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大肠癌肿瘤相关成纤维细胞原代培养方法的优化 被引量:7
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作者 彭巍 徐小慧 +4 位作者 季江 苏玉飞 张钰明 吴永友 邢春根 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期954-957,共4页
目的比较大肠癌肿瘤相关成纤维细胞(CCAFs)的不同原代培养方法,筛选最佳培养条件。方法取新鲜直肠癌标本,以高浓度双抗低温处理后进行原代培养;12d细胞计数法比较酶消化法与组织块植入法的CCAFs培养效率;利用6d贴壁率及12d爬出细... 目的比较大肠癌肿瘤相关成纤维细胞(CCAFs)的不同原代培养方法,筛选最佳培养条件。方法取新鲜直肠癌标本,以高浓度双抗低温处理后进行原代培养;12d细胞计数法比较酶消化法与组织块植入法的CCAFs培养效率;利用6d贴壁率及12d爬出细胞数法比较不同组织块大小(1、8mm^3)、培养基种类(1640、DMEM、F12)、培养瓶材质(玻璃瓶、塑料瓶)与血清浓度(10%、20%)的培养效率;所获CCAFs行免疫荧光鉴定并绘制生长曲线;以SPSS18.0软件进行统计学分析。结果组织块植入法优于酶消化法,12d细胞计数分别为(9.75±0.91)×10^4个与(1.83±1.22)×10^4个(t=13.733,P〈0.01);12d细胞计数法提示高血清浓度(t=-3.549,P〈0.01),较大组织块(t=-1.115,P〈0.05)可增加细胞培养效率;与F12和DMEM比较,1640培养基具有更高细胞培养效率和性价比,其回归方程为:Y=10.68750—3.96528X22-2.00694X,+1.03472X4;培养瓶材质不影响细胞数量(t=-0.116,P〉0.05);6d细胞爬出率与培养瓶和培养基有关,回归方程为:Y=0.81367+0.20478X.-0.33312X引原代培养的CCAFs表达α-平滑肌肌动蛋白(α—SMA)及波形蛋白(Vimentin)。结论高浓度双抗低温处理组织标本,以含高浓度胎牛血清的1640培养基,采用大组织块植入法是CCAFs原代培养的优化方法,获得的CCAFs具有典型肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)特征。 展开更多
关键词 大肠癌相关肿瘤成纤维细胞 原代培养 培养条件 组织块植入法
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