低渗冻融联合生物酶法制备组织工程化静脉瓣脱细胞支架

目的：采用低渗冻融联合生物酶法制备组织工程化静脉瓣脱细胞支架,并与先前方法制备的静脉瓣脱细胞支架比较,以期获得一种性能较好的带瓣静脉脱细胞支架材料.方法：手术获得Beagle犬带瓣静脉分为4组,对照组、脱氧胆酸钠组、Triton组和冻融＋生物酶组.处理后对各组标本行H-E染色,透射电镜观察,DAPI荧光染色,细胞相容性测试等观察.结果：3种脱细胞方法均能彻底去除细胞,DAPI荧光检测显示各组支架材料均无DNA成分残留;H-E染色及透射电镜显示,冻融＋生物酶组胶原纤维排列整齐,未见明显的胶原纤维结构改变,其他2组可见胶原纤维断裂及结构紊乱现象;与其他2组脱细胞支架材料相比,冻融＋生物酶组的组织细胞相容性好,可见内皮祖细胞在支架材料上生长良好.结论：结合渗透压改变的反复冻融加生物酶法,既可以较彻底除去带瓣膜静脉细胞成分,又保留了较完整的细胞外基质结构,具有良好的组织和细胞相容性,是较理想的带瓣膜静脉脱细胞支架制备方法.

同步诱导培养兔骨髓源性内皮祖细胞和平滑肌祖细胞

目的采用兔骨髓来源的单个核细胞同步诱导分化为兔内皮祖细胞(EPCs)和平滑肌祖细胞(SPCs),研究其生物学特性,评估其作为组织工程化静脉瓣种子细胞的可能性。方法梯度密度离心法获取兔骨髓血单个核细胞沉淀,分别用含5%胎牛血清(FBS)的EGM-2完全培养液向EPCs方向诱导培养;用含20ng/mL血小板源性生长因子BB、5%FBS,不含血管内皮生长因子(VEGF)的EBM-2培养液向SPCs方向诱导培养。鉴定两种细胞的分化情况。结果诱导的EPCs培养至10d左右,细胞单层融合呈"铺路石"状;表达血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)、血管性血友病因子(vWF)、CD133,不表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA);透射电镜可见细胞质内特征性Weibel-Palade小体;细胞生物学功能检测可见EPCs在基质胶上呈现血管状生长。诱导的SPCs培养至14d左右呈现血管平滑肌细胞"峰-谷"样生长特性;表达CD34、α-SMA,不表达vWF和VEGFR-2;在透射电镜下可见细胞内含有与细胞纵轴平行排列的肌丝;在基质胶上不规则生长。结论兔骨髓血梯度密度离心得到的单个核细胞可同步诱导分化为EPCs和SPCs,为构建组织工程化静脉瓣提供了经济且可简便获取的种子细胞。