对虾组织蛋白质和同工酶表型及其在病虾中的变化

利用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳和非变性聚丙烯酸胺凝胶电泳对中国对 虾四种组织的蛋白质、酯酶、乳酸脱氢酶和超氧化物歧化酶等同工酶进行了分析研 究，并将健康虾与流行病病虾进行了比较。结果表明，肝胰脏和肌肉组织的蛋白质 表型、肝胰脏酯酶和超氧化物歧化酶的表型在健康虾和病虾之间存在着较明显的 差异。说明肝胰脏内蛋白质代谢有明显的紊乱现象。肝胰脏和肌肉的组织蛋白、肝 酯酶和超氧化物歧化酶的特异性变化，可作为虾病早期诊断的辅助指标。

小肠可吸收氨基酸模式对内蒙古白绒山羊组织蛋白质周转的影响

选用9只体况良好，体重25～30kg的2周岁内蒙古白绒山羊半同胞羯羊，安装永久性十二指肠近端瘘管和两侧颈静脉血插管进行试验，试验采用随机区组试验设计，3个试验处理为在基础日粮条件下的3种十二指肠氨基酸灌注模式，分别为M、M90＋C10和M80＋C20。本试验采用稳定性同位素ds—Phe大剂量一次灌注法，测定不同组织的蛋白质合成率（FSR）。结果表明，小肠可吸收氨基酸模式对皮肤蛋白质的FSR有显著影响。其中，M90＋C10组和M80＋C20组皮肤蛋白质的FSR极显著高于M组（P〈0．01）。小肠可吸收氨基酸模式对空肠、肝脏和肌肉组织的FSR无显著影响（P〉0．05）。同时表明小肠可吸收氨基酸模式对氨基酸在外周组织，尤其是皮肤和肌肉组织问的分配具有显著影响（P〈0．05）。

人肺鳞癌组织及癌旁组织蛋白质双向电泳图谱的差异分析

背景与目的:肺鳞癌的发生发展是一个多因素、多步骤的过程,虽然从基因和转录水平已对肺癌进行了许多成功的研究,但其癌变机制仍不十分明确,目前尚缺乏有效的用于肺鳞癌早期诊断和预后监测的特异性分子标志物。本研究的目的是利用蛋白质组学方法,建立分辨率高和重复性好的人肺鳞癌组织及其癌旁正常支气管上皮组织的双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定其差异表达的蛋白质。方法:利用固相pH梯度(immobilizedpHgradient,IPG)双向凝胶电泳(two-dimensionalelectrophoresis,2-DE),分离人肺鳞癌组织及癌旁正常支气管上皮组织的总蛋白质,用图像分析软件比较分析,以识别差异表达的蛋白质;应用质谱仪(massspectrometry)得到相应的肽质指纹图谱(peptidemassfingerprint,PMF),然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点。结果:(1)建立双向凝胶电泳图谱:癌组织和癌旁正常支气管上皮组织3块凝胶的平均蛋白质点数分别为1349±67和1297±73,平均匹配的点数分别为1235±48和1183±56,匹配率达91.5%和91.2%;同一癌组织的3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦(Isoelectricfocusing,IEF)方向的偏差是(0.873±0.125)mm,在十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE方向上的偏差为(1.025±0.213)mm。(2)肽质指?

胃粘膜组织蛋白质组双向凝胶电泳技术的初步建立与优化

为建立并优化人类胃粘膜组织蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术 ,提高其分辨率及重复性。采用刮取手术胃粘膜组织 ,对以固相pH梯度为第一向的双向凝胶电泳的关键因素与环节 ,如样品处理、上样量、电泳参数、凝胶浓度和SDS凝胶电泳染色方法等进行一系列的优化。结果以固相pH梯度———IPG胶条 (pH =3～10 )进行第一向等电聚焦 ,以SDS均一胶 (13% )的垂直电泳为第二向 。

缺氧预处理大鼠心肌组织蛋白质组双向凝胶电泳分析

目的 :分析缺氧预处理诱导的大鼠心肌组织与正常心肌组织蛋白质的差异表达。方法 :采用双向凝胶电泳技术和计算机辅助的图像分析方法 ,对缺氧预处理大鼠心肌组织与正常大鼠心肌组织胞浆蛋白质进行分离和比较分析。结果 :正常心肌组织可分离 2 71± 2 3 个蛋白点 ,蛋白点匹配率为 75 .2 3 %± 3 .5 4%。有 5种蛋白质在缺氧处理后发生了明显和稳定的量的改变 ,其中 2种 (Mr/ pI :18.1KD/ 3 .86,5 1.43KD/ 4.67)在缺氧预处理后表达增高 ,3种 (Mr/pI :3 3 .14KD/ 9.11,3 1.89KD/ 8.5 8,15 .85KD/ 8.2 4)在缺氧预处理后表达降低。结论 :缺氧预处理大鼠心肌组织双向电泳后蛋白表达与正常心肌组织有明显差异 ,有 2种蛋白表达明显增高 ,3种明显降低。

动物组织蛋白质提纯方法的研究进展

综述近年动物组织蛋白质的提取及纯化技术的研究进展,以期为进一步研究动物组织蛋白质提供帮助和参考。

从肝纤维化大鼠肝组织蛋白质组变化探讨肝与他脏关系的蛋白质基础

目的:以CCl_4大鼠肝纤维化为模型,研究肝与他脏在生理、病理之间的相互联系,为中医理论对“以象测脏”认识脏象的方法论提供科学依据,探讨中医整体观念的物质基础。方法:将 Wistar大鼠,随机分正常组、模型组。模型大鼠皮下注谢40％CCl_4-橄榄油溶液每周2次,共2周; 停止剌激后再观察4周,正常组以生理盐水替代CCl_4皮下注射。分别于第4、8、12、16周末分批处死大鼠。留取肝组织分别做病理、羟脯氨酸、蛋白质的分步提取。蛋白质定量后进行二维电泳,凝胶银染,运用PDQUEST 2-DE图象分析软件对获得的蛋白质图谱进行分析,运用MALDI-TOF-MS 鉴定了30多个差异表达的蛋白质。结果:①CCl_4肝纤维化大鼠出现生命活动整体反应,如体重、活动度等下降;②肝纤维化过程中存在蛋白质合成和物质代谢碍障;③蛋白质组改变的质谱鉴定。结果显示:肝纤维化大鼠与正常大鼠肝组织差异表达的蛋白质与物质代谢相关的蛋白质有过氯酸可溶性蛋白质、磷脂酰肌醇转移酶、磷酸甘油酸激酶;与神经内分泌相关的蛋白质分子有儿茶酚-邻 -甲基转移酶、雌激素转磺酶亚型6、转录起始因子、非粘附性细胞蛋白质。结论:肝与他脏功能相关、病理相连是以蛋白质分子为物质基础,肝纤维化是一个涉及多个功能的整体病变过程,而引起机体整体功能改变的物质基础是蛋白质分子。

CCl_4大鼠肝纤维化形成与消减过程中肝组织蛋白质组的动态变化及扶正化瘀方的干预作用

目的:通过大鼠纤维化肝组织高亲水性蛋白质分子差异展示及扶正化瘀方干预作用,寻找与扶正化瘀方治疗肝纤维化相关的蛋白质分子。方法:通过皮下注射大鼠CCl4,分别持续4、8、12周,对大鼠肝纤维化过程进行动态观察,并在不同时期进行扶正化瘀方干预,治疗从第12周始至16周止。采用蛋白质分步抽提方法,提取肝组织蛋白质,分别进行二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DE)分离、凝胶银染,显示各组蛋白质分子的差异表达的蛋白质分子。结果:在各组银染凝胶图谱上,可辨识的蛋白质斑点达1000～1400个左右,蛋白质表达中除有肝组织看家蛋白质,模型组也有特异蛋白质表达,且在不同时期蛋白质分子表达也有差异,特异表达蛋白质分子为100至300多个不等,在不同阶段表达是不相同的,经质谱鉴定确定了有几类功能不同的蛋白质分子。结论:扶正化瘀方抗肝纤维化作用机制是多方面的,其干预作用与多种蛋白质分子相关。

人胃黏膜组织蛋白质组二维电泳图像的获得

目的初步建立并优化人类胃黏膜组织蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术,提高其分辨率及重复性。方法刮取手术胃黏膜组织,对以固相pH梯度为第一向的双向凝胶电泳的关键因素与环节,如样品处理、上样量、电泳参数、凝胶浓度和SDS凝胶电泳染色方法等进行一系列的优化。以固相pH梯度———IPG胶条(pH=3～10)进行第一向等电聚焦,以SDS均一胶(13%)的垂直电泳为第二向。结果成功地得到了胃黏膜组织的双向凝胶电泳图谱。

肾上腺切除的肾阳虚大鼠肝组织蛋白质双向电泳图谱的建立与分析

目的:建立具有高分辨率和稳定性的大鼠肝组织蛋白质组研究的双向电泳图谱,并对其进行差异蛋白质组分析。方法:正常大鼠和肾上腺切除造成的肾阳虚模型大鼠,肝组织匀浆后提取总蛋白,用Cy3或Cy5标记,每一个Cy3标记样品和一个Cy5标记样品与一个Cy2标记的内标等量混合,上样于同一胶中进行电泳分离,经不同波长单色光激发下扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。所获得的图谱用DeCyder软件进行分析。结果:在肾阳虚大鼠肝组织,有8个蛋白质表达水平显著增加,9个蛋白质表达水平显著下降。结论:分析所得的17个差异蛋白质可能与肾阳虚疾病有关。

解密脑神经组织蛋白质清单

英国的《自然·神经科学》杂志上报告了新的研究：人脑中一种名为“突触后致密体”的神经组织含有一千多种蛋白质．该组织病变会导致痴呆等一百多种神经系统疾病．这项成果将有助于更有针对性地治疗相关疾病。在获取”突触后致密体”的蛋白质清单后．可以直接检查有“嫌疑”的蛋白质．加快研究进程。

胆囊癌差异蛋白质组学分析

目的运用蛋白质组学经典技术,双向凝胶电泳、质谱鉴定及生物信息学分析在胆囊癌组、正常胆囊对照组中寻找差异蛋白,发现和鉴定胆囊癌相关的肿瘤标志物及潜在的治疗靶点。方法标本分两组:胆囊癌组-胆囊癌组标本59例;正常对照组-胆囊癌癌旁组织标本59例。组织样品通过洗涤、裂解、离心收集总蛋白样本,分装冻存。经过第一向等点聚焦、第二向SDS-PAGE电泳,凝胶经考马斯亮蓝染色显色后,用Gs-800光密度仪获得凝胶图像。经PD-Quest凝胶图像分析软件进行分析后,找出有差异的蛋白点。通过蛋白指纹谱鉴定(PMF),基质辅助激光解吸附质谱技术(MALDI-TOF)获得差异蛋白碎片的二级质谱,利用Biotools软件采集肽碎片质荷比信息;利用Mascot搜索引擎对数据库进行检索,鉴定差异蛋白质的氨基酸序列,获得相应特异蛋白质信息。结果发现66个差异表达蛋白。其中在胆囊癌中上调表达蛋白21个,下调表达蛋白45个。21个差异蛋白得分大于56,在胆囊癌中上调表达的10个,下调表达的11个。主要包括膜联蛋白、膜突蛋白、热休克蛋白、波形蛋白、视黄醛脱氢酶1、半乳凝素等。结论上述蛋白可能在肿瘤的发生发展机制中起着重要的作用,是诊断、治疗的潜在靶点,值得后续进一步研究。

~3H亮氨酸参入法测定离体心脏组织条蛋白质蓄积速度

<正> 目前多用同位素参入的方法测定心肌蛋白质合成速度,一般都在整体动物、灌流心脏或培养的心肌细胞中进行。本文报道我们采用心脏组织条行~3H-亮氨酸参入法来测定心脏组织蛋白质蓄积的方法。

雏鸡组织中的蛋白质更新与日龄的关系

在禽类研究中,与家禽体内蛋白质代谢有关的研究报道很少.在80年代,日龄对雏鸡蛋白质代谢的影响主要是针对鸡的整个胴体来作分析的,那时着重讨论了整个胴体的蛋白质合成(以每天克计算)增长情况,而不是蛋白质合成率.例如:每天合成和分解的蛋白质比例(以每天百分率计算),当时获得的结果与从哺乳动物中获得的结果是一致的.然而,在各个不同组织中是否都是如此,仍是个未知数.因此,我们通过测量肝脏和按照组织化学特性选择不同类型的骨骼肌(胸大肌、前背阔肌和缝匠肌)来研究商品代肉仔鸡早期(2、3、4周龄)发育过程中的体内组织蛋白质的更新情况.

异烟肼耐药和敏感结核分枝杆菌的比较蛋白质组织学研究（摘要）

目的研究结核分枝杆菌异烟肼耐药菌株与敏感菌株的蛋白质表达差异,鉴定结核分枝杆菌中与异烟肼耐药相关的菌体蛋白.方法应用双向电泳技术比较2株异烟肼耐药菌株与2株敏感菌株的全菌蛋白表达图谱差异,发现异烟肼耐药结核分枝杆菌表达量显著增加26个蛋白质斑点,通过基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪进行质谱分析,获得6个明确的肽质量指纹谱,通过蛋白质数据库进行检索分析.结果6个蛋白分别为海藻糖磷酸酶、铁钼蛋白A、莽草酸5脱氢酶、葡萄糖胺果糖6磷酸氨基转移酶、吲哚3甘油磷酸合成酶、TetR家族转录词控因子.结论上述蛋白的鉴定将对发现新型抗结核药物靶位和异烟肼耐药结核病诊断的分子标志物可能有所裨益.

水稻组织特异性蛋白质相互作用网络构建方法

组织特异的基因表达和蛋白质相互作用是研究基因调控、蛋白质功能、细胞过程的重要部分.相较于其他模式生物在蛋白质相互作用研究方面的进展,高等模式植物水稻中组织特异性蛋白质相互作用的研究十分缺乏.因此,提出了一种用于水稻组织特异性蛋白质相互作用网络构建的计算方法.该方法主要包含三部分:第一,在统一标准下融合多数据识别组织特异的基因;第二,提出了新的同源映射方法,并集成6种模式生物相互作用数据构建和评估目标物种蛋白质相互作用网络;第三,构建不同组织的蛋白质相互作用子网,并筛选高可靠的蛋白质相互作用.为了验证方法的有效性,构建并分析了水稻首个组织特异的蛋白质相互作用网络(PTSN4R:Predicted Tissue-Specific Network for Rice). PTSN4R包含了水稻23个组织的组织特异基因及对应的组织特异蛋白质相互作用子网,为分析组织特异的基因表达和蛋白质相互作用提供了便利条件. PTSN4R有助于理解水稻的生长调控机制,为水稻增产提供线索.同时,提出的方法能够方便的应用到其他物种,促进组织特异的蛋白质相互作用网络的研究.

化学发光技术在蛋白质组学研究中的应用

目的:探讨在蛋白质组学研究中应用化学发光技术分析鉴定蛋白质的方法和价值。方法:采用细胞培养、双向电泳及银染等技术建立小鼠神经元蛋白质组图谱,再用PDQuest 2D分析软件和免疫印迹持久性化学发光技术选择性地鉴定三种小鼠神经元蛋白质-PI3Kr3、MEK1、PKCα。结果:三种蛋白质的双向电泳化学发光图谱上均只出现了1个特异蛋白质斑点,信号强,背景低。结论:利用化学发光技术鉴定蛋白质简单、实用、灵敏、高效,可为蛋白质组学的研究提供有力的技术支持。

胆红素脑病仔鼠脑组织S-100的mRNA及其蛋白变化研究

目的:观察胆红素脑病仔鼠脑组织S-100蛋白(S-100)的mRNA及其蛋白变化,探讨其对胆红素脑病的诊断价值和其分子生物学机制。方法:采用新生7d龄清洁级Wistar大鼠腹腔注射胆红素200mg/kg制备胆红素脑病模型。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术动态观察胆红素脑病仔鼠不同时间点脑组织S-100mRNA表达变化;应用免疫组织化学方法动态观察不同时间点脑组织S-100蛋白表达变化。结果:实验组脑组织S-100mRNA表达12h明显升高,48h达峰值,至96h与对照组差异无显著性意义;造模后12h海马区脑组织S-100阳性表达明显升高,48h达峰值,至96h与对照组无显著性差异;皮质区6h明显升高,48h达峰值,至96h与对照组差异无显著性意义;丘脑区6h明显升高,72h下降,至96h与对照组无显著性差异;苍白球区6h明显升高,48h达峰值,72h下降,至96h与对照组比较仍有显著性差异。结论:S-100mRNA的变化同S-100蛋白的变化趋势一致,是判定胆红素脑病的可靠神经生化指标。