诊断早期心肌缺血三种组织学染色方法的比较

目的 探讨检验早期心肌缺血的最佳组织学染色方法。方法 对 4 5例经尸体解剖病理诊断为冠心病的心肌组织分别进行HE染色 ,HBFP染色 ,Heidenhain染色 ,光镜下观察。结果 Heidenhain染色方法可以准确检验发病过程在 0 .5h内的缺血心肌纤维。结论 Heidenhain染色方法可使早期缺血的心肌纤维出现明显的反应 ,效果优于HE染色方法和HBFP染色方法 ,特异性强 ,操作简便易行 ,可以将其作为诊断早期心肌缺血的一个首选染色方法加以应用。

抗亲和素鼠单克隆抗体增强亲和素-生物素免疫技术和免疫组织学染色的敏感性

亲和素、生物素已应用于增加传统免疫酶方法的敏感性。但有时发现在检测微量抗原时，敏感性依然不够。为此，作者建立了几株抗卵清和素糖蛋白的鼠单抗，通过选择性扩大ABC复合物，增加底物信号，增强亲和素一生物素免疫测定法的敏感性。

不同组织化学染色在急性心肌缺血猝死鉴定中的应用研究

目的探讨不同组织化学染色方法在急性心肌缺血猝死心肌中的染色规律及其在法医学鉴定上的应用价值。方法采用HE染色、Nagar-Olsen染色(苏木精碱性复红苦味酸法)、Heidenhain染色(铁矾-苏木素-伊红染色)、Heidenhain氏苏木精法染色,对28例急性心肌梗死心肌和10例冠心病非心源性猝死心肌进行染色,并设10例正常心肌作为对照。结果 Nagar-Olsen染色、Heidenhain染色、Heidenhain氏苏木精法染色在急性心肌梗死心肌中阳性表达率分别为75%,54%,58%;在冠心病非心源性猝死心肌中阳性表达率分别为20%,10%和10%;在正常心肌组表达均呈阴性。上述三种方法在以上两组的阳性表达率比较未见差异(P>0.05)。但急性心肌梗死心肌组与非心源性猝死组及对照组阳性表达率比较差异有统计学意义(P<0.01)。其中在急性心肌梗死组中Heidenhain氏苏木精染色强阳性例数较高(12/14),Nagar-Olsen染色在梗死区边缘表现更显著。各组均行HE染色,显示在梗死区出现细胞核的改变,在非梗死区心肌纤维表现为细胞水肿,胞质红染,胞核无明显病变,与对照组心肌很难鉴别。结论 Nagar-Olsen染色、Heidenhain染色、Heidenhain氏苏木精染色在急性心肌缺血猝死诊断中均有应用价值,在实际工作中可以通过HE染色结合Heidenhain氏苏木精法染色以提高诊断率;通过HE染色结合Nagar-Olsen染色确定梗死区的范围。

人体脱细胞脂肪组织的制备及组织学评价

目的通过为人体吸脂来源的脂肪组织脱细胞,评估脱细胞脂肪组织的组织学成分,探讨其作为组织工程支架材料的可能性。方法采用改良的脱细胞方法为5例人吸脂来源的脂肪组织脱细胞,观察制备过程的大体形态,对脱细胞脂肪进行HE染色、Masson染色、Gomori染色、油红O染色、DAPI染色,并对脱细胞组织中残留的DNA、胶原蛋白及糖胺聚糖含量进行定量检测。结果本实验制备的脱细胞脂肪,外观呈不透明的乳白色,无固定形态。HE染色和DAPI染色无可见细胞成分残留,Masson染色可见胶原纤维,Gomori染色可见网状纤维存在,油红O染色无可见脂质残留。组织中残留的DNA含量微小,胶原和糖胺聚糖含量均有所保留。结论应用结合物理化学和酶学的脱细胞方法,可以为人体的吸脂来源脂肪组织脱细胞,得到的脱细胞组织去除了脂肪组织中的细胞及脂质成分,保留了脂肪组织细胞外基质的组成成分。

肾组织PASM-Masson染色技术

六胺银(Periodic Acid-silver Methe-namine,简称 PASM)染色法是肾脏病理诊断的重要组织学染色技术。多年来,我们运用 PASM 染色和 Masson 三色染色方法,对肾活检组织进行特殊染色,以观察肾脏病变组织的形态变化,效果较满意。由于分别染色,费时费片,PASM 染色色彩单调。我们设想将 PASM 套染 Masson,经过摸索取得令人满意的效果。PASM-Masson 套染法集两种染色之长。

构建组织工程肺的三种去垢剂对比研究

目的:评价新型去垢剂十二烷基醚硫酸钠(SLES)用于制备脱细胞肺支架的效果,探索构建组织工程肺的可行性。方法:SD大鼠取肺,经主肺动脉插入16 G灌注针头,悬挂在Langendorff灌注台上,分别灌注三种去垢剂:传统去垢剂脱氧胆酸钠(SDC)和十二烷基磺酸钠(SDS)、新型去垢剂SLES,联合核酸酶应用液,制备出三种脱细胞肺支架。

犬下颌牵张成骨不同时期六种染色方法的应用效果比较

目的比较六种染色方法在犬下颌牵张成骨早期、中期、后期的染色效果,为研究者选择合适的染色方法提供参考。方法选用1岁雄性比格犬,经麻醉后手术造模,分别在牵张成骨早期、中期、后期行安乐死后取牵张成骨区组织,脱钙切片后分别采用HE染色、Masson染色、亚甲基蓝-酸性品红染色、Von Kossa染色、改良茜素红S染色、改良番红O-固绿染色对切片进行染色,分析比较染色效果。结果HE染色可观察牵张成骨区基础结构。Masson染色颜色对比鲜明,结构清晰,可以清晰地区分胶原纤维与肌纤维,以及成熟骨质与新生骨质。改良番红O-固绿染色与亚甲基蓝-酸性品红染色在牵张成骨早期、中期的区分度不佳,但在牵张成骨后期可清晰区分新生骨组织与成熟骨组织。Von Kossa染色和改良茜素红S染色因标本已脱钙而效果不佳。结论对于牵张成骨区域的染色研究,Masson染色法在牵张成骨早期、中期、后期均有较好的染色效果。改良番红O-固绿染色和亚甲基蓝-酸性品红染色仅适用于牵张成骨后期。Von Kossa染色法和改良茜素红S染色法不适用于脱钙后的组织切片染色。

包埋后超薄切片银染色技术

过碘酸六次甲基四胺银染色法(以下简称银染色)是肾脏病理诊断的重要组织学染色技术,主要用于光镜水平的研究。有关电镜标本包埋后超薄切片银染色尚未见报道。我们经过摸索、实践,建立了包埋后超薄切片银染色技术,使之成为分析超微结构的一个重要技术手段。本文就该技术的特点及其价值介绍如下:

HE与Nagar-Olsen两种染色法观察大鼠急性缺血心肌

目的:通过HE与Nagar-Olsen两种染色法观察大鼠急性缺血心肌。方法:大鼠腹腔注射30U/kg垂体后叶素建立急性心肌缺血模型,通过心电图变化判断心肌缺血的发生发展,通过HE染色和Nagar-Olsen染色观察大鼠心肌组织形态学改变。结果:造模组通过腹腔注射30U/kg垂体后叶素,心电图显示二期T波低平、负正双向、倒置,P-R及Q-T间期延长;奥林巴斯显微镜下,心肌组织切片HE染色可见大量心肌纤维凝固性坏死,细胞质呈不规则粗颗粒状,细胞排列紊乱,间质重度水肿,伴中性粒细胞浸润;心肌组织切片Nagar-Olsen染色后可见缺血心肌红染,胞核不清晰,细胞间质水肿。结论:两种染色法均可观察到大鼠急性的心肌缺血改变。缺血心肌组织经HE染色后主要表现为胞质改变伴中性粒细胞浸润,Nagar-Olsen染色后红染程度深浅可反映心肌缺血的严重程度,有一定的不同之处。

兔激素性股骨头坏死的造模改进及结果评价

股骨头坏死动物模型的建立对临床上股骨头坏死的治疗具有重要意义。对目前最常见的兔激素性股骨头坏死的造模方法进行改进,并对改进后的造模结果进行评估,希望能够在降低造模动物死亡率的同时成功诱导股骨头坏死。选择周龄介于16~20周,体重介于2.8~3.2 kg的雄性新西兰大白兔90只,随机分为空白对照组、常规造模组和造模改进组3组。其中,空白对照组仅注射生理盐水;常规造模组在特定时间点注射脂多糖和甲基泼尼松龙;造模改进组在常规造模组的基础上辅以青霉素、雷尼替丁、地克珠利、肠道润滑剂和乳酶生干预。结果表明:造模改进组动物的死亡率(13.3%)远低于常规造模组(70%)。造模完成后的微型计算机断层扫描技术(Micro-CT)分析和组织学染色结果显示:造模改进组股骨头区域出现了早期股骨头坏死的特征,其骨体积、骨体积与组织体积比、骨密度、骨小梁厚度均显著低于空白对照组,而空骨陷窝个数相较于空白对照组则出现了显著提升,证明改进后的造模方法在降低死亡率的同时成功诱导了兔股骨头坏死。

丽纹攀蜥肌硬膜桥的存在及形态学特征

目的人肌硬膜桥为枕下头后小直肌、头后大直肌、头下斜肌及项韧带等与硬脊膜之间的致密纤维连接结构,具有重要的生理作用及临床意义。已有研究提出肌硬膜桥可能与脑脊液循环和慢性颈源性头痛有关。目前研究发现,哺乳动物中普遍存在肌硬膜桥这一结构,并且鸟类中的家鸡、岩鸽,爬行纲中的暹罗鳄、巴西龟都存在肌硬膜桥样结构。为进一步分析肌硬膜桥在不同纲目的结构形态差异,为其功能研究提供基础。本次研究以爬行纲蜥蜴目中最常见的丽纹攀蜥为实验对象,补充爬行纲肌硬膜桥的形态特点。方法采用大体解剖、厚断层切片、组织学切片染色等方法,对20只丽纹攀蜥的枕后区结构特点及肌硬膜桥样结构的存在情况进行观察。结果丽纹攀蜥枕后肌由融合的头背大直肌、头背小直肌、头前斜肌(我们定义为头背直肌)及头后斜肌构成。于寰枕间隙内,自头背直肌腹侧发出的片状致密纤维连接组织向腹侧走行,与硬脊膜紧密相连。于寰枢间隙内,自头后斜肌腹侧发出的致密纤维连接组织向腹侧走行,与硬脊膜紧密相连。且此致密纤维连接结构为具有极强双折光性的Ⅰ型胶原纤维。结论丽纹攀蜥的头背直肌、头后斜肌与硬脊膜之间存在致密的纤维连接结构,即肌硬膜桥样结构。此结构可能与丽纹攀蜥头颈部的活动密切相关,发挥与人类肌硬膜桥相似的生理功能。

金鱼草RADIALIS-like 1基因克隆与功能研究

MYB是植物中最大的转录因子家族之一,其中R3-MYB转录因子RADIALIS(RAD)在金鱼草(Antirrhinum majus)花发育过程中具有十分重要的作用。本研究对金鱼草基因组进行分析,发现1个与RAD结构相似的R3-MYB基因,将其命名为AmRADIALIS-like 1(AmRADL1)。进一步通过生物信息学预测基因功能,利用qRT-PCR分析AmRADL1在野生型金鱼草不同组织器官中的相对表达量,对过表达AmRADL1的转基因金鱼草进行形态学观察和组织学染色分析。结果表明,AmRADL1基因开放阅读框(open reading frame,ORF)长度为306 bp,编码101个氨基酸,具有典型的SANT结构域,C末端含有CREBmotif,与番茄(Solanum lycopersicum)SlFSM1同源性较高。qRT-PCR结果表明,AmRADL1在根、茎、叶和花中均有表达,其中在花中表达量较高;进一步分析其在不同花器官中的表达量差异,发现AmRADL1在心皮中表达最高。转基因金鱼草植株的组织学染色分析结果显示,与野生型相比,转基因植株的心皮细胞大小没有明显的变化,但心皮中胎座区域变小,细胞数目减少。综上所述,AmRADL1可能参与调控心皮发育,但在心皮中的具体作用机制还有待进一步研究。

体外传代培养兔关节软骨细胞的去分化现象

背景:兔是软骨组织工程研究中应用非常广泛的实验动物模型,关节软骨细胞的去分化现象已经被广泛认可。目的:观察体外传代培养过程中兔关节软骨细胞的去分化现象。方法:将从新西兰大白兔膝关节分离获取的原代软骨细胞进行传代培养至第7代,对细胞生长、形态、基质分泌以及基因表达等方面分别采用细胞计数,显微镜观察,F机动蛋白染色、番红O染色,糖胺聚糖定量测定以及半定量聚合链式反应进行鉴定和比较。结果与结论:光学显微镜下,兔关节软骨细胞在体外传代培养过程中细胞形态由小且圆形或多角形,逐步转变大且为成纤维细胞样的梭形形态,对F机动蛋白的染色进一步佐证了这样的形态变化。细胞计数结果表明,细胞增殖能力随代次增加显著下降,特别是第3代以后的软骨细胞基本无明显增殖;经过番红O染色以及定量测定糖胺聚糖的含量,发现软骨特性胞外基质分泌量从第2代细胞开始就呈现显著的降低。半定量聚合链式反应检测结果表明,随着传代次数的增加,特别是第3代以后,软骨相关特征分子(包括Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖、软骨寡聚基质蛋白和SOX9等)基因表达水平下调;而与去分化相关的特征分子Ⅰ型胶原和多能蛋白聚糖基因表达水平上调,同时,细胞表面分子CD90基因表达上调,而CD14基因表达未见明显变化。结果证实,兔软骨细胞在体外传代过程中可出现快速地去分化现象,呈现出特征基因表达水平的变化,第3代以内的软骨细胞适合应用于软骨组织再生修复。

与视皮层脑片膜片钳全细胞记录相结合的生物素标记技术

目的 在视皮层脑片膜片钳全细胞记录的同时 ,建立神经元的生物胞素标记技术。方法 利用盲法获得视皮层脑片膜片钳全细胞记录 ,在电生理记录的同时 ,Biocytin通过记录电极尖端灌注到所记录的细胞内 ,标记成功后再进行组织学染色。结果 能观察视皮层同一细胞的电生理和形态学特性及神经元之间的染色耦合。结论 本法操作简便 ,细胞标记成功率高 ,易于推广使用。

生物反应器内工程化软骨的三维动态构建

组织工程化软骨的体外构建,可克服传统治疗方法的一些不足,被认为是一种有望治疗关节软骨缺损的有效途径。文章旨在探究人源脂肪干细胞结合壳聚糖/明胶水凝胶支架,在体外动态环境下构建工程化软骨的优势。实验制备了壳聚糖/明胶水凝胶支架,对其理化性能进行了检测,后将人源脂肪干细胞作为种子细胞,接种在支架上进行软骨的诱导培养,其中,选用转瓶作为动态的培养环境。分别通过组织学染色、共聚焦显微镜观察、扫描电镜观察等考察了软骨的构建情况,结果显示壳聚糖/明胶支架的平均孔径为(118.25±19.51)μm,孔隙率为(82.60±2.34)%,溶胀率为(361.28±0.47)%,弹性模量为(61.2±0.16)k Pa,具有良好生物相容性。动态载支架-转瓶内水凝胶支架中细胞蛋白多糖的表达更显著,细胞生长分布更加均匀,分泌细胞外基质基本填满整个支架,可促进人源脂肪干细胞的软骨分化和体外软骨的构建。

不同病毒灭活工艺对脱细胞牛皮基质性能的影响

为了研究不同病毒灭活工艺对脱细胞牛皮基质(ADM)性能的影响,从而为产品开发或组织工程技术基础研究提供理论依据。采用6种不同病毒灭活工艺对脱细胞牛皮基质(ADM)进行处理,测定经处理后的材料机械性能、体外降解速率以及组织学染色检测胶原纤维破坏程度。结果显示,经不同病毒灭活工艺处理的ADM的机械性能总体强度排序为75%Et OH>NaOH≈15k Gy>25k Gy≈0.1%PA>0.2%PA,体外降解速率由慢至快排序:75%Et OH<Na OH≈15k Gy<0.1%PA<0.2%PA<25k Gy,组织学染色结果与机械性能及降解速率检测结果相吻合。建议选择病毒灭活工艺时要根据材料特性进行相应选择。

^(14)C-尿素呼气试验诊断幽门螺杆菌感染结果分析

我院从2009年10月开展14C-尿素呼气试验（14C-UBT）,对1232因上腹部不适、疼痛等患者进行14C-UBT,其中520例阳性的患者进行胃镜检查取活检,病理组织学染色查幽门螺杆菌,以确定是否为Hp感染作为标准对照,其中498例胃镜活检病理组织学染色Hp阳性,对结果进行对照以评价14C-UBT在诊断Hp感染的价值,现报告如下。

三七提取物的抗衰老功效性研究

建立了衰老动物模型并对化妆品原料三七提取物的抗衰老功效进行评价。采用皮下注射D-半乳糖连续45 d得到衰老小鼠模型,在无毛区连续涂抹样品50 d。采用多功能皮肤分析仪对小鼠皮肤的肤色、色素及毛孔等指标进行测定。通过免疫组织化学染色对I型胶原蛋白(Col-I)、III型胶原蛋白(Col-III)与波形蛋白(VIM)进行观察。对皮肤组织匀浆进行总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)含量测定以评估样品处理后抗氧化能力的变化。结果表明,通过免疫组织化学染色可知4%三七软膏组可明显提高Col-I、Col-III与VIM的含量;三七软膏对T-SOD和GSH-Px的上调作用具有较好的剂量依赖效果。其中4%三七软膏组与空白基质组相比,T-SOD活力值增加了36.62%,CAT活力值增加了20.39%,GSH-Px活力值增加了68.77%。

聚二甲基硅氧烷基材表面修饰及力学强度变化对关节软骨细胞的影响

背景:聚二甲基硅氧烷因具有良好的生物相容性,优异的微纳米尺度可加工性,被广泛应用于细胞生物学的基础研究。但聚二甲基硅氧烷材料疏水性强,并不适于细胞贴附,因此表面修饰非常重要。目的:考察不同表面修饰方法并结合聚二甲基硅氧烷材料力学强度变化对牛关节软骨细胞生物学行为的影响。方法:采用3种不同方法修饰聚二甲基硅氧烷薄膜材料,包括胎牛血清孵育、胶原沉积和等离子体处理,同时变化聚二甲基硅氧烷材料的硬度,然后接种牛关节软骨细胞,并通过细胞骨架染色以及CCK-8表征分析其黏附、增殖情况,通过天狼星红/番红O染色以及糖胺聚糖定量表征分析基质分泌情况。结果与结论:(1)细胞黏附和增殖:细胞骨架染色以及生长曲线可以看出血清孵育、胶原沉积和等离子体处理均能显著改善牛关节软骨细胞在聚二甲基硅氧烷表面的黏附和增殖,其中等离子体处理的效果最好;(2)糖胺聚糖的总量:只有等离子体处理的表面显著提高了细胞分泌的糖胺聚糖的总量,但是细胞分泌糖胺聚糖的能力在所有修饰的表面上有所降低;(3)材料硬度对细胞黏附、生长和糖胺聚糖分泌都有影响,而且与材料表面修饰有关。(4)结果证实:实验利用血清孵育、胶原沉积以及等离子体处理聚二甲基硅氧烷材料,均能有效促进牛关节软骨细胞的贴附和生长,而且其中等离子体处理效果最优,与此同时聚二甲基硅氧烷基材的硬度也对细胞行为有所影响,但程度上要次于化学修饰,而且越能促进细胞生长的材料越抑制了关节软骨细胞的基质分泌能力。