组织原位分析鼻咽癌细胞核DNA干系倍体及其异质性

组织原位分析鼻咽癌细胞核的DNA干系倍体及其异质性。收集42例鼻咽癌病例的归档蜡块,4μm、8μm连续组织学切片各一张。每个病例选取三个癌巢或肿瘤组织区域(共126个样本),使用TIGER细胞图像分析仪4μm组织切片测量鼻咽癌细胞核DNA的光密度等参数,8μm组织切片测量单个完整鼻咽癌细胞核的体积等参数,计算获得每个癌巢或肿瘤组织区域的以单个完整鼻咽癌细胞核的体积为单位的DNA含量(以体积积分光密度表述),以同一切片内正常鼻咽部上皮非基底细胞作为其内参照,计算其DNA干系倍体。结果显示:鼻咽癌细胞核的DNA干系倍体主要集中在1.76～3.00(DNA指数为0.88～1.50)之间,14个样本为DNA干系四倍体,仅2个样本为DNA干系亚二倍体;DNA干系倍体异质性率为66.67%。可得结论:(1)鼻咽癌DNA干系倍体主要在近二倍体与近四倍体之间;(2)鼻咽癌中存在DNA干系倍体异质性。

检测鼠痘组织原位杂交法的建立

目的 建立用组织原位杂交检测鼠痘的方法。方法 利用已知引物序列 ,以从感染鼠痘的陈旧组织中提取的病毒DNA做模板 ,在进行PCR扩增的同时用地高辛进行标记 ,将扩增的DNA片段作为探针用于组织原位杂交。结果 血清学检查确诊为鼠痘的标本中出现蓝紫色杂交阳性信号。阴性及特异性对照中未出现阳性信号。结论 组织原位杂交是一种适合基层病理检测单位的快速诊断方法。

人肝细胞癌DNA干系倍体异质性的组织原位分析

目的探讨人肝细胞癌DNA干系倍体异质性的临床意义。方法选取45例肝细胞癌患者的归档蜡块,分别制备4μm、10μm的连续组织学切片,利用细胞图像分析仪测量细胞核DNA干系倍体值及其形态学参数。在4μm切片上测量细胞核DNA的平均光密度,在10μm切片上测量单个完整细胞核的体积。经细胞图像分析仪计算获得以单个完整细胞核体积为单位的DNA总量,以同一切片内正常淋巴细胞作为内参照,计算其DNA干系倍体值和异质性率。统计学分析DNA干系倍体异质性率与组织学分级、瘤体大小、淋巴结转移以及AFP表达水平的关系。结果肝细胞癌DNA干系倍体异质性率与组织学分级、瘤体大小、AFP表达水平有关联,与淋巴结转移无关联。结论组织原位法分析肝癌DNA干系倍体异质性对肝细胞癌的诊断、恶性度判定及预测预后均具有重要的参考价值。

人源性肿瘤组织原位异种移植模型的特征及研究策略

人源性肿瘤组织原位异种移植模型(PDOX模型)能够更好地保持原发肿瘤的基因特征,在组织学、转录组、多态性和拷贝数变异中具有高的保真度,保留了原发瘤的微血管、基质成分和相互作用,以及肿瘤转移的特点,从而更加准确地预测临床患者的疾病预后,可以筛选出最合适的个体化治疗方案,在临床转化应用研究中显示出良好的前景。但由于小鼠和人体微环境仍有差别,原位移植瘤的形态结构与原发瘤仍存在一定差别,且原位移植并不能确保肿瘤发生转移。因此,构建个体化PDOX模型就需要分析移植瘤的组织形态和相关基因的表达,建立异种移植模型的数据库,共享异种移植模型的信息与研究结果,促进PDOX模型的转化应用。本文总结了PDOX模型的主要特征,概述了其优势以及局限性,并对应用进行了展望。

组织原位测算单个肝细胞核的DNA总量

目的再次探讨利用图像分析系统在组织切片原位测算以单个完整细胞(核)体积为单位的化学物质总量方法的可靠性。方法选取10只成年健康雄性昆明小鼠,每只小鼠按常规制片方法制作4μm和11μm两种厚度的肝组织切片各一张,改良Feulgen染色,应用细胞图像分析仪在组织原位测量和计算以单个完整二倍体、四倍体和八倍体肝细胞核体积为单位的DNA总量。结果组织原位测算的以单个完整二倍体、四倍体、八倍体肝细胞核体积为单位的DNA总量间的比值基本上呈2或4的倍数关系。结论应用细胞图像分析仪在组织切片原位通过合适的抽样和测量计算,可较准确地获得以单个完整细胞(核)体积为单位的化学物质总量。

植物基因表达的组织原位杂交和原位组织化学分析技术的改进

改良了组织原位杂交和原位酶组织化学分析的方法。主要改进有：原位杂交采用简化的ＦＡＡ固定程序，常规石蜡包埋，切片时采取液氮深冷冻；以随机引物法标记的ＤＮＡ代替转录标记的ＲＮＡ作探针，在保湿盒中进行杂交，而不用矿物油覆盖。组织化学分析中用含铁氰化钾的显色液进行ＧＵＳ染色后再包埋、切片的程序，代替先包埋、切片再显色的常规方法，可最大限度地保持酶活性的真实性。

组织原位杂交法研究输血传播病毒的致病性

目的 根据肝组织中TT病毒 (TTV)感染和复制状况探讨病毒的致病性。方法 以重组质粒为模板、地高辛素为标记物、对称和不对称PCR法分别标记TTV双链探针和 2条单链探针。原位杂交检测 5 6例肝组织 ,其中 6例TTV阳性者分别做单链探针杂交。结果 5 1例非甲～非庚型肝炎肝组织中TTV阳性率 2 7 5 % (14/5 1)。对照组 5例杂交阴性。TTVDNA主要见于肝细胞核内 ,受染细胞的病变和坏死不十分明显 ;在急性、慢性和重症肝炎及肝硬化组织中均有检出。用单链探针检测病毒基因链的结果与双链探针杂交结果一致 ,杂交信号强度相仿 ;2例肝组织TTV基因链与互补链同时存在 ,信号强度较弱。结论 TTV可能导致肝损伤 ,并在肝脏内有复制 ;

严重急性呼吸综合征相关冠状病毒检测探针制备及组织原位杂交

严重急性呼吸道综合征(SARS)的流行暴发引起了世界范围内对SARS病原体的分离及发病机制的研究.国内外多个研究机构报道一种新型的冠状病毒为SARS的致病因子[1-3].于部分患者的血液、呼吸道分泌物、粪便中检测到这种病毒的存在,或血清中具有该病毒的抗体产生[4-6].这对SARS的诊断和治疗都具有重要的意义.但直接于患者的病变组织中检测SARS病毒的报道较少.我们尝试从病变组织中检测SARS病毒.

原发性肝癌和癌旁组织中TTVDNA的原位杂交研究

目的:通过对肝癌组织、癌旁组织和肝炎组织中TTVDNA的分布情况分析,探讨TTV感染与原发性肝癌的发病关系。方法:选择符合全国诊断标准并感染乙型肝炎病毒的原发性肝癌病人的肝癌组织及癌旁组织和乙型肝炎肝组织切片各为87、87和39份。以地高辛标记物制备TTVDNA探针,原位杂交法检测组织切片中TTVDNA。结果:肝癌组织中浆型阳性率明显高于癌旁组织(P<0·05),但两者核型阳性率差异无统计学意义(P>0·05);肝炎组织中浆型和核型阳性率与癌旁组织比较差异无统计学意义(P>0·05,)。肝癌组织中浆型阳性率明显高于肝炎组织(P<0·01),相反,肝炎组织中核型阳性率明显高于肝癌组织(P<0·01);癌旁组织中浆型+核型阳性率与肝炎组织比较差异无统计学意义(P>0·05);肝癌组织和癌旁组织浆型+核型阳性率明显高于肝炎组织(P<0·01)。结论:有3种可能:①TTV感染与原发性肝癌发生存在一定关系,TTV感染肝细胞后在肝炎期主要分布于肝细胞核内,当肝细胞发生癌变后,TTV主要分布向肝细胞浆内转移;②浆型TTV感染可能与乙型肝炎病毒协同而易发生癌变;③TTV亦仅仅是乙型肝炎病毒的伴随病毒。

原位组织工程技术修复骨与软骨损伤:应用及存在的问题

背景:原位组织工程技术较传统的组织工程技术有明显的优势,在促进组织再生和骨、软骨修复方面具有较好的效果。目的:综述原位组织工程技术在骨与软骨修复中的应用及存在的问题。方法:应用计算机检索CNKI数据库、PubMed数据库及Elsevier数据库中发表的相关文献,中文检索词为"原位组织工程技术,骨,软骨,骨缺损,软骨修复,组织工程",英文检索词为"in situ tissue engineering,bone,cartilage,bonedefects,cartilagerepair,tissueengineering",选择2000年1月至2018年11月收录的原位组织工程技术在骨和软骨损伤修复中应用的相关文章,包括综述、基础及临床研究。结果与结论:原位组织工程技术是在传统组织工程技术基础上发展起来的一种用于再生和修复的技术,应用于骨损伤修复取得了良好的成绩,其不依赖外源种子细胞,通过各种新型支架材料并利用其自身特有的结构和理化性质,募集受损部位周边的干细胞迁徙到损伤部位,完成骨损伤的原位修复。原位组织工程技术为软骨损伤修复提供了新的思路和方向,在软骨损伤修复中具有全新应用价值,其主要是利用植入的支架材料来诱导局部微环境,诱导周边细胞迁移到病损部位而发挥修复作用。

系统性红斑狼疮组织原位记忆T细胞表达与皮损相关性研究

目的探讨SLE组织原位记忆T细胞与SLE皮损的相关性，为研究SLE患者皮损形成机制提供新思路。方法收集SLE患者及健康对照人群外周血及皮肤组织。流式细胞术检测外周血效应记忆T细胞和效应T细胞比例变化；免疫荧光观察SLE患者及健康对照皮肤中免疫复合物沉积；免疫组织化学法检测皮肤效应记忆T细胞的特征性表面标志CD103，分析组织原位记忆T细胞样细胞在SLE患者及健康对照皮肤中的表达。数据分析采用两独立样本t检验。结果与健康对照相比，SLE患者外周血中CD4＋组织原位记忆T细胞、CD4＋效应T细胞、CD8＋效应记忆T细胞、CD8＋效应T细胞在外周血T细胞亚群所占比例均升高，差异有统计学意义（12.6±3.4和8.2±2.5，t=-3.15，P〈0.05；2.5±1.5和1.3±0.8，t=-2.79，P〈0.05；15.3±3.6和7.0±3.0，t=-6.22，P〈0.05；13.1±5.4和3.7±1.3，t=-7.36，P〈0.05）；与健康对照相比，SLE患者CD4＋效应记忆T细胞、CD4＋效应T细胞、CD8＋效应记忆T细胞、CD8＋效应T细胞在外周血中的比例均升高，差异有统计学意义（8.4±2.7和5.8±2.0，t=-2.74，P〈0.05；1.6±1.0和0.8±0.5，t=-2.84，P〈0.05；10.4±3.6和5.3±2.4，t=-4.03，P〈0.05；8.2±4.1和2.6±0.8，t=-6.15，P〈0.05）；皮肤组织免疫荧光染色，在SLE患者表皮和真皮交界处存在免疫球蛋白（Ig）A、IgM、补体C3沉积，而健康对照皮肤中没有免疫复合物沉积；与健康对照相比，SLE患者皮肤组织苏木精-伊红（HE）染色切片中可见表皮、真皮层中浸润淋巴细胞明显增多，免疫组织化学染色显示CD4＋、CD8＋、CD103＋细胞数均较健康对照有不同程度增多。结论皮肤组织原位记忆T细胞局部定植可能与SLE皮损形成相关。

大网膜内植入自体脾组织与原位脾组织的结构比较

目的 :为临床应用自体脾组织植入术提供实验研究资料。方法 :大鼠分为实验组和对照组 ,前者切取 1 /2脾脏去包膜后切成 1mm× 1mm× 1mm大小均匀组织块 ,植入大网膜囊袋内。饲养 6个月后取 2组脾组织制片 ,光镜和电镜定性观察组织结构变化 ,计算机图像分析系统比较血管、红髓、白髓及胶原纤维的面密度 ;免疫组化法结合计算机图像分析测定神经肽 (NPY)阳性神经纤维密度。结果 :神经和边缘窦内皮细胞结构恢复较好 ,血管 ,白髓的面密度值较对照组减少 ,红髓与对照组相当 ,胶原纤维面密度增加。结论 :大网膜内植入的自体脾组织通过再生能恢复脾脏的主要组织结构 ,但不能完全恢复正常。

智能化水凝胶在原位心肌组织工程的应用

原位心肌组织工程在近年取得了突飞猛进的发展,它是指利用生物材料携带细胞移植于心肌梗死及其周边部位防治心肌梗死后心力衰竭,为细胞治疗提供了基质,提高了细胞的存活率,现就生物材料可注射水凝胶在原位心肌组织工程的应用作一综述。

原位杂交组织化学技术中信号扩增的研究进展

原位杂交组织化学(ISHH)技术是利用两条互补单链之间通过核酸分子碱基的氢键配对反应形成杂交体,然后再应用与标记物相应的检测系统,通过组织化学方法,在核酸原有的位置上把它显示出来。目前它已是一种比较成熟的技术,因其能对核酸进行原位检测而得到广泛的应用。ISHH的种类很多,其方法的改进主要在于检测信号提高上目前用于信号扩增的方法主要有原位PCR侧链系统、酪胺信号放大、催化报告分子沉淀、尾探针原位杂交和原位引物延伸标记这些方法的建立,不同程度的提高了信噪比使ISSH的灵敏性增加并得到广泛的应用。

金属基复合材料基体中原位组织与性能研究

系统研究了颗粒和短纤维增强铝基复合材料中基体的原位组织与性能。发现邻近增强体的基体中，位错密度显著高于其它部位，时效析出相的弥散度也较高。近界面区基体的显微硬度值比其它部位高得多。用热膨胀系数差（ＤＣＴＥ）和位错镜像力理论对以上结果进行了讨论。

5-HT受体亚型mRNAs在大鼠背根神经节和三叉神经节的表达—原位杂交组织化学法研究

应用原位杂交组织化学技术观察了大鼠背根节和三叉神经节内 5 -HT2 、5 -HT3 、5 -HT4、5 -HT5 、5 -HT6 和 5 -HT7受体亚型 m RNAs的表达。结果显示 :在背根节和三叉神经节中均观察到了 5 -HT2 A、5 -HT3 、5 -HT4和 5 -HT7受体亚型 m RNAs阳性细胞 ;两种神经节内上述受体亚型 m RNAs阳性细胞的百分比不同。 5 -HT3 受体亚型 m RNA阳性细胞的百分比最高 ,分别为 3 0 .4% (背根节 )和 3 2 .8% (三叉神经节 )。约 17.2 %和 14 .6 %的背根节和三叉神经节细胞分别呈 5 -HT2 A受体 m RNA阳性 ;而 5 -HT4和 5 -HT7受体亚型 m RNAs阳性细胞在此二节中的百分比分别为 14 .9%、2 4.7%和 11.2 %、9.8%。各受体亚型 m RNA阳性细胞均以中、小型节细胞为主。在各神经节内均未观察到 5 -HT2 B、5 -HT2 C、5 -HT5 和 5 -HT6 受体 m RNA的表达。上述结果提示 5 -HT2 A、5 -HT3 、5 -HT4和 5

组织原位记忆T细胞的分子调控机制

组织原位记忆T细胞(TRM)以其原位定植、长期存活及局部免疫的特征而得名,是免疫记忆细胞的又一重要成员。近年来,TRM在肿瘤及自身免疫性疾病中的作用日益趋显。效应T细胞外渗控制着TRM分化的第一步,协同局部微环境中的调节因子,从细胞和分子水平调控TRM分化、迁移和存活,当调控发生异常就会导致严重的病理变化。

EBER原位杂交结合CK免疫组织化学双染在诊断鼻咽癌中的应用价值

目的探讨全自动免疫组织化学仪行EB病毒早期RNA(Epstein-Barr virus early RNA,EBER)与细胞角蛋白(cytokeratin,CK)双染在鼻咽癌诊断中的应用价值。方法收集我院2018年1月至2019年12月鼻咽活检组织60例,根据诊断结果进行分组,A组为鼻咽非角化型未分化性癌30例,B组为上皮性病变30例。在VENTANA全自动免疫组织化学仪平台上分别对这两组病变进行CK免疫组织化学染色、EBER原位杂交、EBER原位杂交结合CK免疫组织化学(EBERCK)双染标记,其中双染再分为是否复染苏木素,比较染色情况。结果免疫组织化学CK单染A、B组均可见阳性细胞;原位杂交EBER单染A组鼻咽癌细胞阳性,B组表达呈阴性;EBER-CK双染A组鼻咽癌细胞呈双阳性,B组病变细胞呈CK阳性、EBER呈阴性,未见双阳性表达;EBER-CK双染复染苏木素后的表达与未复染苏木素的表达相同,但对比差,不易观察。结论全自动免疫组织化学仪行EBER-CK双染有助于鼻咽癌组织学诊断,不复染苏木素效果更佳,值得推广。

毒蕈碱受体在大鼠前庭神经核中表达的免疫组织化学与原位杂交研究

目的探讨毒蕈碱受体(muscarinicreceptor,M受体)在大鼠前庭神经核中(vestibularnucleus)的表达。方法以免疫组织化学及原位杂交组织化学的方法对M受体M1、M3、M4亚型在大鼠前庭神经核中的表达进行研究。结果免疫组织化学研究表明M1、M3、M4在前庭神经核中均有表达;原位杂交组织化学也证实了M3mRNA在前庭神经核中的表达。结论本实验首次表明在大鼠前庭神经核中存在着多种M受体亚型,但它们在前庭神经核中如何发挥功能性作用还需要作进一步研究。

原位杂交组织化学方法鉴定玉米根尖内源生长素对根冠特定基因正常表达的影响

系列浓度抗生长素(降固醇酸0.1μmol/L、1.0μmol/L、10μmol/L)处理3-天龄玉米幼苗根尖(约1cm)1天,利用原位杂交组织化学方法鉴定根尖内源生长素对根冠特定基因(CloneC103)表达产生的影响。实验结果表明:正常情况下,CloneC103在4-天龄玉米幼苗初生根根尖中心根冠外周强烈表达;降固醇酸有效抑制CloneC103正常表达,随浓度增加其抑制作用加强,尤其是10μmol/L降固醇酸仅使CloneC103在初生根中心根冠最外层微弱表达。由此表明玉米根尖内源生长素影响根冠特定基因CloneC103的正常表达;CloneC103在根冠的表达位置推测该基因正常表达可能与中心根冠外周的平衡石有关。