重组人组织激肽释放酶原对糖尿病大鼠肾组织的影响

为探讨基因重组人组织激肽释放酶原对糖尿病大鼠肾脏组织及细胞受损程度的影响,采用尾静脉注射链脲佐菌素制备糖尿病肾病大鼠模型,用ELISA方法测定人组织激肽释放酶含量,以间接紫外分光光度计法测定肾组织激肽释放酶活性的,以放射免疫法测定血内皮素-1、肾cAMP。结果表明,糖尿病治疗组(DK)肾小球基质面积、肾小球截面积、肾小球系膜、肾小球基底膜、TGF-β1等肾组织形态变化指标明显优于糖尿病对照组(DC);注射重组人组织激肽释放酶原后,模型大鼠体内NO、cAMP增加,ET-1含量降低;16周时DK组和DC组肾组织中组织激肽释放酶的活性低于正常对照组(NC),但DK组高于DC组,差异有显著意义(P<0.05)。结论:重组人组织激肽释放酶原能延缓糖尿病肾病的进程。

用昆虫细胞表达系统表达人组织激肽释放酶原

目的:利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统表达proHUK,系统优化表达条件。方法:用改进的方法对昆虫细胞进行了无血清悬浮适应培养,用ELISA、SDS-PAGE方法对各种条件下proHUK的表达量进行检测。结果:Sf-9、Hi-5细胞在血清减量速度为5%、1%,接种密度分别为2×106cells/mL1、×106cells/mL时能很快适应无血清悬浮培养。在病毒感染复度MOI为10,细胞接种密度为1×106cells/mL条件下培养96h后,proHUK的表达量最高可达30mg/L。结论:改进的方法使昆虫细胞能更快适应无血清悬浮生长条件,获得了高表达proHUK的方法,为其大规模制备奠定了基础。