组织因子微颗粒的检测及其在出凝血异常中的临床意义

本研究应用流式细胞术(FCM)建立组织因子微颗粒的检测方法,并探讨其在出凝血异常中的临床意义。应用特异性荧光抗体CD142-PE标记组织因子,采用FCM建立组织因子微颗粒的检测方法。测定20例血栓性疾病患者及25例初治急性早幼粒细胞白血病(APL)患者治疗前后的组织因子微颗粒,观察组织因子微颗粒在各组患者中的变化。结果表明,20例血栓性疾病患者组织因子微颗粒〔(123.28±197.03)/μl〕明显高于20例健康对照组〔(33.27±16.14)/μl,P<0.05〕;25例APL患者治疗前组织因子微颗粒为(75.24±104.58)/μl,亦高于正常对照组(P<0.05),经过诱导治疗缓解后组织因子微颗粒水平明显下降至(34.24±25.20)/μl(P<0.01)。在这25例APL患者中,18例合并弥散性血管内凝血(DIC)患者的组织因子微颗粒在治疗前后有明显差异(P<0.05),7例未合并DIC患者治疗前后的组织因子微颗粒水平未见明显变化。结论:采用流式细胞术检测组织因子微颗粒可对血栓性疾病的诊断提供帮助,并对APL的DIC状况与疾病预后做出评估。

体外组织因子微颗粒的表达及其促凝活性的分析

目的体外细胞系培养刺激获得组织因子微颗粒(TF+MP)并对其促凝活性进行研究。方法用不同浓度脂多糖(LPS)刺激人急性单核细胞白血病细胞系(THP-1),梯度离心后重悬分离获得微颗粒(MP);在正常人去MP血浆中加入MP,采用凝血酶生成试验分别检测组织因子(TF)和磷酯酰丝氨酸(PS)的凝血酶生成能力;采用ZYMUPHEN MP-TF试剂盒检测TF阳性的MP中TF的促凝活性,选用0.45和0.65μm的滤膜滤过MP,分别检测直径<0.45和<0.65μm的MP颗粒的促凝活性。结果凝血酶生成试验和发色底物功能检测结果显示体外表达的MP具有促凝活性。凝血酶生成试验结果表明MP的凝血活性与LPS的刺激呈浓度依赖性增强。直径>0.65μm的MP颗粒具有较强的促凝活性。结论体外经THP-1单核细胞系培养表达MP具有一定的促凝活性。

人重组组织因子微颗粒的制备研究

采用磷脂酰胆碱(DOPC)、磷脂酰丝氨酸(DOPS)2种合成磷脂,按照6∶4、7∶3、8∶2的比例(摩尔比),分别以磷脂质量浓度为2.0%、2.5%、3.0%的混合溶液,超滤交换,制备9种双层磷脂微颗粒(MP),MP与人重组组织因子(rhTF243)脂化,得到人重组组织因子的磷脂微颗粒(rhTF243+MP)。经PT方法检测比较9种rhTF243+MP的凝血活性、稳定性及储存时间,确定最佳磷脂配比、浓度及制备工艺,制备具有稳定促凝血活性的rhTF243+MP。

微颗粒在血栓及其相关性疾病发生中的作用

微颗粒是从各种不同细胞膜上脱落下来的一类膜性小囊泡，通过细胞表面的刺激，激发细胞凋亡或激活，使微颗粒释放。微颗粒具有促凝、促炎症、促使血管生成和调节内皮功能等作用。现就微颗粒在血栓疾病或血栓相关性疾病中的重要作用及研究进展进行综述。