胞 (humangingivalfibrobl -asts ,HGF)和牙周膜细胞 (peri odontalligamentcells ,PDLcells)上细胞间粘附分子 - 1表达的影响。方法 :应用体外细胞培养和细胞免疫组化及图像分析方法。结果 :正常牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞上细胞间粘附分子 - 1表达阴性或弱阳性 ;1μg/mLIL - 1β能诱导细胞间粘附分子 - 1在牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞上强阳性表达 ;0 .1μg/mL黄芩苷对IL - 1β诱导的牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞上细胞间粘附分子 - 1的表达有显著抑制作用 (P <0 .0 1)。结论 :黄芩苷可抑制IL -1β诱导的细胞间粘附分子 - 1在牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞上表达 。

毛细胞白血病变异型1例报道并文献复习

目的:通过对变异型毛细胞白血病(HCL-V)的临床及形态学特征探讨提高对诊断HCL-V的认识。方法:报告1例HCL-V的临床及形态学、细胞遗传学、免疫学特点,结合文献进行分析讨论。结果:患者间断发热2周入院,入院前曾在我院急诊科用希刻劳抗感染治疗,无明显效果,经骨髓细胞形态学、组织化学、相差显微镜、电镜、骨髓活检及免疫组化检查诊断为HCL-V。结论:明确诊断HCL-V仅依赖于骨髓细胞形态学较为困难,必须结合患者临床特征以及相关检查,才能明确诊断,进而得到及早治疗。

三七总皂甙对血管平滑肌细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的探讨三七总皂甙对血小板源生长因子刺激的血管平滑肌细胞增殖的影响及其可能机制。方法运用血小板源生长因子刺激兔体外血管平滑肌细胞增殖模型,通过四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞术及免疫细胞化学法观察三七总皂甙对其增殖活性、细胞周期及c-myc蛋白表达的影响。结果血小板源生长因子显著刺激血管平滑肌细胞增殖,三七总皂甙呈浓度依赖性抑制血管平滑肌细胞增殖,对血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖亦具有显著抑制作用;三七总皂甙作用下血管平滑肌细胞处于G1/G0期的细胞数增多,而G2/S期的细胞数显著减少,c-myc蛋白的表达亦降低。结论三七总皂甙对基础状态下及血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖均具有显著抑制作用,部分机制与其阻滞血管平滑肌细胞G1/G0期向S期转化以及下调c-myc基因表达有关。

STAT3和JNK在食管鳞状细胞癌中的表达及与临床病理特征的关系

目的探讨食管鳞癌组织中Stat3和Jnk的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学检测食管正常鳞状上皮(30例)、食管鳞状细胞癌(70例)中Stat3和Jnk的表达情况,分析其与食管鳞癌临床病理特征的关系。结果 Stat3在食管正常鳞状上皮和食管鳞状细胞癌中的阳性表达率分别为3.3%和72.9%,而Jnk的阳性表达率分别为0和55.7%。Stat3和Jnk在食管鳞状细胞癌中的阳性表达率均明显高于食管正常鳞状上皮(P<0.05)。食管鳞状细胞癌中Stat3、Jnk的表达与肿瘤浸润深度和淋巴结转移的情况之间差异均有统计学意义(P<0.05),但是两者与患者的性别、年龄及肿瘤的病理分级均无相关性(P>0.05)。结论随着食管癌的出现,Stat3和Jnk的表达增加,提示两者与食管鳞状细胞癌的发生发展有关,并且有助于判断肿瘤的侵袭和淋巴结转移情况。

新生鼠嗅鞘细胞培养的几种纯化方法的比较

目的对文献报道的嗅鞘细胞(OEC)纯化方法进行比较,寻找一种较优化的纯化方法,为细胞移植修复脊髓损伤实验研究提供高纯度的种子细胞。方法实验分别比较了3种纯化方法:差速贴壁法、差速贴壁法联合阿糖胞苷化学纯化法、差速贴壁法联合NGFRp75抗体纯化法纯化原代培养的新生SD大鼠的OEC,并对纯化的OEC的形态学和免疫学特性等进行观察。结果与另两种纯化方法相比,差速贴壁法联合NGFRp75抗体纯化法得到的OEC不仅纯度高而且细胞活性好。结论该实验找到了一种纯化OEC的较优化方法——差速贴壁法联合NGFRp75抗体纯化法,此法得到的细胞较符合细胞移植的要求,为下一步细胞移植修复脊髓损伤实验研究打下了细胞学基础。

CD44v6在甲状腺乳头状癌组织中的表达及诊断意义

探讨甲状腺乳头状癌中细胞黏附分子CD44v6的表达及其与甲状腺乳头状癌浸润和颈淋巴结转移的关系,指导临床筛选隐性颈淋巴结转移者,更加合理地应用功能性颈淋巴结清除术。回顾分析65例甲状腺乳头状腺癌患者的临床资料。应用免疫组织化学SP法检测65例甲状腺乳头状癌和同期16例甲状腺良性病变组织中CD44v6的表达情况。随访其中33例无颈淋巴结转移患者颈淋巴结情况,随访时间2~4年。65例甲状腺乳头状癌患者中,首诊颈淋巴结转移率为49.23%(32/65);临床无淋巴结转移患者随访后颈淋巴结转移率为33.33%(11/33)。淋巴结总转移率为66.15%(43/65)。CD44v6在甲状腺乳头状癌和甲状腺良性病变中的阳性表达率分别为56.92%和18.75%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);CD44v6在肿瘤浸润范围局限在包膜内组和侵及包膜和包膜外组中的阳性表达率分别为57.14%和75.00%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。CD44v6对甲状腺乳头状癌的鉴别诊断有一定的意义,可以作为预测甲状腺乳头状腺癌浸润转移能力的分子生物学指标之一,进一步指导临床合理地对c N0病例应用功能性颈淋巴结清除术。

生存素反义寡核苷酸对胃癌细胞株SGC-7901生长的影响

目的 观察生存素蛋白在胃癌细胞株SGC 790 1中的表达及转染不同浓度的生存素反义寡核苷酸(ASODN )对胃癌细胞SGC- 790 1生长的影响。方法 采用细胞免疫组织化学染色观察生存素蛋白在胃癌细胞株SGC- 790 1中的表达。将胃癌细胞株SGC 790 1分为8个组:空白对照组,脂质体转染组,2 0 0nmol/L、40 0nmol/L、60 0nmol/L无义链转染组,2 0 0nmol/L、40 0nmol/L、60 0nmol/L反义链转染组,转染48h后,采用四氮唑盐(MTT )比色法,测定各组的细胞生长抑制率,并采用流式细胞仪检测60 0nmol/L无义链转染组、60 0nmol/L反义链转染组细胞的凋亡率以及生存素蛋白表达。结果 显示生存素蛋白在胃癌细胞株SGC- 790 1的胞核和胞质中均有表达,但以胞核为主;各组生存素ASODN对胃癌细胞株SGC- 790 1有明显的抑制作用(P <0 .0 1) ,抑制作用呈浓度依赖性,60 0nmol/L反义链转染组抑制率为最高,达40 .0 % ,流式细胞仪检测表明生存素ASODN有明显的诱导细胞凋亡的作用,定量检测结果显示生存素ASODN可以下调生存素蛋白至8.8% (P <0 .0 1)。结论 不同浓度的生存素ASODN均能通过下调生存素蛋白表达来抑制胃癌细胞株SGC- 790 1的生长。

还氧化酶-2在宫颈鳞状细胞癌中的表达研究

目的探讨还氧化酶-2(COX-2)在宫颈鳞状细胞癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组化的方法对56例子宫颈鳞状细胞癌组织进行COX-2检测。结果肿瘤细胞中COX-2与肿瘤的分级分期呈高度正相关(P<0.01)。结论COX-2表达在宫颈鳞状细胞癌中对肿瘤的分级分期起到重要的作用。

人结肠癌细胞Dickkopf-1的表达水平及意义

目的检测六株结肠癌细胞中Dickkopf-1(DKK1)的表达并探讨其意义。方法在6株结肠癌细胞(SW480、SW620、HT29、LS174T、LOVO、HCT116)分别应用qPCR方法检测DKK1的mRNA表达水平。用Western blot方法和细胞免疫组化方法检测DKK1的蛋白表达情况。结果荧光定量分析显示,DKK1在HT29、HCT116中的表达高于其他四株细胞(P<0.05);Western blot显示,DKK1在HCT116、HT29中的表达同样高于其他四株细胞;细胞免疫组化染色显示,DKK1在六株结肠癌细胞株中呈阳性表达。结论 DKK1在6株人结肠癌细胞系中的表达具有差异性。