胃粘膜组织蛋白质组双向凝胶电泳技术的初步建立与优化

为建立并优化人类胃粘膜组织蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术 ,提高其分辨率及重复性。采用刮取手术胃粘膜组织 ,对以固相pH梯度为第一向的双向凝胶电泳的关键因素与环节 ,如样品处理、上样量、电泳参数、凝胶浓度和SDS凝胶电泳染色方法等进行一系列的优化。结果以固相pH梯度———IPG胶条 (pH =3～10 )进行第一向等电聚焦 ,以SDS均一胶 (13% )的垂直电泳为第二向 。

从肝纤维化大鼠肝组织蛋白质组变化探讨肝与他脏关系的蛋白质基础

目的:以CCl_4大鼠肝纤维化为模型,研究肝与他脏在生理、病理之间的相互联系,为中医理论对“以象测脏”认识脏象的方法论提供科学依据,探讨中医整体观念的物质基础。方法:将 Wistar大鼠,随机分正常组、模型组。模型大鼠皮下注谢40％CCl_4-橄榄油溶液每周2次,共2周; 停止剌激后再观察4周,正常组以生理盐水替代CCl_4皮下注射。分别于第4、8、12、16周末分批处死大鼠。留取肝组织分别做病理、羟脯氨酸、蛋白质的分步提取。蛋白质定量后进行二维电泳,凝胶银染,运用PDQUEST 2-DE图象分析软件对获得的蛋白质图谱进行分析,运用MALDI-TOF-MS 鉴定了30多个差异表达的蛋白质。结果:①CCl_4肝纤维化大鼠出现生命活动整体反应,如体重、活动度等下降;②肝纤维化过程中存在蛋白质合成和物质代谢碍障;③蛋白质组改变的质谱鉴定。结果显示:肝纤维化大鼠与正常大鼠肝组织差异表达的蛋白质与物质代谢相关的蛋白质有过氯酸可溶性蛋白质、磷脂酰肌醇转移酶、磷酸甘油酸激酶;与神经内分泌相关的蛋白质分子有儿茶酚-邻 -甲基转移酶、雌激素转磺酶亚型6、转录起始因子、非粘附性细胞蛋白质。结论:肝与他脏功能相关、病理相连是以蛋白质分子为物质基础,肝纤维化是一个涉及多个功能的整体病变过程,而引起机体整体功能改变的物质基础是蛋白质分子。

CCl_4大鼠肝纤维化形成与消减过程中肝组织蛋白质组的动态变化及扶正化瘀方的干预作用

目的:通过大鼠纤维化肝组织高亲水性蛋白质分子差异展示及扶正化瘀方干预作用,寻找与扶正化瘀方治疗肝纤维化相关的蛋白质分子。方法:通过皮下注射大鼠CCl4,分别持续4、8、12周,对大鼠肝纤维化过程进行动态观察,并在不同时期进行扶正化瘀方干预,治疗从第12周始至16周止。采用蛋白质分步抽提方法,提取肝组织蛋白质,分别进行二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DE)分离、凝胶银染,显示各组蛋白质分子的差异表达的蛋白质分子。结果:在各组银染凝胶图谱上,可辨识的蛋白质斑点达1000～1400个左右,蛋白质表达中除有肝组织看家蛋白质,模型组也有特异蛋白质表达,且在不同时期蛋白质分子表达也有差异,特异表达蛋白质分子为100至300多个不等,在不同阶段表达是不相同的,经质谱鉴定确定了有几类功能不同的蛋白质分子。结论:扶正化瘀方抗肝纤维化作用机制是多方面的,其干预作用与多种蛋白质分子相关。

人胃黏膜组织蛋白质组二维电泳图像的获得

目的初步建立并优化人类胃黏膜组织蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术,提高其分辨率及重复性。方法刮取手术胃黏膜组织,对以固相pH梯度为第一向的双向凝胶电泳的关键因素与环节,如样品处理、上样量、电泳参数、凝胶浓度和SDS凝胶电泳染色方法等进行一系列的优化。以固相pH梯度———IPG胶条(pH=3～10)进行第一向等电聚焦,以SDS均一胶(13%)的垂直电泳为第二向。结果成功地得到了胃黏膜组织的双向凝胶电泳图谱。

肾上腺切除的肾阳虚大鼠肝组织蛋白质双向电泳图谱的建立与分析

目的:建立具有高分辨率和稳定性的大鼠肝组织蛋白质组研究的双向电泳图谱,并对其进行差异蛋白质组分析。方法:正常大鼠和肾上腺切除造成的肾阳虚模型大鼠,肝组织匀浆后提取总蛋白,用Cy3或Cy5标记,每一个Cy3标记样品和一个Cy5标记样品与一个Cy2标记的内标等量混合,上样于同一胶中进行电泳分离,经不同波长单色光激发下扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。所获得的图谱用DeCyder软件进行分析。结果:在肾阳虚大鼠肝组织,有8个蛋白质表达水平显著增加,9个蛋白质表达水平显著下降。结论:分析所得的17个差异蛋白质可能与肾阳虚疾病有关。

植物蛋白质组学的研究进展

植物蛋白质组学的研究取得了重要进展。全面介绍了植物器官蛋白质组、植物组织蛋白质组及植物亚细胞蛋白质组的研究进展。

IgA肾病患者肾脏组织中差异细胞因子的探索研究

目的筛选IgA肾病(IgAN)患者肾脏组织中的差异蛋白质-细胞因子,进一步探讨IgAN的发病机制。方法入选年龄18~60岁,解放军总医院肾脏病科住院肾活检确诊为IgAN患者10例;泌尿外科行肾癌肾脏切除的患者10例,取癌旁6 cm以外正常肾脏组织作为对照。肾脏组织利用L-493细胞因子抗体芯片进行检测,筛选差异蛋白质,并对差异蛋白质进行基因本体论(GO)分析。以IL-33(白介素-33)利用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行验证。采用IBM SPSS Statistics 19.0软件对结果进行统计分析,利用T检验对差异蛋白质进行筛选,P<0.05,并且差异蛋白质差异倍数>1.4认为是差异蛋白质。结果 L-493细胞因子抗体芯片检测,在20例患者中(IgAN组10例,对照组10例),发现了25种差异蛋白质,GO分析结果表明:这些蛋白质主要与应激、细胞粘附、蛋白质代谢、信号转导相关。ELISA验证结果显示:IgAN患者肾组织中IL-33表达水平显著高于对照组。结论 IgAN患者肾脏组织中差异表达蛋白质直接或间接调控着炎症、细胞增殖和凋亡及纤维化过程。IL-33可能与IgAN发病机制有关。

激光显微切割/质谱联用技术在肾脏疾病诊断中的应用进展

激光显微切割(Laser microdissection,LMD)质谱(Mass spectrometry,MS)联用技术(LMD/MS)已成功应用于肾活检组织甲醛固定石蜡包埋切片的蛋白质组学研究,提高了某些肾脏病的诊断水平,显示出较好的临床应用前景。文中就LMD/MS蛋白质组学技术的原理、方法及该技术在肾淀粉样变性、膜增殖性肾小球肾炎等肾脏疾病的发病机制及诊断分型的应用进展进行综述。