苦参素与顺铂合用对人肝癌裸鼠皮下移植瘤组织VEGF、CD31表达的影响和意义

目的分析苦参素与顺铂合用对人肝癌裸鼠皮下移植瘤组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)表达的影响及临床意义。方法建立40只人肝癌裸鼠模型,随机分为4组(对照组、苦参素组、顺铂组、联合组),采用腹腔注射方式给药,给予对照组裸鼠注射生理盐水,给予苦参素组裸鼠注射苦参素,给予顺铂组大鼠注射顺铂,给予联合组裸鼠注射苦参素和顺铂,给药结束后第15天将4组裸鼠处死,取皮下移植瘤组织,对比4组抑瘤率,采用免疫组织化学染色法检测4组裸鼠皮下移植瘤组织中VEGF、CD31的表达情况。结果联合组裸鼠的肿瘤体积小于其他3组裸鼠,差异具有统计学意义(P<0.05)。VEGF阳性率检出率为20.00%,低于苦参素组的80.00%、顺铂组的70.00%、对照组的100.00%,差异具有统计学意义(P<0.05)。联合组裸鼠的CD31阳性率检出率为30.00%,低于苦参素组的90.00%、顺铂组的70.00%、对照组的100.00%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论苦参素与顺铂合用能够抑制人肝癌皮下移植瘤组织中VEGF、CD31的表达,延缓肿瘤生长。

榄香烯乳对人胰腺癌移植瘤组织中凋亡相关蛋白表达的影响

目的:了解榄香烯乳干预治疗后人胰腺癌裸鼠移植瘤组织中PTEN、P53、Bcl-2蛋白的表达情况,初步探讨榄香烯乳对胰腺癌凋亡的影响.方法:构建人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,随机分为阴性对照组、榄香烯乳小剂量组、榄香烯乳大剂量组、吉西他滨阳性对照组和联合用药组五组,分别干预处理;采用Western blot和免疫组织化学的方法检测榄香烯乳干预治疗后人胰腺癌移植瘤组织细胞中PTEN、P53、Bcl-2蛋白表达情况.结果:Western blot结果显示榄香烯乳干预治疗后人胰腺癌移植瘤细胞中PTEN和P53蛋白表达均有升高趋势,而Bcl-2蛋白表达有下降的趋势.榄香烯乳大剂量组与阴性对照组相比,P53蛋白表达显著升高(P<0.01)而Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01).联合用药组与吉西他滨阳性对照组相比,P53蛋白表达显著升高(P<0.01),而Bcl-2蛋白表达降低不明显(P=0.985).免疫组织化学结果显示与Western blot结果大致相同的变化趋势.结论:一定剂量的榄香烯乳可以增强胰腺癌裸鼠移植瘤组织中P53蛋白的表达而降低Bcl-2蛋白的表达,从而起到促进胰腺癌细胞凋亡的作用.

参麦对小鼠移植瘤组织中bFGF和MMP-2表达的影响

目的 :观察参麦对小鼠移植瘤组织碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )表达的影响 ,探讨参麦抗肿瘤血管生成的机制。方法 :通过建立小鼠S180实体瘤模型 ,采用免疫组织化学方法 ,检测参麦对肿瘤组织bFGF和MMP 2表达的影响。结果 :参麦能减少肿瘤组织中MMP 2的含量 ,抑制肿瘤组织bFGF表达。结论 :抑制bFGF和MMP

大细胞肺癌移植瘤组织中HIF-1α、VEGF、Ki67、血清蛋白的表达及其与功能性血管数目的关系

目的:研究大细胞肺癌(LCLC)Lu65和Lu99细胞株裸鼠移植瘤组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、Ki67以及血清蛋白Albumin、IgG1、IgM的表达,及其与功能性血管数目的关系。方法:将大细胞肺癌Lu65和Lu99细胞注射至裸鼠背部皮下建立异种移植模型,利用活体冷冻技术(IVCT)制备标本,免疫组织化学法分析移植瘤侵袭组织中HIF-1α、VEGF、Ki67和血清蛋白(Albumin、IgG1、IgM)的表达,根据血管周围细胞外基质内IgM蛋白的表达情况区分功能性血管和非功能性血管并分别计数,采用t检验、χ^(2)检验及Spearman秩相关分析进行统计学分析。结果:Lu65移植瘤中可见少数肿瘤细胞核中有HIF-1α蛋白表达,Lu99移植瘤细胞核中未见HIF-1α蛋白表达,二者差异有统计学意义(P<0.05);两种移植瘤组织中VEGF和Ki67蛋白均呈高表达。HIF-1α蛋白表达水平与VEGF和Ki67蛋白无明显相关(P>0.05)。Lu65和Lu99移植瘤组织内功能性血管数目高于非功能性血管(P<0.05)。结论:Lu65和Lu99移植瘤组织中HIF-1α蛋白表达水平与VEGF、Ki67蛋白无明显相关,与细胞异质性有关。IVCT技术制备的组织标本可区分功能性血管与非功能性血管,Lu65和Lu99移植瘤组织中功能性血管数目高于非功能性血管,血清蛋白能否透过血管壁可能与其相对分子质量和血管结构有关。

KIAA1456抑制人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长

目的:探讨KIAA1456对人卵巢癌细胞株HO-8910PM裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法:将15只裸鼠随机分成3组:空白组(PM组),阴性对照组[PM(NC)组],实验组[PM(KIAA1456)组]。利用人卵巢癌细胞株HO8910PM及本课题组前期通过慢病毒介导建立的阴性对照组细胞株HO8910PM(NC)和过表达KIAA1456的细胞株HO8910PM(KIAA1456)分别在空白组、阴性对照组、实验组建立裸鼠皮下移植瘤,待成瘤成功后,分别用PBS缓冲液和携带针对随机无关序列(NC)的慢病毒液Lentivirus-NC(作为阴性对照,LV-NC),携带KIAA1456病毒液Lentivirus-KIAA1456(LV-KIAA1456)每隔4 d进行一次瘤内定点注射治疗至28 d处死裸鼠,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率;采用实时荧光定量PCR和Western blot检测移植瘤组织中KIAA1456的表达情况;免疫组化检测移植瘤中ki-67和PCNA的表达情况。结果:HO8910PM(KIAA1456)移植瘤组KIAA1456表达量明显高于阴性对照组和空白对照组(P=0.000);28 d后处死裸鼠,HO8910PM(KIAA1456)组皮下移植瘤的体积明显小于阴性对照组和空白对照组(P=0.000),抑瘤效果明显;移植瘤组织中KIAA1456的表达上调,ki-67和PCNA表达明显下调。HO8910PM(KIAA1456)组移植瘤组织中ki-67和PCNA的表达明显低于阴性对照组和空白对照组,差异具有统计学意义(P=0.000)。结论:过表达KIAA1456基因对人上皮性卵巢癌细胞HO8910PM裸鼠皮下成瘤的生长具有抑制作用,有望成为卵巢癌基因治疗的新靶点。

人鼻咽癌裸小鼠移植瘤(NCN-Z1)的建立

国内外人鼻咽癌组织裸鼠移植成功的报道仍很少,作者自1985年底起,接种38例人鼻咽癌活检组织于裸小鼠皮下,1例移植成功,至今已在鼠间传11代。该移植瘤皮下移植具有成功率高(100％)、生长较稳定、宿主带瘤存活时间较长及无自发消退等特点,光镜及电镜检查均保留了来源组织的低分化鳞状细胞癌特征,染色体检查证实为人类肿瘤染色体,认为可作为整体研究人鼻咽癌生物学特性的有用模型。

凋亡素对人卵巢癌裸鼠移植瘤生长抑制作用

目的研究VP3(凋亡素)基因真核质粒对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法构建pCDbNA—VP3真核表达栽体。人卵巢癌(COC1)细胞裸鼠异种移植瘤模型治疗实验，观察pCDbNA-VP3质粒的体内抗肿瘤作用。实验裸小鼠分为4组，每组3只。高剂量实验组pCDbNA-VP3，瘤内注射，100μg/只)；低剂量实验组(pCDNA—VP3，瘤内注射，50μg/只)；空载体对照组(pCDMA3．1(+)，瘤内注射，100μg/只)脂质体对照组(脂质体，瘤内注射，0．2mL／只)。每3天测量皮下移植瘤长、宽径，按标准公式V(m)=L(mm)×W(mm)^2×0.52计算移植瘤体积。12d后处死裸鼠，称取瘤重。RT—PCR检测皮下移植瘤组织凋亡素基因表达状况。TUNEL法观察凋亡素对皮下移植瘤细胞凋亡程序的影响。结果(1)成功构建了pCDbNA-VP3真核表达栽体；(2)pCDbNA-VP3高剂量组和低剂量组卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长明显受到抑制，高剂量实验组肿瘤生长抑制率为76％(P<0．05)，瘤重抑制率为70％(P<0．05)。低剂量组肿瘤生长抑制率为52％(P<0．05)，瘤重抑制率为49．5％(P<0．05)。(3)TUNEL试验结果表明凋亡素蛋白在体内以凋亡方式诱导肿瘤细胞死亡。结论应用凋亡素基因对卵巢癌裸鼠移植瘤具有良好的抑制作用。

miR-124抑制人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长和转移

目的:探讨微RNA-124(microRNA-124,miR-124)对人卵巢癌细胞株SKOV3裸鼠皮下移植瘤生长和远处转移的影响。方法:采用脂质体转染法将miR-124-模拟物(mimics)及其阴性对照(miR-124-mimics-negative control,miR-124-mimics-NC)分别瞬时转染至人卵巢癌SKOV3细胞中,随后将转染后的SKOV3细胞接种于裸鼠皮下,建立SKOV3细胞肿瘤模型。待成瘤后将miR-124-mimics或miR-124-mimics-NC联合脂质体每隔4 d进行一次瘤内定点注射治疗,至47 d后处死小鼠,绘制肿瘤生长曲线图并计算抑瘤率;采用实时荧光定量-PCR检测移植瘤组织中miR-124的表达情况;免疫组织化学法检测移植瘤组织中Ki-67及caspase-3的表达情况;观察肿瘤在小鼠中肝脏转移的情况,并对肝组织进行HE染色。结果:miR-124-mimics转染SKOV3细胞后,SKOV3细胞中miR-124的表达水平明显上调;47 d后处死小鼠,最终miR-124过表达组裸鼠皮下移植瘤的体积明显小于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05),抑瘤效果明显;移植瘤中miR-124的表达上调,Ki-67表达明显下调,caspase-3表达明显升高;HE染色结果显示,空白对照组和阴性对照组裸鼠肝组织中都出现了肿瘤细胞浸润,而miR-124过表达组的裸鼠未出现肝转移。结论:miR-124对人上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤生长和远端转移均具有抑制作用,有望成为卵巢癌基因治疗的新靶点。

人胃癌裸鼠胃原位种植转移模型的建立和改进

目的:建立人胃癌裸鼠胃原位种植转移模型。方法:用人胃癌细胞SGC-7901悬液接种于裸鼠皮下,形成稳定传代的皮下移植瘤。将皮下移植瘤组织再接种于裸鼠胃浆肌层,观察移植肿瘤的生长状况、移植成功率和自发转移的发生率及组织学变化等生物学特性。结果:肿瘤组织块保留了人胃腺癌的组织学特点,人胃癌裸鼠原位移植模型成瘤率为100%(20/20),肝脏转移率为45%(9/20)。结论:人胃癌裸鼠原位移植瘤模型的生物学行学与人胃癌自然生长和转移过程相似,为研究人胃癌转移机制提供了理想的模型。

重组人血管内皮抑制素对小鼠肿瘤和心肌中血管结构及血管生成相关因子表达的影响

目的观察重组人血管内皮抑制素对小鼠肿瘤及心肌中微血管影响的差异。方法40只小鼠随机分为空白对照组（未荷瘤，生理盐水100ml／d）、药物对照组（未荷瘤，重组人血管内皮抑制素400μg／d）、模型组（荷瘤，生理盐水100μl／d）和实验组（荷瘤，重组人血管内皮抑制素400μg／d），分别处理28d。实验前后称量小鼠体重，测量移植瘤体积。采用免疫组化法检测小鼠心脏和移植瘤组织中基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、缺氧诱导因子1α（HIF—1α）以及血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达情况，计数微血管密度（MVD）。以CD34与Masson双染法观察微血管结构的变化。结果实验组小鼠肿瘤体积的增加值为（48．18±37．31）mm^3，低于模型组[（113．80±73．27）mm^3，P〈0．05]；各组小鼠体重变化的差异无统计学意义（P〉0．05）。应用重组人血管内皮抑制素后，移植瘤组织中MMP-9和VEGF蛋白的表达显著降低，移植瘤组织中MMP-2、HIF-1α以及心肌组织中MMP-2、MMP-9、HIF—1α和VEGF蛋白的表达均无显著变化；移植瘤组织的MVD显著降低，胶原覆盖血管的比例升高，而心肌组织的MVD和结构几乎无变化。结论重组人血管内皮抑制素可通过下调移植瘤组织中MMPs和VEGF蛋白的表达，降低MVD，抑制移植瘤的生长，并可使移植瘤血管趋向成熟，但不能降低心肌组织中MMPs的表达和成熟血管的MVD。