糖尿病合并肺结核患者肺泡巨噬细胞人类组织相容性Ⅱ类抗原信使核糖核酸的表达

目的 通过检测糖尿病合并肺结核患者人类组织相容性Ⅱ类 (HLA II)抗原信使核糖核酸 (mRNA)的表达 ,从基因水平探测 2型糖尿病合并肺结核患者易发肺结核的原因。方法 经支气管肺泡灌洗液收集肺泡巨噬细胞 ,利用逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)检测 4组人肺泡巨噬细胞上的人白细胞DR抗原 (HLA DR)和人白细胞DQ抗原(HLA DQ)mRNA的表达。结果 2型糖尿病合并肺结核组 (A组 )、2型糖尿病组 (B组 )巨噬细胞上这两种抗原mRNA相对含量的表达较肺结核组 (C组 )及正常对照组 (D组 )的表达明显减少 (P <0 .0 5 ) ;而A、B组间以及C、D组间巨噬细胞上这两种抗原mRNA的表达 ,差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 糖尿病患者肺泡巨噬细胞HLA II类抗原mRNA的表达降低 ,导致巨噬细胞HLA II类抗原的表达减少 ,从而导致巨噬细胞识别和提呈能力的下降是引起糖尿病患者好发肺结核的原因之一。

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑内主要组织相容性复合体Ⅱ类抗原和分化群3ε的变化

目的观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑内主要组织相容性复合体Ⅱ类抗原(MHC-Ⅱ)和分化群3ε(CD3ε)的变化。方法 25只C57BL/6小鼠随机分为EAE组(n=13)和正常对照组(n=12)。应用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55抗原诱导小鼠EAE模型。观察记录小鼠行为学变化;采用常规及髓鞘染色方法观察脊髓损伤和炎症细胞浸润程度;荧光定量PCR检测脑MHC-Ⅱ和CD3εmRNA的表达。结果 EAE组小鼠发病后EAE症状评分逐渐增加;脊髓炎症细胞浸润明显;髓鞘脱失较多;脑组织MHC-Ⅱ和CD3εmRNA表达显著高于正常对照组(均P<0.01),并与EAE症状评分呈正相关。结论 EAE小鼠脑内MHC-Ⅱ及CD3εmRNA表达水平增高与其病情严重程度一致。

实验性病毒性心肌炎心肌MHCⅡ类抗原的表达

【目的】研究病毒性心肌炎 (VMC)心肌组织相容性抗原Ⅱ类 (MHCⅡ类抗原 )的表达特点 ,探索轻度、不典型VMC的法医病理学诊断方法。【方法】以 10 3 .5TCID50 的CoxsackieB3 病毒接种Balb/c小鼠 ,诱导小鼠轻度VMC。用免疫组化技术检测VMC小鼠心肌MHCⅡ类抗原的表达。【结果】VMC小鼠心肌组织内MHCⅡ类抗原异常表达 ,部分心肌细胞膜局灶性MHCⅡ类抗原阳性。【结论】心肌MHCⅡ类抗原的异常表达参与了轻度VMC的发病机制 ;心肌MHCⅡ类抗原 LSAB染色可望成为诊断轻度、不典型VMC的免疫病理学指标。

主要组织相容性复合体Ⅱ类反式激活因子基因编码区单核苷酸多态性与慢性乙型肝炎病毒感染的转归

目的 探讨主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类反式激活因子(CⅡTA)编码区两个非同义单个核苷酸多态性(SNP)位点C19170G、C30799G的多态性与慢性HBV感染不同临床表型的关系.方法 在627例不同临床表型的慢性HBV感染人群与101名健康献血员中,用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)的方法对CⅡTA编码区两个非同义SNP位点C19170G、C30799G进行基因分型;X2检验判断上述位点的基因型分布是否符合Hardy-Weinberg平衡;列联表X2检验检测两组间的差异;非条件Logistic回归进行分析.结果 CⅡTA基因编码区19170位点G等位基因和GG+GC基因型在肝硬化人群中的频率显著高于其在非进展性肝病人群中的频率(X27.128,P=0.008;X26.404,P=0.011),且各基因型频率在肝硬化与非进展性肝病两组人群间存在显著差异(OR:0.742,95%CI:0.552～0.998,P=0.048),其两者间的差异主要存在于G基因显性模式下(OR:0.581,95%CI:0.353～0.954,P=0.032);30799位点C等位基因和CC基因型在肝细胞癌人群中的频率显著高于其在肝硬化人群中的频率(X24.861,P=0.027;X24.993,P=0.025).且各基因型频率在肝硬化与肝细胞癌两组人群间存在显著差异(OR:0.557,95%CI:0.334～0.930,P=0.025),其两者间的差异主要存在于C基因隐性模式下(OR:0.491,95%CI:0.269～0.898,P=0.021).结论 在慢性HBV感染者中,C19170G位点多态性与肝硬化的形成密切相关,携带G等位基因者易发展为肝硬化;C30799G位点多态性与肝细胞癌的发生密切相关,携带CC基因型者易发展为肝细胞癌.

联合检测CA125、IL-10和外周血淋巴细胞主要组织相容性复合体Ⅱ诊断非霍奇金淋巴瘤

目的探讨血清CA125、IL-10和外周血淋巴细胞主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ联合检测在非霍奇金淋巴瘤诊断中的价值。方法试验组92例非霍奇金淋巴瘤患者,对照组50名正常健康人。全自动电化学发光分析仪检测血清CA125,ELISA方法检测IL-10,流氏细胞仪检测淋巴细胞MHCⅡ分子荧光强度。结果非霍奇金淋巴瘤患者CA125为(82±35)U/ml,IL-10为(286±83)pg/ml,淋巴细胞MHCⅡ分子平均荧光强度为168±27,它们与对照组比较有显著性差异(P<0.01)。联合检测血清CA125、IL-10和外周血淋巴细胞MHCⅡ,非霍奇金淋巴瘤的敏感性提高为92%,阴性预测值均提高为97%。结论联合检测血清CA125、IL-10和外周血淋巴细胞MHCⅡ能更好地诊断非霍奇金淋巴瘤。

皮肤淋巴细胞相关抗原^+T细胞与皮肤病

皮肤淋巴细胞相关抗原是具有皮肤趋向性T细胞的一种归巢受体,类似于唾液酸化路易糖抗原的糖类结构。皮肤淋巴细胞相关抗原阳性T细胞具有对皮肤微环境中抗原的优先应答性、向炎症皮肤迁移及可在血液和皮肤之间再循环的特性,并与一些疾病的发病机制密切相关。

左旋咪唑通过促进抗原呈递细胞MHC-Ⅱ表达而加重实验性自身免疫性脑脊髓炎

目的:探讨左旋咪唑加重大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)是否通过上调抗原呈递细胞(APC)主要组织相容性复合体Ⅱ类抗原(MHC-Ⅱ)表达而实现的。方法:SD大鼠28只随机分为完全弗氏佐剂(CFA)组(n=8),EAE组(n=10),左旋咪唑组(n=10)。用豚鼠脊髓匀浆和CFA的混匀乳剂免疫SD大鼠制作EAE模型。在造模前3d至造模后7d腹腔注射左旋咪唑10mg·kg-1(左旋咪唑组)。分析各组行为学变化及神经组织病理学改变,用流式细胞术检测脾脏APC表面分子MHC-Ⅱ的表达。结果:左旋咪唑加速了大鼠EAE的病程,加重了神经缺损症状与中枢神经病理学损害;左旋咪唑上调了脾脏APC表面分子MHC-Ⅱ的表达,且与EAE神经缺损症状程度呈正相关。结论:左旋咪唑上调了APC表面分子MHC-Ⅱ的表达可能为左旋咪唑促发EAE的作用机制。

帕金森病大鼠同种异体脑内移植免疫反应的实验研究

目的: 观察帕金森病(Parkison' s disease, PD)模型大鼠同种异体脑内移植是否存在免疫反应以及免疫反应的特点.方法: 取新生SD大鼠腹侧中脑(ventral mesencephalon, VM)组织制成单细胞悬液, 借助脑立体定位仪移植到SD大鼠PD模型的纹状体内, 于2、 4、 6 wk时采用行为学检测后分批处死, 再行HE、酪氨酸羟化酶(TH)和MHCⅡ抗原免疫组化染色.结果: PD模型移植组2 wk时, MHCⅡ表达明显增高(P＜0.05), 4 wk时开始下降, 6 wk以后消失; 2 wk时移植区可见少量TH阳性神经元, 4～6 wk数量显著增加(P＜0.05).假手术组在2 wk时见少量MHCⅡ阳性细胞(P＞0.05), 4 wk时消失, 各时间点都未见TH阳性神经元; 对照组在各时间点都未见TH阳性神经元和MHCⅡ阳性细胞.各实验组各时间点行为学检测无明显改变(P＞0.05).结论: 同种异体脑内移植是存在免疫排斥反应的, 这种反应可能是由MHCⅡ抗原不同而诱发的, 免疫反应与移植物内TH神经元的存活和发育密切相关, 同种异体脑内移植加用免疫抑制剂还是必要的.

人肿瘤细胞培养上清对树突状细胞表型和功能的影响

目的 :观察肿瘤细胞分泌的可溶性因子对树突状细胞表型和功能的影响 ,以进一步揭示肿瘤的免疫逃逸机制。 方法 :体外分离单核细胞 ,加入白细胞介素 4 (IL - 4 )、粒 -巨噬细胞集落刺激因子 (GM- CSF)和肿瘤细胞培养上清体外培养树突状细胞 ,采用流式细胞术、同种异体混合淋巴细胞反应等方法观察肿瘤细胞上清对树突状细胞表型和功能的影响 ,并用逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)法检测了免疫抑制因子 IL - 10、血管内皮生长因子 (VEGF)和转化生长因子β1 (TGF-β1 )的 m RNA在人结肠、人卵巢和人肝脏肿瘤细胞中的表达。 结果 :当培养体系中加入人肿瘤细胞培养上清后 ,树突状细胞表面 MHC 类分子和 CD80等共刺激分子的表达较低 ,树突状细胞刺激 T细胞增殖能力下降 ,且 IL - 10 m RNA、VEGF m RNA和 TGF-β1 m RNA在 3种肿瘤细胞中均有不同程度的表达。 结论 :提示肿瘤细胞培养上清可能抑制树突状细胞的抗原提呈能力 ,肿瘤细胞分泌的免疫抑制因子可能是导致肿瘤微环境中的树突状细胞功能低下、机体的免疫系统无法有效激活和启动抗肿瘤免疫反应的原因之一。

幽门螺杆菌特异的免疫反应与基因检测

1 免疫反应人体感染幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)后可发生全面和强烈的体液和细胞免疫反应.有局部免疫反应,也有全身免疫反应.但人体对 Hp 的自然免疫反应对 Hp 既无清除作用,也无保护人体不受 Hp 再感染的作用.因此这种免疫反应对机体没有保护作用,相反由 Hp 介导的病理免疫反应如局部胃粘膜中性粒细胞炎症反应,Hp 抗体激活补体后诱导炎症递质释放,Hp 特异性 T 细胞免疫应答等都可能损害胃粘膜细胞.Hp 作为一种在人体内持续几年乃至几十年的慢性感染,宿主的免疫病理反应是其重要致病机制之一.但近年大量实验证明小鼠接受 Hp

MARCH1:一种新的树突细胞功能调控者

近期研究发现树突细胞（DCs）表面MHC-Ⅱ类分子的含量是通过MHC-Ⅱ类分子β链的泛素化水平来调控的[1],而MARCH1,一种E3泛素连接酶,在这一过程中起关键性的作用。但目前MARCH1在体内如何调控MHC-Ⅱ类分子的表达尚不清楚。研究表明,

天疱疮发病机理的某些研究进展

天疱疮是一种主要以抗体介导的器官特异性自身免疫性疾病。其病因与发病机理尚未完全清楚。B细胞多需T细胞的辅助才能产生自身抗体 ,而T细胞的激活又受主要组织相容性复合体的限制。现就目前的研究结果从抗原、抗体、组织相容性抗原与基因、T淋巴细胞作用等方面综述天疱疮发病机理研究的某些进展。

基因疫苗生物学特征及影响其免疫应答的因素

基因免疫有其独有的生物学性质 ,本文就基因免疫的生物学特性和影响基因免疫应答的因素进行了概述 ,以便深入研究基因免疫。

深低温冻存对大月龄胎儿带瓣血管组织免疫原性的影响

目的通过研究深低温保存前后大月龄胎儿主、肺动脉带瓣血管组织相容性白细胞抗原（HLA）的表达情况，分析深低温保存对组织HLA表达的影响。方法取10例脑死亡胎儿主、肺动脉带瓣血管，胎龄28～38周；每例随机分为两部分。一部分按冻存常规方法降温，-196℃长期保存者作为实验组，另一部分为对照组，未作冻存。利用免疫组化方法观察冷冻前后HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原和内皮细胞的变化情况。结果新鲜血管壁和瓣膜内皮表面均表达Ⅰ类抗原，而Ⅱ类抗原在血管壁内皮下层和瓣膜基质中表达。深低温冻存后Ⅰ类抗原在血管壁和瓣膜内皮表面消失，Ⅱ类抗原在相应组织中表达减弱。Ⅱ类抗原中内皮细胞抗原存在于冻存前后的血管表面，而在瓣膜表面冷冻后消失。结论深低温冻存后大月龄胎儿同种带瓣血管免疫原性降低。

HLA-Ⅱ基因多态与贵州地区多发性硬化患者遗传易患性

目的探讨HLA-Ⅱ基因多态与多发性硬化（multiple sclerosis，MS）患者遗传易患性之间的关系。方法从来自贵州地区32例无血缘关系的MS患者、36例神经科其他疾病患者以及30名健康人的抗凝全血中提取基因组DNA，用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR—SSP）联合技术进行HLA-Ⅱ类基因DRB1、DQB1位点的分型。结果与其他疾病对照组以及健康对照组比较，MS组HLA—DR16（三组分别为1／36、0／30、7／32）、DR11（3／36、1／30、7／32）和DQBl’0502等位基因频率（6／36、4／30、10／32）较高，DQB1^＊0601等位基因频率较低（12／36、17／30、8／32）。HLA—DR16等位基因频率与健康对照组比较X^2=7．398，RR=17．94，P=0．007，校正后P=0．011；与其他疾病对照组比较X^2=5．52，RR=9．8，P=0．015，校正后P=0．022，均有统计学意义。DR11、DQB1^＊0502、DQB1^＊ 0601与对照组比较差异无统计学意义。各等位基因不同性别、年龄之间比较差异无统计学意义。结论HLA—DR16可能与贵州地区MS患者的遗传易患性有关。

异柠檬酸脱氢酶1突变在胶质瘤免疫治疗中的研究进展

胶质瘤是颅内最常见的原发性恶性肿瘤,其恶性程度高、侵袭性强且预后差,目前亟需新的治疗方法。随着基因测序技术和分子生物技术的发展,研究者发现异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)突变在低级别胶质瘤和继发性胶质母细胞瘤中普遍存在。IDH1突变与胶质瘤的发生发展密切相关,是一个值得关注的潜在治疗靶点,可为胶质瘤的治疗提供新的方向。本文概述了异柠檬酸脱氢酶(IDH)家族的生理功能、IDH突变在胶质瘤形成中的意义、IDH1突变与胶质瘤免疫治疗及预后的关系,以及IDH1突变作为主要组织相容性复合体Ⅱ类抗原可能产生的作用。

巨噬细胞移动抑制因子与受体CD74在胎盘组织中的表达及其与子痫前期发病的关系

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子（MIF）与受体CD74在胎盘组织中的表达及其与子痫前期发病的关系.方法 选取2008年3-11月在青岛大学医学院附属医院产科住院分娩的子痫前期孕产妇69例,其中轻度子痫前期孕产妇33例（轻度子痫前期组）,重度子痫前期孕产妇36例（重度子痫前期组）.另选取同期正常妊娠晚期孕产妇43例为对照组.采用免疫比浊法榆测3组孕产妇血中C反应蛋白水平;采用免疫组化链酶菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接（SP）法榆测3组孕产妇胎枯组织中的MIF和CD74的表达;采用逆转录（RT）PCR技术检测3组孕产妇胎盘组织中MIFmRNA和CD74mRNA的表达.并对轻度及重度子痫前期组孕产妇血中C反应蛋白水平与胎盘组织中MIF mRNA及CD74 mRNA表达的相关性进行分析.结果 （1）3组孕产妇胎盘组织中均有MIF和CD74的表达,并呈棕黄色染色,轻度及莆度子痫前期组孕产妇胎盘组织中MIF及CD74的表达明显增强.（2）轻度子痫前期组孕产妇胎盘组织中MIF mRNA及CD74mRNA表达水平分别为0.70±0.13及0.96±0.16;重度子痫前期组分别为0.88±0.12及1.08±0.15,两组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）.对照组孕产妇胎盘组织中MIF mRNA及CD74mRNA表达水平分别为0.67±0.11及0.83±0.14,明显低于轻度及重度子痫前期组,分别比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）.（3）轻度及重度子痫前期组孕产妇血中C反应蛋白水平分别为（15.3±7.0）及（21.6±9.1）mg/L,两组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;对照组为（4.8±1.8）mg/L,明显低于轻度及重度子痫前期组,分别比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）.（4）轻度及重度子痫前期组孕产妇血中C反应蛋白水平与胎盘组织中MIF mRNA表达呈正相关关系（r=0.67,P〈0.01）;与胎盘组织中CD74mRNA表达呈正相关火系（r=0.83,P〈0.01）.胎盘组织中MIF mRNA表达与CD74mRNA表达呈正相关关系（r=0.93,P〈0.01）.结论 子痫前期患者胎盘组织中的MIF及其受体CD74的过度表达,可上调血中炎性标志物C反应蛋白的水平,引起血管内皮损伤,从而参与子痫前期的发病.

Nogo-66蛋白对慢性高眼压大鼠视网膜小胶质细胞功能的影响

目的 探讨Nogo-66蛋白对慢性高眼压大鼠视网膜小胶质细胞表面抗原CD11b及MHC-Ⅱ表达的影响及其对损伤组织抗原呈递作用的干预性质.方法 对照实验研究.采用随机数字表法,将实验动物分为4组：高眼压＋Nogo-66蛋白组,正常眼压＋Nogo-66蛋白对照组,高眼压＋损伤对照组,正常眼压＋损伤对照组.应用532-激光行周边前房角光凝＋巩膜浅层静脉关闭术,建立慢性高眼压动物模型.实验组大鼠接种：于双后足趾及背部皮下多点注射无菌等渗10%Nogo-66蛋白磷酸缓冲液（PBS）,注射后7 d、1个月,分别以0.005%的Nogo-66蛋白PBS注射液2 μl进行玻璃体腔内注射.对照组大鼠接种：以等渗PBS等量于相同部位注射.初次接种后1个月,免疫组织化学法标记视网膜小胶质细胞表面抗原CD11b和MHC-Ⅱ,应用Image-Pro Plus Version 6.0图像分析软件进行图像处理,获得小胶质细胞表面抗原阳性表达的量化指标.实验组与对照组大鼠眼压均值比较,采用两样本计量资料的方差分析;小胶质细胞表面抗原阳性表达水平比较,采用配伍设计多个样本均数比较的t检验.结果 实验组大鼠于建模后7 d眼压开始升高,1个月时眼压最高为（24.16±2.70）mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa）,与对照组（15.93±3.28）mm Hg比较,差异有统计学意义（F=2.10,P〈0.05）.在Nogo-66蛋白干预下,正常眼压＋Nogo-66蛋白组大鼠视网膜小胶质细胞MHC-Ⅱ阳性表达百分比为（11.45±1.97）%,显著高于高眼压＋Nogo-66蛋白组（3.92±1.03）%,差异有统计学意义（t=2.14,P〈0.05）;正常眼压＋Nogo-66蛋白组大鼠视网膜神经节细胞层小胶质细胞CD11b表达百分比为（8.15±1.97）%,显著高于高眼压组（1.78±0.63）%,差异有统计学意义（t=2.35,P〈0.05）.结论 外源性Nogo-66蛋白能够刺激视网膜神经节细胞层及神经纤维层小胶质细胞表面抗原CD11b及抗原呈递分子MHC-Ⅱ的阳性表达,提示Nogo-66蛋白具有中枢免疫原性,其有可能激活抗原呈递细胞,完成其呈递损伤抗原的作用.

人CⅡTA基因不同单倍型CDNA真核表达载体的构建

目的 构建人MHCⅡ类反式激活因子（CⅡTA）基因3种不同单倍型cDNA的真核表达载体。方法 以野生型重组质粒EBS-NPL-CⅡTA cDNA为模板,用重叠延伸PCR定点突变技术对CⅡTA基因编码区的两个非同义单个核苷酸多态性（SNP）位点进行突变,制备CⅡTA基因另外3种单倍型CDNA的部分片段。将其分别克隆至EBS-NPL-CⅡTA酶切后的线性化载体上,通过菌落PCR及酶切鉴定获得阳性克隆,并对其进行测序鉴定。然后将4种单倍型的真核表达载体和空载体EBS-NPL分别转染至HepG2细胞,用间接细胞免疫荧光技术检测其HLA-DR分子的表达。结果 成功制备人CⅡTA基因3种单倍型CDNA的部分片段,并获得含有CⅡTA基因3种不同单倍型cDNA完整序列的真核表达载体。证实未经转染和转染空载体的HepG2细胞无HLA-DR分子的表达,转染4种真核表达载体的HepG2细胞均可表达HLA-DR分子。结论 成功构建人CⅡTA基因不同单倍型的真核表达载体,为研究CⅡTA基因不同单倍型功能之间的差异奠定基础。

慢性乙型肝炎患者HLA-DM基因多态性与临床分度的关系研究

目的探讨慢性乙型肝炎患者HLA-DM基因的多态性与疾病临床分度的关系。方法选取慢性乙型肝炎轻度患者64例、中度患者68例、重度患者72例,采集患者外周静脉血提取DNA,运用PCR-RFLP方法确定HLA-DM的基因型,分析HLA-DM的基因型与慢性乙型肝炎临床分度的关系。结果发现HLA-DMBrs1042337位点中,与携带野生型纯合子CC基因型者相比,携带CA或AA基因型者,发展为慢性中度肝炎的风险仅为0.53,发展为慢性重度肝炎的风险进一步减少仅为0.34,和疾病的临床分度存在显著关联。结论 HLA-DMB基因SNP位点rs1042337C→A变异可能与慢性乙型肝炎临床分度相关,可影响疾病的临床转归。