组织工程口腔黏膜固有层修复皮肤缺损的初步研究

目的探讨两种组织工程口腔黏膜固有层移植修复皮肤缺损的效果。方法分别以胶原凝胶和壳多糖-胶原凝胶为网架与体外培养的Wistar大鼠口腔黏膜成纤维细胞构建胶原凝胶口腔黏膜固有层(fibroblast-populatedcollagenlattice,FPCL)、壳多糖-胶原凝胶口腔黏膜固有层(fibroblast-populatedchitosancollagenlattice,FPCCL),用BrdU标记其中的成纤维细胞后,移植修复同种异体大鼠背部全层皮肤圆形缺损。将36只21～25周龄Wistar大鼠分为FPCL组、FPCCL组及创口仅覆盖纱布的对照组,每组12只。术后行大体观察创面愈合情况;4、7、14和21d3组创面直径测量;组织学及免疫组织化学染色观察其组织修复情况。结果术后大鼠创面均无感染,创面结痂在14及17d自然脱落,创面逐渐愈合,被新生表皮覆盖,术后21d新生皮肤光滑,颜色与正常皮肤接近,无体毛。术后各时间点3组创面直径均逐渐变小,差异有统计学意义(P<0.01),14d以后,创口大小较稳定。术后7d,FPCL组受植创面比FPCCL组受植创面和对照组创面小(P<0.01)。组织学观察:术后7d,3组创面未完全表皮化;14、21d,FPCL组、FPCCL组受植区完全表皮化,有钉突,对照组无明显钉突,表皮已分层,基底细胞层完整,最表面有角化物;真皮中新生胶原纤维细,含毛细血管。免疫组织化学染色显示,FPCL组、FPCCL组术后各时间点阳性成纤维细胞出现在肉芽组织的细胞密集处和新生真皮中,与新生肉芽组织共同参与了皮肤缺损的修复重建,未出现免疫排斥现象。结论口腔黏膜成纤维细胞作为修复皮肤缺损的种子细胞是可行和有效的,壳多糖-胶原凝胶在限制受植区创面收缩变小方面优于单纯胶原凝胶。FPCL和FPCCL两组新生皮肤的质量优于对照组,两种组织工程口腔黏膜固有层作为皮肤缺损区永久性真皮替代物是可行和有效的。

LPS及IL-1β对组织工程化口腔黏膜中HBD-2和HBD-3表达的影响

目的:研究在大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和重组人白细胞介素1(interleukin-1,IL-1β)刺激下,组织工程化口腔黏膜替代品中的人β防御素2(Human-beta-defensin-2,HBD-2)和人β防御素3(Human-beta-defensin-3,HBD-3)的表达,评估组织工程化口腔黏膜治疗感染性口腔疾病的可能性。方法:采用实时荧光定量反转录PCR(RT-qPCR)和免疫印迹试验(Western blot)评估在LPS和IL-1β刺激下,组织工程化口腔黏膜替代品中HBD-2和HBD-3基因及蛋白的表达情况。采用SPSS 26.0软件包对数据进行统计学分析。结果:LPS和IL-1β均可刺激组织工程化口腔黏膜中HBD-2和HBD-3基因及蛋白的表达,培养24 h后呈现出剂量依赖性增加的趋势(P<0.05)。在100 ng/mL的LPS刺激下,HBD-2基因表达增加约2.7倍,而HBD-3基因表达增加约5倍;在20 ng/mL的IL-1β刺激下,HBD-2基因表达增加约1.6倍,而HBD-3基因表达增加约4.8倍。Western blot结果显示,LPS和IL-1β均可显著诱导HBD-2和HBD-3蛋白的分泌。结论:组织工程化口腔黏膜替代品在一定程度上具备抵御入侵微生物的防御功能,应用组织工程化口腔黏膜可为感染性口腔疾病提供新的治疗思路。

组织工程人口腔黏膜的制备及异体移植的临床应用

目的观察自行制备的复层组织工程人口腔黏膜移植后生长情况。方法取3月龄患儿唇裂术中切取的多余口腔黏膜组织,分离成纤维细胞与上皮细胞,分别接种于聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物(polylactic/glycolicacidcopolymer,PLGA)胶原复合膜上培养,后将其移至气液面进行复合,制成复层组织工程口腔黏膜。7例行口腔内良性肿瘤切除后遗留黏膜缺损的患者,缺损范围为1.8cm×1.6cm～3.2cm×2.6cm。采用组织工程口腔黏膜修复,术后观察其生长情况。1例志愿者在移植术后18和30d分别取移植部位黏膜行组织学观察。结果制备的组织工程口腔黏膜生长良好,具有上皮层和上皮下层双层结构,之间为PLGA膜;上皮层5～6层细胞,角蛋白染色阳性,上皮下层3～7层细胞,角蛋白染色阴性。7例患者移植修复术后10d,组织工程口腔黏膜与创面生长良好,颜色较正常黏膜深;18d后仍可辨出移植区与正常黏膜;30d后无法区别界限,创面均期愈合,无明显瘢痕组织。组织学观察:18d创面上皮层及下方肉芽组织生长良好,毛细血管增生有上皮钉突形成,成纤维细胞卵圆形;30d胶原化更明显,移植区结构与周边正常组织相似。结论应用组织工程口腔黏膜异体移植修复后,黏膜生长良好,但愈合组织上皮的来源还需进一步研究。

组织工程化口腔黏膜移植修复裸露硬腭对上颌骨生长发育影响的研究

目的 将构建的口腔黏膜异体移植修复腭裂术后遗留的裸露硬腭处 ,观察其对腭裂术后上颌骨继发畸形的防治效果。方法 分离提取SD乳鼠硬腭黏膜细胞并对其进行培养 ,以自制藻酸钠薄膜作为支架材料构建组织工程化的口腔黏膜。 3周龄雌性SD大鼠 ,随机分成 1个正常对照组和 3个实验组 ,每组 2 0只。正常对照组无任何处理 ,实验组均行左侧硬腭黏膜骨膜瓣切除 ,Ⅰ组切除后任其裸露 (裸露组 ) ,Ⅱ组、Ⅲ组分别行藻酸钠薄膜修复 (材料组 )和组织工程化的口腔黏膜修复 (黏膜组 )。术后 9周 (12周龄 )处死动物 ,体视显微镜下测量左右侧硬腭骨宽度 ,比较各组的非对称率。结果 裸露组与材料组左右侧硬腭骨宽度非对称率无差异 ;黏膜组非对称率小于裸露组和材料组。结论 组织工程化口腔黏膜移植修复裸露硬腭对腭裂术后上颌骨继发畸形有一定的预防效果。

组织工程化口腔黏膜载体材料聚乳酸羟基乙酸膜的制作及物理特性

目的 制作组织工程化口腔黏膜载体材料,研究其物理特性。方法 不同比例的聚乳酸(PLA)和聚乙醇酸(PLG)按常规成膜技术制备聚乳酸羟基乙酸(PLGA)。测定其孔隙率,倒置相差显微镜和电子扫描显微镜(SEM)观察其物理特性。结果 PIGAⅠ、Ⅱ、Ⅲ为平滑透明膜,孔隙率10.56％、18.24％、8.64％,SEM观察呈现数目不等微孔和纤维交织样结构;PIGAⅠV及改性膜不透明,较脆,孔隙率为56.39％左右,SEM观察为泡孔网海绵状。结论 PLGA Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ具较好的透明度及孔隙率,可被用作组织工程化口腔黏膜载体材料。

组织工程化口腔黏膜构建的研究现状

背景:口腔黏膜组织工程期待能解决自体黏膜修复组织来源不足的难题。目的:综述组织工程化口腔黏膜的种子细胞的来源及选择、各种常见支架材料的优缺点及相关生长因子的研究进展。方法:由第一作者以"tissue engineering of oral mucosa, seed cells, scaffold material, growth factor"为检索词,检索PubMed 数据库及Elsevier数据库2000-01/2011-12有关文章。结果与结论:几种常见的口腔黏膜组织工程种子细胞在研究中都有较好的增殖或分化能力,脂肪干细胞与其他种子细胞相比具有更明显的优势,可作为一种较理想的种子细胞;各种常见的支架材料都有各自的优缺点,可以采用多种方式改善其性能;将一些关键的细胞因子运用到口腔黏膜组织工程中,能促进移植物血管化,加快伤口愈合过程。口腔黏膜组织工程将是在临床上能解决异体移植免疫排斥及传播疾病和自体黏膜修复组织来源不足等问题一种安全有效的修复方法。

放射性口腔炎与组织工程化口腔黏膜

放射性口腔炎是一种放射线电离辐射导致的口腔黏膜损伤．是头颈部肿瘤放疗过程中最常见的并发症之一。通常表现为咽痛、黏膜充血、溃疡形成，重者伴有出血、脓性分泌物等。患者常常疼痛难忍，影响其正常进食、睡眠等日常生活，并造成严重的心理负担，甚至被迫中断治疗[1]。为了提高患者的生存质量，必须寻找有效的方法治疗放射性口腔炎。

不同支架材料构建组织工程化口腔黏膜回植动物的比较

目的以不同支架材料聚羟基乙酸（PGA）和脱细胞真皮基质材料（Alloderm）构建组织工程化口腔黏膜后回植裸鼠，观察其存活及生长情况。方法人口腔黏膜成纤维细胞（OFC）接种至PGA支架上培养7d后，将口腔黏膜上皮细胞分别与PGA-OFC和Alloderm复合，液面下培养4～7d后，进行气-液界面培养7d，然后回植裸鼠背部皮下。回植后7、14d分别取材观察。结果以PGA和Alloderm为支架构建的组织工程化口腔黏膜均可在裸鼠体内至少存活2周，并与裸鼠自身组织融合生长；在观察的第2周，以PGA为支架构建的组织工程化口腔黏膜出现血管化，以Alloderm为支架构建的组织工程化口腔黏膜上皮分化较为明显。结论PGA孔隙有利于细胞和血管的生长，但其强度随降解而降低；以Alloderm为支架的构建物显示出较清晰的组织学结构。

组织工程化口腔黏膜应用研究进展

目的组织工程是应用细胞生物学和工程学原理,将少量种子细胞经体外扩增后与可降解生物材料复合,用于替代或修复病变、缺损组织,重建生理功能。组织工程化口腔黏膜是目前研究的热点,可用于临床,也可用于体外生物相容性、黏膜刺激物、疾病及口腔生物学的实验研究。本文就组织工程化口腔黏膜的构建和主要应用作一综述。

丝素蛋白构建组织工程化口腔黏膜的研究进展

目前临床上口腔黏膜缺损的重建修复方式主要为局部颊黏膜瓣、筋膜瓣、软硬腭瓣或自体皮片移植、游离或带蒂的肌皮瓣移植等［1~2］，这些传统的治疗方法在口腔黏膜缺损重建中发挥了重要作用，但亦存在明显的局限性。首先，自体皮片或皮瓣的移植需要开辟第二手术区，可能会引起较重的损伤，影响患者的愈后；其次，移植的组织很难转化为正常的口腔黏膜，发挥不了正常口腔黏膜分泌、润滑以及咀嚼吞咽等生理功能，严重影响患者的生活质量［3］。20世纪80年代起，随着组织工程技术及新材料技术的发展，医疗工作者们愈来愈多的采用组织工程材料来修复口腔黏膜缺损，从而为口腔黏膜修复开辟了一条新的途径。

4种支架构建复合式口腔黏膜的组织学特点

目的利用4种不同支架材料构建复合式口腔黏膜,并比较其组织结构特点。方法体外培养人口腔黏膜的成纤维细胞和角质形成细胞,在4种支架材料中加入成纤维细胞,培养7d后,在支架表面加入角质形成细胞,培养4d后,移至气-液界面继续培养7d。苏木精-伊红染色镜下观察构建的复合式口腔黏膜的组织形态学特点。结果 4种支架均可构建形成复层上皮。其中,上皮层与脱细胞真皮基质材料(de-epidermised dermis,DED)结合紧密,形成的人工黏膜有明显的上皮钉突。不同于以往报道,上皮层与Alloderm结合并不十分紧密。以胶原凝胶为基质形成的人工口腔黏膜最厚,有明显分层。以胶原海绵-胶原凝胶为基质形成的复层上皮在部分区域长入至胶原海绵的空隙中。结论以DED和胶原凝胶为支架构建的口腔黏膜更接近于天然结构,而后者脆性较大,限制了其临床应用的可能。

聚乳酸-乙醇酸膜材料在细胞培养液中的降解实验

目的 为组织工程化口腔黏膜的培养筛选合适的载体材料。方法 系列聚乳酸 -乙醇酸 (PLGA)膜置细胞培养液 ,1、2、3、4周后取出 ,观察其质量降解和形态变化。结果 PLGA膜Ⅰ第 1、2周降解慢 ,3、4周时降解加快 ,4周时降解率最高 ;PLGA膜Ⅱ降解速率恒定 ;PLGAⅣ降解最慢。扫描电镜观察 ,PLGA膜Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ表面出现大小不等凹陷和空洞。结论 PLGA膜Ⅰ、Ⅱ。

曲拉通X-100对制备脱细胞真皮基质影响的实验研究

目的探讨由曲拉通X-100制备脱细胞真皮基质(ADM)的最佳浓度及作用时间,为表皮细胞种植于ADM形成组织工程化口腔黏膜提供实验依据。方法取大鼠2cm×2cm大小的皮肤56块,置于0.25% Dispase试剂中4C下孵育48小时,轻轻去掉表皮,随机分成7组,分别浸入0.1%、0.2%、0.3%、0.5%、1%、3%、10%的曲拉通X-100中作用36～80小时。取标本制作组织切片,HE染色,大体、光镜观察。结果光镜检查结果显示,制备出的脱细胞真皮基质主要由胶原纤维网架构成;曲拉通X-100浓度较低(0.1%～0.5%)时,皮肤脱净细胞成分的时间随浓度升高而逐渐缩短,各浓度间有明显差异(P均<0.01),而当浓度>0.5%时,皮肤脱净细胞时间与浓度无关,组间无显著差异(P>0.05)。结论曲拉通X-100制备大鼠ADM的最佳浓度为0.5%,时间为(45±2.82)小时。