主要组织相容性复合物Ⅱ对Graves病发病影响的研究

目的应用主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ与人TSH受体(TSHR)共表达细胞(hM12细胞)模拟Graves病(GD)时的甲状腺细胞,免疫C57BL/6小鼠,诱导GD动物模型,以研究异常表达于GD患者甲状腺滤泡上皮细胞上的MHC-Ⅱ分子是否是GD的致病因素。方法试验组C57BL/6小鼠8只,用hM12细胞进行腹腔免疫,每2周1次,共6次,对照组C57BL/6小鼠5只,用M12细胞免疫,方法同试验组。受试小鼠末次免疫5周后,检测以下指标:甲状腺激素水平;甲状腺刺激性抗体(TSAb);甲状腺组织学检查。结果C57BL/6小鼠试验组2/8小鼠诱导为Graves甲亢。C57BL/6小鼠的T细胞(MHC-Ⅱ为H-2b)不能识别由hM12细胞(H-2d)提呈的抗原,C57BL/6小鼠出现GD样变化可能是hM12细胞表达的TSHR被小鼠体内职业性抗原递呈细胞(APCs)获取,经加工处理提呈给T细胞,诱发自身免疫反应的结果。结论异常表达于GD患者甲状腺滤泡上皮细胞上的MHC-Ⅱ分子可能与GD的发病无关,而是一种自身免疫反应的继发现象。

黑质小胶质细胞主要组织相容性复合物Ⅱ的表达与帕金森病发生和进展的关系

近年来诸多证据显示,中枢神经统的免疫异常和炎症反应参与了黑质多巴胺能神经元的变性坏死。小胶质细胞的激活是脑内炎症反应的主要标志,小胶质细胞主要组织相容性复合物Ⅱ(MHCⅡ)的表达是小胶质细胞活化的标志。尽管人脑中的小胶质细胞并不持续表达MHCⅡ类分子,但随着年老以及在中枢神经系统出现病变的情况下(包括神经变性),它们的表达确是明显上调的。研究发现,在PD病人和PD动物模型的中脑黑质均可发现大量MHCⅡ阳性的小胶质细胞,MHCⅡ类分子在小胶质细胞将外源性抗原呈递给CD4+Th细胞的过程中起重要作用。在6-羟多巴胺(6-OHDA)、脂多糖(LPS)大鼠模型的观察发现,促红细胞生成素、地塞米松等能明显降低MHCⅡ的表达和小胶质细胞的活化,从而减轻动物模型的临床症状。鉴于MHCⅡ抗原启动的免疫反应在PD的发病过程中有促进慢性神经变性进展的作用,因此,抑制小胶质细胞活性和MHCⅡ表达对控制PD进展可能有重要的治疗上的意义。

热激诱导Jurkat细胞中主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子基因和人白细胞抗原的表达

目的检测热激对Jurkat细胞中主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子(CⅡTA)的表达,及其对下游人类白细胞抗原(HLA-DR)表达的影响。方法采用实时RT-PCR检测42℃热激和干扰素-γ(IFN-γ)作用前后Jurkat细胞中CⅡTA mRNA的变化。采用Western blot检测热激和IFN-γ作用前后Jurkat细胞中CⅡTA蛋白的表达变化。采用流式细胞仪荧光分析热激前后Jurkat细胞表面HLA-DR的表达。结果在Jurkat细胞中,热激可诱导CⅡTAmRNA和蛋白的表达,而IFN-γ处理后无明显变化。与正常Jurkat细胞相比,热激后HLA-DR在Jurkat细胞表面的抗原浓度明显增加(P<0.01)。结论热诱导Jurkat细胞中CⅡTA和HLA-DR先后表达增高。提示热激可能在免疫基因表达缺陷的细胞中,重建相关基因的功能,为肿瘤热疗提供新的依据。

Ⅱ类主要组织相容性复合物转录激活子多态性与冠心病的相关性研究

目的研究Ⅱ类主要组织相容性复合物转录激活子(MHC2TA)-168A→G多态性在中国汉族人群中的分布及与冠心病的相关性。方法采用错配聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术,对158例冠心病患者及167例正常人群MHC2TA-168A→G多态性进行研究。结果研究人群中存在MHC2TA-168A→G多态性;检测AA、AG和GG基因型频率在冠心病组中分别为52.53%、39.24%、8.23%,正常对照组频率分别为65.87%、28.14%、5.99%,基因型分布存在差异,具有统计学意义(P<0.05);冠心病组G等位基频率(30.10%)明显高于对照组(20.06%)(OR:1.751,95%CI:1.070～2.221,P<0.05)。结论 MHC2TA-168A→G多态性与冠心病遗传易感性相关,其中G等位基因增加了患冠心病的危险性。

Ⅱ类主要组织相容性复合物转录激活子(MHC2TA)-168A→G多态性与冠心病的相关性研究

目的研究Ⅱ类主要组织相容性复合物转录激活子(MHC2TA)-168A→G多态性在中国汉族人群中的分布及与冠心病的相关性。方法采用错配聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(mpPCR-RFLP),对汉族185例冠心病患者及149名正常人群MHC2TA基因-168A→G位点进行研究。结果冠心病组与对照组均检出-168AA、-168AG和-168GG基因型,MHC2TA-168A等位基因频率分别为0.724和0.802,MHC2TA-168G等位基因频率分别为0.276和0.198,冠心病组MHC2TA-168G基因型频率(0.276)明显高于对照组(0.198。OR:1.542,95%CI:1.070～2.221;P<0.05。结论MHC2TA-168A→G多态性与冠心病有关,G等位基因可能是汉族人群冠心病的遗传危险因素。

CD11c和MHC-Ⅱ在肝细胞癌中的表达及其与肿瘤血管生成的相关性

目的探讨树突状细胞(DCs)的数量及成熟情况在肝细胞性肝癌(简称肝癌)中的表达及其与肝癌微血管密度(MVD)的相关性。方法收集50例肝癌患者术后癌组织及癌旁组织标本,并通过免疫组化方法检测石蜡切片中DCs特异性标志CD11c、MVD标志CD34以及DCs成熟标志的主要组织相容性复合物Ⅱ类分子(MHC-Ⅱ)的表达情况并进行相关分析。结果癌组织中CD11c和MVD明显高于癌旁组织(P<0.01);癌组织中MHC-Ⅱ明显低于癌旁组织(P<0.01)。MVD与MHC-Ⅱ呈负相关性(r=-0.480,P<0.01),而与CD11c则无明显相关性。癌组织中各项指标的表达与肝癌的转移、TNM分期存在相关性(P<0.05)。结论肝癌组织中CD11c、MHC-Ⅱ的表达与肝癌的转移及TNM分期密切相关;MVD的高表达与浸润性DCs的成熟度呈负相关性,提示增加DCs的成熟度可能成为肝癌抗血管治疗的潜在靶点之一。

脂联素抑制脂肪组织MHC Ⅱ表达及对糖脂代谢的影响

目的:探讨脂联素是否通过影响脂肪组织主要组织相容性复合物Ⅱ类(MHCⅡ)的表达调节糖脂代谢。方法:脂联素基因敲除小鼠(KO)和C57BL/6小鼠(WT)分别给予高脂饲料或普通饲料,24周后,测量小鼠体重、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、稳态胰岛素评价指数(HOMA-IR)、血清甘油三酯(TG)、血清总胆固醇(TC)、血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C);行肝脏组织病理形态学评价;检测脂肪组织MHCⅡ反式激活因子(CIITA)、小鼠MHCⅡ抗原Eβ(H2-Eb1)、MHCⅡ恒定链(CD74)mRNA及MHCⅡ相关蛋白质表达水平。用siRNA沉默3T3-L1脂肪细胞中MHCⅡ的表达及用过表达载体升高3T3-L1脂肪细胞中的脂联素和(或)MHCⅡ的表达,检测脂联素对MHCⅡ蛋白水平的影响。结果:高脂饲料或普通饲料喂养的KO小鼠体重、FBG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C、肝脂肪变性、脂肪组织中CIITA、H2-Eb1、CD74 mRNA和MHCⅡ蛋白表达水平均高于WT小鼠。在脂肪细胞中,抑制脂联素能够在一定程度上逆转siRNA干扰所引起的MHCⅡ表达降低,过表达脂联素后脂肪细胞中MHCⅡ的表达降低。结论:脂联素可以通过抑制脂肪组织中MHCⅡ的表达改善糖脂代谢。

黑质内注射脂多糖对小胶质细胞MHCⅡ表达的影响

目的观察黑质内注入脂多糖(LPS)后对黑质小胶质细胞主要组织相容性复合物Ⅱ(MHCⅡ)表达的影响。方法采用立体定向技术向大鼠单侧黑质内注入LPS建立帕金森病动物模型,分别于注药后1、7、14、60 d时采用免疫组化法检测MHCⅡ阳性细胞;Western blot检测黑质小胶质细胞MHCⅡ蛋白的表达;双标荧光染色法检测p47phox(NADPH氧化酶标志物)和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)在MHCⅡ阳性小胶质细胞的表达。结果注射LPS后1 d,注射侧黑质区始出现MHCⅡ阳性细胞,7 d时达高峰,14 d时减少,60 d时仅见少量的阳性细胞。Western blot检测结果也有类似的趋势。双标荧光染色法检测到p47phox和i NOS在MHCⅡ阳性小胶质细胞均有表达。结论黑质内单次注射LPS可激活黑质小胶质细胞并表达MHCⅡ;LPS可诱导MHCⅡ阳性小胶质细胞同时表达i NOS和NADPH氧化酶。

布鲁菌M5侵染小鼠骨髓源性树突状细胞后抗原肽的筛选

【目的】用绿色荧光标记的布鲁菌M5菌株(GFP-M5)侵染小鼠骨髓源性树突状细胞,对成熟树突状细胞表面主要组织相容性复合物Ⅱ(MHCⅡ)类分子结合的多肽进行筛选。【方法】用联合细胞因子重组小鼠GM-CSF和IL-4诱导小鼠骨髓单个核细胞向树突状细胞定向分化和增殖,于诱导培养的第1,3,5,7天在倒置荧光显微镜下观察细胞的形态学变化;用PE标记的CD11c抗体和FITC标记的CD80抗体对培养第7天的小鼠骨髓源性树突状细胞进行标记,流式细胞仪检测树突状细胞表面因子表达情况;用GFP-M5侵染培养第7天的小鼠骨髓源性树突状细胞24 h,激光共聚焦显微镜下观察菌株侵染情况;采用免疫共沉淀技术从树突状细胞膜水溶性蛋白溶液中分离纯化MHCⅡ-免疫多肽组复合物,C18固相萃取柱纯化小分子多肽,应用高效毛细管电泳(HPCE)和液相色谱-二级质谱(LC-MS/MS)联用技术进行纯化和测序,在布鲁菌基因组数据库中对质谱测试原始数据进行检索,筛选与布鲁菌M5基因组匹配的MHCⅡ类结合序列所代表的蛋白质。【结果】倒置荧光显微镜下观察细胞生长状态发现,小鼠骨髓源性树突状细胞由最初表面光滑无突起的圆形细胞(第1天)转变为表面突起明显增多的典型树突状细胞(第7天);经流式细胞仪检测发现,培养第7天的树突状细胞CD11c阳性率为72.0%,CD80阳性率为8.4%,符合未成熟树突状细胞表面标志物的特征。GFP-M5侵染细胞24 h后在激光共聚焦显微镜下可观察到大部分树突状细胞已完全被侵染,即成为成熟树突状细胞;免疫共沉淀结合LC-MS/MS技术,从经GFP-M5侵染的3组树突状细胞膜水溶性蛋白溶液中分离出了800多个MHCⅡ分子提呈的多肽分子,经与布鲁菌全基因组比对,属于布鲁菌且在3个试验重复中至少重复出现2次的有28个多肽序列;蛋白质鉴定表明,这些短肽包括布鲁菌外膜蛋白和外膜蛋白组装过程中需要的相关酶类,以及在抗原递呈过程中细胞内一系列生化反应所需的酶类。【结论】建立了外源性抗原体外侵染树突状细胞,获得了一系列布鲁菌M5菌株侵染小鼠骨髓源性树突状细胞后的MHCⅡ免疫多肽。

冠心病患者MHC2TA-168A→G多态性与高敏C反应蛋白水平的相关性

目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)患者Ⅱ类主要组织相容性复合物转录激活子(MHC2TA)5'启动区-168A→G多态性与血清高敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平的关系。方法对185例CAD患者采用错配聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(mpPCR-RFLP)检测MHC2TA基因-168A→G多态性并免疫比浊法测定hs-CRP水平,分析两者之间的关系。结果 185例CAD患者MHC2TA基因-168A→G多态性:呈AA基因型95例(51.35%)、AG基因型78例(42.16%)、GG基因型12例(6.49%);hs-CRP水平:GG基因型患者hs-CRP(4.5±1.8)mg/L及AG基因型患者(3.2±1.2)mg/L与AA基因型患者(2.7±1.1)mg/L比较差异有统计学意义(t=11.06、9.14,均P<0.05);hs-CRP>3.0 mg/L的高危患者GG基因型占(91.7%)及AG基因型(73.4%)与AA基因型高危患者(45.2%)比较,差异有统计学意义(χ2=17.75,28.04,均P<0.05)。结论MHC2TA-168A→G多态性G等位可能是CAD炎症反应的独立影响因素,MHC2TA-168A→G多态性可能与CAD炎症反应有关。

MHC-Ⅱ在病毒性感染中的作用研究进展

病毒感染性疾病严重危害人们的生命健康,而近年暴发的新冠病毒感染给人们的身心健康和生产生活带来了严重影响。主要组织相容性复合物Ⅱ分子(MHC-Ⅱ)主要表达于B细胞、单核-巨噬细胞和树突状细胞等专职抗原递呈细胞上,参与调控体液免疫和细胞免疫应答。越来越多研究表明,MHC-Ⅱ在抗病毒感染及病毒免疫逃逸中发挥重要的生理及病理作用,但其机制仍不清楚,该文就MHC-Ⅱ在病毒性感染中的作用及研究进展进行了综述。

MHCⅡ+抗原提呈细胞调节多发性硬化的研究进展

多发性硬化是中枢神经系统的一种慢性炎症性脱髓鞘疾病,主要涉及免疫系统与神经细胞之间的复杂反应。主要组织相容性复合物Ⅱ(major histocompatibility complexⅡ,MHCⅡ)是固有免疫与适应性免疫的桥梁,主要表达在专职抗原提呈细胞表面,其异常表达与器官移植、免疫耐受、自身免疫性疾病、免疫缺陷等密切相关。近年来越来越多的研究表明MHCⅡ分子在多发性硬化等自身免疫病中发挥关键作用,但具体机制尚不明确,以下将主要综述表达MHCⅡ的抗原提呈细胞(巨噬细胞、树突状细胞、B细胞)在多发性硬化中的研究进展。

痤疮合剂对痤疮家兔耳根淋巴结朗格汉斯细胞影响实验研究

目的该研究旨在观察痤疮合剂对兔耳痤疮模型耳根淋巴结朗格汉斯细胞抗原提呈功能的影响。方法24只新西兰大耳白兔随机分为4组:正常组,模型组,痤疮合剂组,阳性组。正常组不做任何处理,其它3组用Kligman法制备兔耳痤疮模型,经组织学判定造模成功后,痤疮合剂组喂服痤疮合剂30 d(17.52 g·kg^-1·d^-1);阳性组喂服清热暗疮胶囊30 d(0.12 g·kg^-1·d^-1);正常组与模型组喂服等容量生理盐水。病理观察兔耳组织苏木精-伊红(HE)染色变化;流式细胞术测定耳根部淋巴节中CD207、MHC-Ⅱ、CD86、OX40阳性细胞百分率。结果痤疮合剂能有效减轻兔耳表皮层的厚度、脓肿、结节,和兔耳毛囊开口收缩及扩张的程度,抑制毛囊漏斗内角质化物质的堆积,降低真皮炎症细胞的增生和浸润;与正常组比较,其余各组耳根部淋巴结中CD207、MHC-Ⅱ、CD86、OX40阳性细胞均显著升高(P<0.05);与模型组相比,痤疮合剂组和阳性组耳根部淋巴结中CD207、MHC-Ⅱ、CD86、OX40阳性细胞百分率均降低(P<0.05)。结论痤疮合剂能通过调控痤疮模型家兔耳根淋巴结中朗格汉斯细胞抗原提呈功能,抑制Th2细胞诱导的慢性炎症,达到调节和改善兔耳痤疮模型皮损病理表现的干预效果。

ERK1/2通路对内脏高敏感大鼠肠道树突细胞表面MHC-Ⅱ分子表达的影响

目的 研究肠易激综合征（IBS）肠道树突细胞（DC）表型变化及细胞内丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的变化,初步探讨ERK1/2通路在介导DC异常免疫应答中的可能作用机制.方法 以母幼分离联合结直肠扩张刺激建立SD大鼠IBS模型（模型组,10只）,10只健康SD大鼠作为对照（对照组,10只）,以腹部收缩反射（AWR）实验评估大鼠内脏敏感性,造模成功后采用磁珠分选技术分离肠系膜淋巴结树突细胞（MLNDC）,流式检测其分选纯度及对照组大鼠表面主要组织相容性复合体Ⅱ（MHC-Ⅱ）类分子的表达,Western印迹法检测对照组及IBS组大鼠MLNDC中MHC-Ⅱ、磷酸化p38丝裂原激活蛋白激酶（p-p38）、p38丝裂原激活蛋白激酶（p38）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK1/2）、细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）、磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）的表达情况.结果 IBS组大鼠内脏敏感性显著高于对照组.流式细胞术检测磁珠分选后大鼠DC特异性抗原OX62＋ MLNDC为85.57％±7.67％.对照组大鼠MLNDC表面高表达MHC-Ⅱ类分子;与对照组相比,IBS组大鼠MLNDC表达MHC-Ⅱ类分子升高（1.05±0.13比0.67 ±0.18,t=-2.973,P=0.041）,同时,p-ERK的表达水平明显升高（3.21±0.48比2.34±0.85,江-3.130,P=0.035）,而p-JNK及p-p38的表达水平与对照组相比,差异无统计学意义（0.95±0.17比0.76±0.36,t=0.808,P=0.464;1.07±1.13比1.19±0.91,t=0.137,P=0.897）.结论 IBS大鼠肠道DC上调表达MHC-Ⅱ类分子,其可能与细胞内ERK1/2信号通路的活化有关.

泛素在多器官功能障碍综合征小鼠脾脏中表达变化及其对树突细胞免疫调节作用的影响

目的探讨多器官功能障碍综合征（MODS）脾脏中泛素（ub）的表达变化及意义，研究泛素化主要组织相容性复合物Ⅱ（MHCⅡ）对树突细胞（DC）活性及免疫调节作用的影响。方法210只雄性C57BL／6小鼠按随机数字表法分为正常对照组（30只）和MODS组（180只），通过腹腔注射酵母多糖悬液复制MODS模型，MODS组再随机均分为6、12、24、48h和5～7d、10～12d组。采用免疫组化和免疫荧光法分别检测脾脏中Ub蛋白及CD11c＋DC细胞和MHCII类分子I—Ab的表达；荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测脾脏内UbmRNA表达。结果①免疫组化显示：与正常对照组比较，MODS组伤后6h脾脏Ub阳性细胞逐渐增多，24h达高峰[（16．83±0．38）％比（8．60±0．86）％，P〈0．05]，后逐渐下降，至10—12dUb阳性细胞已显著低于正常对照组[（4．664-0．34）％比（8．60±0．86）％，P〈0．05]。②荧光定量RT—PCR显示：与正常对照组比较，MODS组伤后6hUbmRNA表达增强，至24h达高峰（2．17±0．20比1．00±0．00，P〈0．01），随后逐渐下降，至10～12d表达已显著低于正常对照组（0．72±0．08比1．00±0．00，P〈0．05）。③免疫荧光标记显示：与正常对照组比较，MODS组伤后6hCD11c＋DC细胞明显增加，至24h达高峰[（7．55±0．04）％比（2．08±0．13）％，P〈0．05]，随后明显减少，至10—12d已接近正常对照组[（2．284-0．06）％比（2．08±0．13）％，P〉0．05]。MODS组伤后6hI-Ab阳性细胞明显增加[（10．90±1．40）％比（5．78±0．47）％，P〈0．01]，24h表达明显下降[（3．32±0．91）％比（5．784-0．47）％，P〈0．05]，48h、5～7d恢复至正常对照组水平后，10—12d再次显著降低[（2．20±0．97）％比（5．78±0．47）％，P〈0．05]。Ub阳性细胞数与I—AbCD11c均呈显著正相关（n=0．899，r2=0．987，均P〈0．05）。结论Ub可能通过泛素化DC表面的MHCII类分子影响DC成熟和活化，从而影响MODS各时期的免疫应答，为调控免疫应答提供新的认识途径与监测指标。

多西环素对脂多糖-帕金森病模型大鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的探讨多西环素对脂多糖（LPS）-帕金森病（PD）模型大鼠多巴胺能神经元的保护作用及其机制。方法动物随机分为3组：正常对照组、LPS组和多西环素干预组；采用LPS黑质内立体定向注射建立PD模型；免疫组化染色法观察多西环素干预前后黑质多巴胺能神经元和MHCⅡ阳性小胶质细胞的变化；高效液相色谱-电化学检测仪检测纹状体多巴胺（DA）、DOPAC（二羟苯乙酸）含量的变化；Western印迹检测黑质小胶质细胞MHCⅡ（主要组织相容性复合物Ⅱ）蛋白的表达。结果多西环素干预后，黑质残存多巴胺神经元由LPS组的38％±5％上升到79％±4％（P〈0．01）；纹状体DA及DOPAC含量分别由LPS组的4．89±0．27和0．70±0．07上升到7．00±0．34和1．10±0．10（P〈0．01）；腹腔注射阿朴吗啡诱导动物旋转的平均圈数由LPS组的（208±14）次／30min减少到（80±12）次／30min（P〈0．01）；而黑质致密部MHC1I阳性细胞数量由LPS组的835±82减少到354±59（P〈0．01）；Western印迹检测MHCU蛋白的表达也明显减少。结论多西环素能够抑制LPS诱导的黑质多巴胺能神经元变性，它可以通过下调小胶质细胞MHC1I的表达来实现其神经保护作用。