Wnt2在乳腺癌组织及患者血清中的表达及意义

目的检测乳腺癌细胞株(MDA-MB-231、ZR-75-30、MCF-7)、乳腺癌患者组织中Wnt2的表达,同时检测乳腺癌患者血清中Wnt2及CA-153表达量,并对二者的相关性进行分析。方法采用实时荧光定量PCR及Western blot技术检测MDA-MB-231、ZR-75-30、MCF-7中Wnt2 mRNA及蛋白水平;采用免疫组织化学对5例配对的癌旁组织、9例乳腺原位癌及9例侵袭性乳腺癌进行检测;同时采用ELISA检测15例健康成年女性、30例乳腺癌患者血清中Wnt2蛋白水平;电化学发光技术检测CA-153水平,并收集完整的病理资料与血清中Wnt2蛋白水平比较分析。结果 Wnt2在乳腺癌细胞株MDA-MB-231、ZR-75-30、MCF-7中未见表达;在乳腺癌组织上皮及间质细胞中呈高表达,而在配对的癌旁组织呈不表达或弱表达状态;30例乳腺癌患者血清中Wnt2及CA-153平均表达量显著高于健康成年女性(P<0.05),且Wnt2表达水平与CA-153呈正相关。结论血清Wnt2可与CA-153同时作为乳腺癌筛查的血清学辅助指标,有助于提高乳腺癌检出的灵敏度。

抗亨廷顿蛋白相关蛋白1氨基末端和羧基末端多肽抗体的制备

目的探讨抗亨廷顿蛋白相关蛋白1(HAP1)异构体——HAP1A和HAP1B的氨基末端和羧基末端多肽抗体的制备。方法对大鼠脑总RNA进行逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)获取HAP1氨基末端多肽(HAP1N)基因片段,并插入载体构建HAP1N原核表达质粒。提取原核表达的谷胱甘肽转硫酶(GST)-HAP1N末端、GST-HAP1AC末端和GST-HAP1BC末端的融合蛋白,免疫豚鼠和兔分别制备抗HAP1N、HAP1A和HAP1B抗体,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫印迹法和免疫组织化学技术对其特异性和效价进行鉴定和检测。结果构建的HAP1N原核表达质粒经酶切和DNA测序鉴定显示,目的基因插入部位正确,长度符合设计要求,为大鼠HAP1氨基末端片段基因。电泳结果显示,提取的3种融合蛋白相对分子质量大小与设计表达的目的蛋白相吻合。获得了豚鼠或兔分别抗3种融合蛋白的抗体,能与提取的融合蛋白特异性结合。豚鼠/兔抗HAP1N(TJ1NGP/TJ1NRB)可同时识别下丘脑提取组织的HAP1A和HAP1B,其特异性与国外的豚鼠/兔抗HAP1中间段序列抗体EM78相同,豚鼠抗HAP1AC(TJ1AcGP)特异性识别HAP1A,豚鼠/兔抗HAP1BC(TJ1BcGP或TJ1BcRB)特异性识别HAP1B;TJ1NRB、TJ1BcRB、TJ1NGP、TJ1AcGP和TJ1BcGP 5种抗体均能有效标记大鼠脑组织的HAP1,TJ1NRB、TJ1BcRB、TJ1NGP和TJ1BcGP免疫反应阳性物的分布与EM78完全一致,TJ1AcGP免疫反应阳性物主要以颗粒状形式定位在Stigmoid小体上,弥散分布产物极少;3种检测结果显示5种抗体的效价均达1 10 000以上。结论针对HAP1A和/或HAP1B氨基末端和羧基末端多肽抗体特异性识别HAP1A和/或HAP1B,可用于HAP1的研究;针对HAP1A/HAP1B氨基末端多肽抗体和HAP1B羧基末端多肽抗体可替代针对HAP1中间段多肽抗体。

气道黏液高分泌诱导因素的研究

目的比较不同因素对气道黏液高分泌的诱导作用,为动物模型制造和临床防治提供指导。方法Wistar大鼠30只随机分成3组:正常组雾化吸入生理盐水;对照组雾化吸入脂多糖(LPS);试验组雾化吸入中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组织化学和斑点印迹法分别测定支气管肺泡灌洗液中黏蛋白(MUC)的含量、气道上皮MUC5AC以及MUC5AC mRNA表达。结果试验组和对照组比正常组的MUC,MUC 5AC以及MUC5AC mRNA水平均显著增加(P<0.01);试验组MUC,MUC5AC以及MUC5AC mRNA表达较对照组明显增加(P<0.05)。结论LPS和NE均为黏液高分泌的有效诱导因素,但NE的黏液促分泌效应较LPS更显著,为强有力的诱导剂,是理想的黏液高分泌造模因子,也是临床防治的重要靶目标。

中国人皮肤型成人T细胞白血病/淋巴瘤一例报道

目的报道1例皮肤型成人T细胞白血病/淋巴瘤(cATLL)。方法检测皮肤损害的组织病理、直接免疫荧光和免疫表型的特点,同时应用酶联免疫吸附试验、蛋白印迹法以及聚合酶链反应分别检测患者外周血中嗜人T淋巴细胞病毒Ⅰ型(HTLV-Ⅰ)抗体和淋巴样细胞的HTLV-Ⅰ前病毒DNA。结果此例患者的皮肤损害多形,除表现丘疹、斑块外,并发生疱壁紧张或松弛的大疱。组织病理检查示表皮下水疱,疱底真皮乳头和疱边缘处小至中等大不典型淋巴样细胞浸润。不典型淋巴样细胞示CD45+、CD45RO+,直接免疫荧光检查阴性。外周血中HTLV-Ⅰ抗体阳性;淋巴样细胞中HTLV-Ⅰ前病毒DNA阳性。患者最后死亡,病程1年10个月。结论ATLL在我国并非极罕见,cATLL也存在,应加以警惕。