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组织工程化人正常食管上皮细胞的培养 被引量:3
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作者 柏启州 杨永珠 +1 位作者 王志强 苟云久 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第33期6447-6449,共3页
目的:在体外分离、培养食管上皮细胞,是研究组织工程食管的最基本环节。实验拟寻找适用于组织工程食管研究的食管上皮细胞培养方法。方法:实验于2007—05/11在兰州大学医学实验中心完成。①实验材料:取食管癌患者手术切除的正常食... 目的:在体外分离、培养食管上皮细胞,是研究组织工程食管的最基本环节。实验拟寻找适用于组织工程食管研究的食管上皮细胞培养方法。方法:实验于2007—05/11在兰州大学医学实验中心完成。①实验材料:取食管癌患者手术切除的正常食管长2.0~3.0cm,患者对试验知情同意。②实验方法:获取可用于组织工程的食管上皮细胞,常规传代培养。⑨实验评估:免疫组织化学染色、倒置相差显微镜下观察培养20min,1~4d细胞在含血清培养基DMEM+F12(1:1)中的生长情况;四甲基偶氮唑盐法测绘1~6d细胞的生长曲线。结果:①免疫组织化学方法检测结果显示,90%以上细胞呈阳性,证明培养的细胞为食管上皮细胞。②正常细胞较大,呈球形悬浮于培养基中;约20min后开始贴壁,1d后大部分细胞贴壁生长并呈不规则圆形或多边形;2d后细胞开始成簇生长;三四天细胞达生长高峰,胞浆丰富,核大而圆。⑧培养第3天细胞生长达高峰,其吸光度值与第1,2,5,6天比较,差异有显著性意义(P〈0.05)。结论:应用含血清培养基DMEM+F12(1:1)培养食管上皮细胞,方法简便,适合推广应用。 展开更多
关键词 细胞培养 食管上皮细胞 DMEM+F12 组织工程化食管上皮细胞
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流式细胞仪碘化丙啶染色法测定类胰岛素生长因子Ⅰ对人胚胎原代及传代成肌细胞生长周期的作用 被引量:1
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作者 张峻梅 岑石强 +2 位作者 杨志明 解慧琪 唐方 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第16期3110-3114,共5页
目的:大量研究表明,类胰岛素生长因子Ⅰ促成肌细胞增殖作用明显,低浓度水平就有活性,但是对于其作用机制目前还不太清楚。应用流式细胞仪碘化丙啶染色法(PⅠ法)检测成肌细胞生长周期,拟探讨类胰岛素生长因子Ⅰ对原代及传代人胚骨骼... 目的:大量研究表明,类胰岛素生长因子Ⅰ促成肌细胞增殖作用明显,低浓度水平就有活性,但是对于其作用机制目前还不太清楚。应用流式细胞仪碘化丙啶染色法(PⅠ法)检测成肌细胞生长周期,拟探讨类胰岛素生长因子Ⅰ对原代及传代人胚骨骼肌成肌细胞体外增殖的作用与机制。方法:实验于2004-06/12在四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室、干细胞与组织工程研究室以及成都市第三人民医院检验科流式细胞室完成。在产妇知情同意的前提下,选取孕8-12周水囊引产胎儿,性别不限,切取部分小腿腓肠肌与股四头肌组织后,采用文献的方法进行成肌细胞分离、纯化与传代培养,实验经医院伦理委员会批准。选取原代、第2、4、6代成肌细胞以1×105/孔密度接种于24孔板,每3孔为1组计7组。1-7组细胞以无血清F12培养基同步化后分别予以含0,1,2,4,8,16,32μg/L类胰岛素生长因子Ⅰ的培养基,运用核素掺入法确定类胰岛素生长因子Ⅰ促增殖的适宜浓度用于实验。同步化后其中一板的生长培养基不加类胰岛素生长因子Ⅰ作为对照组;另一个加入适宜浓度的类胰岛素生长因子Ⅰ作为实验组。每组每天取3孔细胞计数,绘制生长曲线,推算成肌细胞的群体倍增时间,作为细胞增殖周期TC。运用流式细胞技术PI法分别测定细胞生长周期和各亚周期时相时间。结果:4-8μg/L类胰岛素生长因子Ⅰ具有良好促进成肌细胞增殖的能力。各代的实验组与对照组成肌细胞在24h后进入对数生长期,各实验组细胞生长曲线明显左移。6代以内成肌细胞的增殖周期、各亚周期细胞百分比、各亚周期所占时相以及各代细胞对类胰岛素生长因子Ⅰ的反应一致,生长模式与能力一致,细胞倍增时间平均从4.8d缩短到3.3d。结论:类胰岛素生长因子Ⅰ能促进成肌细胞体外增殖,成肌细胞的增殖指数明显提高。其促增殖作用是通过缩短DNA合成前期和合成期来实现的。 展开更多
关键词 类胰岛素生长因子I 成肌细胞 组织工程 流式细胞术 细胞移植 组织工程化食管
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Tissue engineered esophagus by copper——small intestinal submucosa graft for esophageal repair in a canine model 被引量:4
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作者 TAN Bo WANG Min +5 位作者 CHEN Xi HOU JiangLong CHEN XiaoHe WANG Yue LI-LING Jesse XIE HuiQi 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2014年第2期248-255,共8页
Acellular porcine small intestinal submucosa(SIS)has been used for esophagoplasty with success in a canine model.However,it did not lead to complete epithelialization.For better reconstruction,a cellular component is ... Acellular porcine small intestinal submucosa(SIS)has been used for esophagoplasty with success in a canine model.However,it did not lead to complete epithelialization.For better reconstruction,a cellular component is required.Moreover,promotion of angiogenesis with copper has been widely recognized by basic research as well as clinical studies.In this study,we have evaluated the feasibility and effectiveness of combined Cu and SIS(SIS-Cu patch)for the esophageal repair using a canine model.Eighteen male beagle dogs were subjected to surgical resection to produce cervical esophageal defects(5 cm in length,180°in range).SIS with Cu(5 or 25μmol L 1copper)or without Cu was patched on the esophageal defects.Barium esophagram and histology exam were carried out to evaluate the effectiveness of the therapy.As shown,the SIS-Cu graft promoted re-epithelialization,re-vascularization and muscular regeneration.SIS-Cu patch is more effective than SIS alone for esophageal repair,and the SIS+25μmol L 1Cu group demonstrated additional advantages over the SIS+5μmol L 1Cu. 展开更多
关键词 ESOPHAGUS RE-EPITHELIALIZATION re-vascularization muscle regeneration COPPER small intestinal submucosa
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