组织相容性抗原-肽四聚体流式细胞技术检测乙型肝炎患者特异性CD8^+T细胞

目的 探讨组织相容性抗原 (HLA) 肽四聚体流式细胞技术检测乙型肝炎病毒特异性CD8+ T细胞的临床应用价值。方法 采用HLA A2分子胞外段与乙型肝炎病毒 (HBV)核心表位肽core 18 2 7结合的HLA 肽四聚体 (Tetramer) ,设计流式细胞技术检测乙肝患者外周血中针对该肽段的特异性CD8+ T细胞数量 ,以占总计数CD8+ 细胞数的百分比表示。结果 11例HLA A2 + 的急性乙肝患者外周血特异性CD8+ T细胞为 0 0 2 %～ 2 0 4 % ,中位数为 0 2 0 % ,16例HLA A2 + 的慢乙肝患者为<0 0 1%～ 0 6 5 % ,中位数为 0 0 5 % ,二组之间差有显著性 (P <0 0 1)。 15例HLA A2 + 正常对照组、13例HLA A2 -急性乙肝对照组和 19例HLA A2 -慢性乙肝对照组的特异性的CD8+ T细胞均不超过0 0 2 %。结论 HLA 肽四聚体流式细胞技术能在体外直接检测HBV特异性的CD8+ T细胞数量 ,其水平一定程度上反映了特异性CTL应答状况 ,且与乙肝的不同临床转归有关。

淋巴瘤相关抗原肽刺激所获细胞毒性T细胞克隆的特征

目的研究抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞(CTL)克隆识别靶细胞的肽特异性和人类白细胞抗原(HLA)限制性,以及其赖以识别抗原肽的T细胞受体(TCR)基因表达序列的分子特征。方法利用体外CTL刺激扩增体系,应用免疫球蛋白重链可变区(IgHV)框架区上的B淋巴瘤相关抗原九肽(IgHV1QLVQSGAEV和IgHV3SLYLQMNSL)负荷的抗原递呈细胞(APC),刺激正常HLAA0201供者的外周血单个核细胞(PBMC),每周1次共4次,用流式细胞仪检测体外培养细胞的免疫表型的变化,并用肽/主要组织相容性基因复合体(MHC)四聚体方法检测肽特异性的CTL增殖情况。应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测CTL与不同的靶细胞共同孵育时释放干扰素γ(IFNγ)的能力。应用逆转录多聚酶链反应(RTPCR)和T细胞受体(TCR)基因指纹谱型图方法检测培养前后的淋巴细胞的克隆变化,并用直接测序的方法得到CTL克隆的TCR基因序列。结果B淋巴瘤相关抗原肽4次刺激体外培养的PBMC后CD8+CTL大量增殖,CD4/CD8明显下降(0.10vs1.43,P<0.05)。IgHV1QLVQSGAEV/HLAA0201四聚体和CD8双阳性的肽特异性CTL数量(49.38%)比刺激前(0.04%)明显上升。ELISA检测IFNγ的分泌表明其识别靶细胞是肽特异性和HLA限制性的。TCR基因指纹谱型图显示抗原肽反复刺激获得的CTL的TCR表达集中于个别基因家族,呈克隆性增殖。结论应用IgHV基因框架区来源的B淋巴瘤相关抗原九肽可以使特异性CTL克隆增殖,这些克隆以肽特异性和HLA限制性的方式识别靶细胞。了解这些CTL的作用和TCR识别相关抗原肽的分子结构,将有助于确定体内T细胞和B细胞相互调节的机制。