血清金属蛋白酶组织抑制剂3和性别决定区Y框蛋白2在2型糖尿病肾损伤早期诊断中的临床应用

目的探究血清金属蛋白酶组织抑制剂3(tissue inhibitors of metalloproteinases 3,TIMP3)和性别决定区Y框蛋白2(transcription factor determining region Y box protein 2,SOX2)对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)肾损伤的早期诊断。方法选取2022年4月至2023年4月在华北石油管理局总医院就诊的102例T2DM患者为研究对象,根据24 h尿蛋白排泄率(uri-nary albumin excretion rate,UAER)将T2DM患者分为肾损伤组(n=40)和无肾损伤组(n=62),另选取同期在华北石油管理局总医院行体检的健康者50名为对照组。酶联免疫吸附法测定所有受试者血清TIMP3、SOX2水平;比较3组受试者一般资料、糖化血红蛋白(hemoglobin A1c,HbA1c)、UAER、血肌酐(serum creatinine,Scr)、估算肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)、血清TIMP3、SOX2水平;Pearson相关性分析血清TIMP3与SOX2及两者与HbA1c、UAER、Scr、eGFR之间的关系;受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析血清TIMP3、SOX2对T2DM患者肾损伤的诊断价值。结果T2DM患者血清TIMP3[(0.68±0.17)μg/L比(1.35±0.35)μg/L]及eGFR[(105.99±20.56)mL·min^(-1)·(1.73 m^(2))比(133.15±26.18)mL·min^(-1)·(1.73 m^(2))^(-1)]显著低于对照组(P<0.05),且肾损伤患者血清TIMP3[(0.47±0.11)μg/L比(0.82±0.21)^(-1)μg/L]及eGFR[(74.69±10.22)mL·min^(-1)·(1.73 m^(2))比(126.18±27.23)mL·min^(-1)·(1.73 m^(2))^(-1)]显著低于无肾损伤患者(P<0.05);血清SOX2[(8.91±1.82)kU/L比(5.15±1.31)kU/L]及HbA1c[(8.80±1.55)%比(5.52±0.83)%]、UAER[(70.13±18.06)mg/24 h比(13.22±3.61)mg/24 h]、Scr[(82.14±15.23)µmol/L比(53.19±5.62)µmol/L]显著高于对照组(P<0.05),且肾损伤患者血清SOX2[(10.81±2.13)kU/L比(5.15±1.31)kU/L]及UAER[(156.83±40.29)mg/24 h比(13.22±3.61)mg/24 h]、Scr[(113.77±13.58)µmol/L比(53.19±5.62)µmol/L]显著高于无肾损伤患者(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,TIMP3与UAER、Scr、HbA1c呈显著负相关(P<0.05),与eGFR呈显著正相关(P<0.05);SOX2与UAER、Scr、HbA1c呈显著正相关(P<0.05),与eGFR呈显著负相关(P<0.05);血清TIMP3与SOX2呈显著负相关(r=-0.590,P<0.05)。ROC结果显示,血清TIMP3联合SOX2诊断T2DM患者肾损伤的敏感度和特异度分别为95.0%、85.3%,显著高于TIMP3、SOX2单独测定。结论T2DM肾损伤患者血清TIMP3水平显著降低,SOX2水平显著升高,且两者与T2DM患者肾损伤密切相关,可用于T2DM患者肾损伤早期诊断。

应力环境组织培养法保存的人骨软骨移植物中胶原和基质金属蛋白酶组织抑制剂3

背景:应力可以对体内外软骨组织或软骨细胞产生多种影响。目的:观察应力环境对普通组织培养基体外保存的骨软骨移植物保存质量的影响。方法:将正常人的骨软骨移植物分成3组:对照组即新鲜移植物,普通组移植物采用普通组织培养法保存,应力组用摇床作为动态加载装置对普通组织培养法保存的骨软骨移植物进行持续周期性应力加载。结果与结论:储存移植物2周时,Western blot法和透射电镜观察显示,与静态环境下保存相比,动态加载环境使关节软骨细胞外基质中基质金属蛋白酶组织抑制剂3的表达明显提高(P<0.01),能更好地保护基质中胶原成分的超微结构。结果证实,应力环境有利于保存人同种异体移植物软骨细胞和胶原的超微结构,动态非接触加载可提供一种更好的库存人同种异体骨软骨移植物的方法。

基质金属蛋白酶组织抑制剂-3对喉癌细胞顺铂化疗敏感性提高的机制研究

目的探讨基质金属蛋白酶组织抑制剂-3(TIMP-3)提高喉癌Hep-2细胞顺铂化疗敏感性的作用机制。方法试验分为空白对照组(A组)、顺铂组(B组)和顺铂+TIMP-3组(C组),A组和B组均为10 m L Hep-2细胞液溶于10%胎牛血清中,分别加入0和5μmol/L顺铂5 m L,C组为10 m L转染TIMP-3的Hep-2细胞液加入顺铂(5μmol/L) 5 m L,置CO2培养箱中,于37℃、5%CO2、20%O2条件下培养72 h。以噻唑蓝(MTT)比色法检测Hep-2细胞活力及细胞单克隆形成数目,以流式细胞仪检测Hep-2细胞凋亡情况,以荧光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位(MMP)水平,以实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测TIMP-3 mRNA表达水平,以酶联免疫吸附法检测细胞色素酶C、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)蛋白表达水平。结果与A组比较,B组和C组细胞活力、存活率水平、细胞单克隆形成数目、MMP均显著降低,细胞凋亡率、TIMP-3 mRNA和细胞色素酶C、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平均显著升高(P <0. 01);C组上述指标均优于B组(P <0. 01);TIMP-3与细胞色素酶C、Caspase-3、Caspase-9呈显著正相关(P <0. 01)。结论 TIMP-3能提高喉癌Hep-2细胞顺铂化疗敏感性,其机制与上调TIMP-3,促进MMP去极化和线粒体细胞色素C释放,进而诱导Caspase-3和Caspase-9过表达引起细胞凋亡有关。

可溶性髓样细胞触发受体-1和组织金属蛋白酶抑制剂3水平与糖尿病肾病严重程度及预后的关系

目的观察糖尿病肾病(DN)患者血清可溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM-1)、组织金属蛋白酶抑制剂3(TIMP3)水平变化,探讨其与DN患者病情严重程度及预后的关系。方法2018年1月—2020年12月西安交通大学第一附属医院诊治DN患者130例(DN组)、单纯2型糖尿病(T2DM)患者80例(T2DM组),同期健康体检者80例(对照组),均采用ELISA法检测血清sTREM-1、TIMP3水平。DN组患者根据估算肾小球滤过率(eGFR)分为G_(1)期组[eGFR≥90 mL/(min·1.73 m^(2))]31例,G_(2)期组[eGFR 60~<90 mL/(min·1.73 m^(2))]18例,G_(3)期组[eGFR 30~<60 mL/(min·1.73 m^(2))]25例,G_(4)期组[eGFR 15~<30 mL/(min·1.73 m^(2))]56例,比较4组血清sTREM-1、TIMP3水平。随访3年,DN患者根据预后分为预后不良组39例和预后良好组91例,比较2组年龄及血清sTREM-1、TIMP3水平等临床资料。采用Spearman相关法分析DN患者eGFR与血清sTREM-1、TIMP3水平的相关性;采用多因素Cox回归分析DN患者预后不良的影响因素;绘制ROC曲线,评估血清sTREM-1、TIMP3预测DN患者预后不良的效能。结果对照组、T2DM组、DN组血清sTREM-1[(71.45±19.34)、(101.24±24.83)、(138.21±33.68)ng/L]、TIMP3[(968.99±187.77)、(862.21±202.93)、(671.55±160.55)ng/L]水平比较差异均有统计学意义(F=146.005,P<0.001;F=72.384,P<0.001),其中血清sTREM-1水平依次升高(P<0.05),TIMP3水平依次降低(P<0.05)。G_(1)期组、G_(2)期组、G_(3)期组、G_(4)期组血清sTREM-1[(94.41±16.93)、(125.59±14.71)、(138.62±11.68)、(166.33±20.95)ng/L]、TIMP3[(858.87±81.85)、(765.05±64.48)、(696.16±30.38)、(526.82±103.85)ng/L]水平比较差异均有统计学意义(F=112.836,P<0.001;F=114.064,P<0.001),其中血清sTREM-1水平依次升高(P<0.05),TIMP3水平依次降低(P<0.05)。DN患者eGFR与血清sTREM-1水平呈正相关(r=0.787,P<0.001),与血清TIMP3水平呈负相关(r=-0.796,P<0.001)。随访(2.53±0.36)年,130例DN患者预后不良发生率为30.00%。预后不良组年龄[(62.62±11.11)岁]大于预后良好组[(58.20±11.40)岁](t=2.039,P=0.043),高血压比率(35.90%)及糖化血红蛋白[8.07%(7.37%,9.48%)]、血尿酸[(393.23±66.97)mmol/L]、血肌酐[185.76(158.48,212.46)μmol/L]、sTREM-1[(163.12±27.16)ng/L]水平均高于预后良好组[13.19%、7.43%(6.68%,8.41%)、(358.11±80.68)mmol/L、159.12(133.67,189.54)μmol/L、(127.54±30.50)ng/L](χ^(2)=8.800,U=3.480,t=2.388,U=2.949,t=6.293,P均<0.05),eGFR[21.80(17.13,39.62)mL/(min·1.73 m^(2))]及白蛋白[(31.62±7.05)g/L]、TIMP3[(550.49±155.35)ng/L]水平均低于预后良好组[60.36(23.36,95.46)mL/(min·1.73 m^(2))、(34.41±5.19)g/L、(723.44±133.14)ng/L](U=5.108,P<0.001;t=2.227,P=0.030;t=6.450,P<0.001)。高血压(HR=3.587,95%CI:1.110~11.589,P=0.033)、糖化血红蛋白(HR=2.801,95%CI:1.383~5.671,P=0.004)、eGFR(HR=0.956,95%CI:0.928~0.985,P=0.003)、sTREM-1(HR=1.047,95%CI:1.020~1.074,P=0.001)、TIMP3(HR=0.992,95%CI:0.987~0.996,P=0.001)是DN患者预后不良的影响因素。血清sTREM-1、TIMP3分别以132.67、606.51 ng/L为最佳截断值,二者单独及联合预测DN患者预后不良的AUC分别为0.793(95%CI:0.713~0.859,P<0.001)、0.796(95%CI:0.717~0.862,P<0.001)、0.875(95%CI:0.806~0.927,P<0.001),灵敏度分别为89.74%、66.67%、79.49%,特异度分别为53.85%、81.32%、87.91%;二者联合预测DN患者预后不良的AUC大于sTREM-1、TIMP3单独预测(Z=2.767,P=0.007;Z=2.763,P=0.006)。结论随病情严重程度加重,DN患者血清sTREM-1水平升高,TIMP3水平降低;有高血压、sTREM-1和糖化血红蛋白升高、eGFR和TIMP3水平降低的DN患者预后不良风险较大;血清sTREM-1、TIMP3联合预测DN患者预后不良的价值较高。

基质金属蛋白酶3及其抑制剂3在子痫前期患者胎盘中的表达

目的:通过检测子痫前期患者胎盘组织中基质金属蛋白酶3(MMP-3)及其抑制剂3(TIMP-3)的表达,以探讨两者的关系及其在子痫前期发病中的作用。方法:收集34例子痫前期患者(子痫前期组)及32例正常晚期妊娠妇女(正常对照组)的胎盘组织,用免疫组化法检测MMP-3及TIMP-3在胎盘组织中的表达。同时进行HE染色,选取5个高倍视野,计数绒毛血管数。结果:①MMP-3和TIMP-3在胎盘组织的蜕膜细胞和绒毛滋养细胞均有表达。②子痫前期组胎盘蜕膜细胞和绒毛滋养细胞中MMP-3的表达均显著低于对照组(P<0.01)。TIMP-3在子痫前期组胎盘蜕膜细胞和绒毛滋养细胞中的表达量均显著高于对照组(P<0.01)。③子痫前期组胎盘绒毛血管密度明显低于对照组(P<0.01)。结论:子痫前期患者胎盘中MMP-3与TIMP-3的表达情况与正常晚期妊娠妇女存在差异,提示妊娠妇女胎盘组织中MMP-3和TIMP-3的表达水平变化可能与子痫前期的发生、发展相关。

阿尔茨海默病患者血清Ang、TIMP3水平与β-淀粉样蛋白沉积及认知功能的关系

目的探讨阿尔茨海默病(AD)患者血清血管抑制素(Ang)、组织金属蛋白酶抑制剂3(TIMP3)水平与β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积及认知功能的关系。方法将2020年1月至2022年5月于该院治疗的143例AD患者纳入研究作为AD组,另选取同期55例体检健康者作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清Ang、TIMP3水平。采用Pearson/Spearman相关分析AD患者血清Ang、TIMP3水平与Aβ1-40、Aβ1-42、总Tau(t-Tau)、磷酸化Tau181(p-Tau181)水平和简易精神状态检查表(MMSE)评分的相关性,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Ang、TIMP3水平对AD的诊断价值。结果AD组血清Ang、TIMP3水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson/Spearman相关分析显示:AD患者血清Ang、TIMP3水平与Aβ1-40水平(r=-0.446、-0.465,P<0.05)及MMSE评分(r=-0.558、-0.607,P<0.05)均呈负相关,与Aβ1-42水平呈正相关(r=0.443、0.437,P<0.05),与t-Tau、p-Tau181水平无明显的相关性(P>0.05)。ROC曲线分析显示,血清Ang、TIMP3水平单项及联合用于AD诊断的曲线下面积(AUC)分别为0.798、0.793、0.901,灵敏度分别为96.50%、67.13%、74.13%,特异度分别为56.36%、80.00%、90.91%。血清Ang、TIMP3水平联合用于AD诊断的AUC大于二者单项用于AD诊断(P<0.05)。结论血清Ang、TIMP3水平降低与AD患者认知功能下降和Aβ沉积有关,可作为AD诊断的辅助指标,而且血清Ang、TIMP3水平联合检测有助于提升对AD的诊断效能。

TIMP3/MMP9通路与非小细胞肺癌上皮间质转化的相关性研究

目的:研究TIMP3/MMP9通路与非小细胞肺癌上皮间质转化的相关性。方法:选取2020年6月-2022年3月皖西卫生职业学院附属医院49例非小细胞肺癌患者癌组织以及22例患者癌旁组织,比较TIMP3/MMP9通路相关蛋白差异并采用spearman法检验其相关性。结果:非小细胞肺癌组织与癌旁组织间,组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移间TIMP3/MMP9通路相关蛋白比较差异明显(P<0.05);spearman分析结果显示:TIMP3与E-钙黏蛋白呈正相关(P<0.05),与波形蛋白呈负相关(P<0.05),MMP9与E-钙黏蛋白呈负相关(P<0.05),与波形蛋白呈正相关(P<0.05)。结论:TIMP3/MMP9通路与非小细胞肺癌上皮间质转化相关。

电针对负透镜诱导型近视豚鼠视网膜中MMP-3和TIMP-3及Col3α1表达的影响

目的:探讨电针对负透镜诱导型近视豚鼠视网膜中基质金属蛋白酶(MMP)-3、金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-3和III型胶原α1(Col3α1)表达的影响。方法:将80只豚鼠随机分为正常对照组、负透镜诱导型近视组、电针干预组和假穴组,每组20只。正常对照组不做任何干预,负透镜诱导型近视组、电针干预组和假穴组,右眼均配戴-6.0 D透镜,左眼不戴镜。戴镜同时电针干预组在合谷穴与太阳穴给予电针刺激,假穴组豚鼠在假穴位进行干预。造模前,造模2、4 wk检影验光检测屈光度,A超检测眼轴长度,HE染色观察视网膜组织结构变化,定量聚合酶链反应(Q-PCR)和蛋白免疫印迹(WB)检测视网膜中MMP-3、TIMP-3、Col3α1 mRNA和蛋白表达的情况。结果:造模2、4 wk,负透镜诱导型近视组与正常对照组相比眼轴长度均明显增加(均P<0.05),屈光度均明显降低(均P<0.05);与负透镜诱导型近视组相比,电针干预组干预后眼轴长度均减少(均P<0.05),屈光度均增加(均P<0.05)。HE染色显示,正常对照组豚鼠视网膜组织各层分界明显,排列规则;负透镜诱导型近视组视网膜厚度、内外核层厚度及细胞数量减少,排列不规则;电针干预组视网膜整体结构较为完善,排列较规则,组织各层形态结构未出现明显异常。Q-PCR和WB检测结果显示,负透镜诱导型近视组视网膜中MMP-3、TIMP-3和Col3α1 mRNA及蛋白表达均比正常对照组明显升高(均P<0.05);而电针干预组干预后视网膜中MMP-3、TIMP-3和Col3α1mRNA及蛋白表达均较负透镜诱导型近视组明显降低(均P<0.05)。结论:电针能够延缓负透镜诱导型近视豚鼠眼轴增长,下调负透镜诱导型近视豚鼠视网膜中的MMP-3、TIMP-3及Col3α1 mRNA及蛋白表达。

柚皮素通过调控平滑肌细胞TIMP-3表达促进动脉粥样硬化斑块稳定

[目的]探究柚皮素对动脉粥样硬化斑块胞外基质重构和斑块稳定性的影响。[方法]分离原代小鼠血管平滑肌细胞,进行不同剂量的柚皮素处理。对高脂诱导的ApoE-/-小鼠进行柚皮素灌胃16周,天狼星红-苏木精染色分析主动脉根部斑块坏死核面积、斑块内胶原含量和纤维帽厚度,Van Gieson染色检测弹力蛋白降解,明胶酶谱法和荧光标记明胶法检测斑块内基质金属蛋白酶(MMP)活性。[结果]柚皮素(50μmol/L)促进平滑肌细胞信号转导及转录活化因子6(STAT6)磷酸化和组织型基质金属蛋白酶抑制剂3(TIMP-3)的转录活性,TIMP-3的表达升高3.1倍(P<0.001)。柚皮素(80 mg/kg)处理后,与对照组相比,主动脉根部斑块坏死核面积降低53%(P<0.01)、纤维帽厚度提高近50%(P<0.05),弹力纤维降解程度降低。同时,柚皮素促进斑块内TIMP-3的表达,斑块内MMP活性也相应降低。慢病毒介导的体内抑制TIMP-3表达可降低柚皮素对斑块稳定的保护作用。[结论]柚皮素通过提高平滑肌细胞内TIMP-3表达,改善细胞外基质成分,促进动脉粥样硬化斑块稳定。

miR-181b过表达对胶质瘤U87细胞中MT1-MMP和TIMP3蛋白表达和细胞侵袭能力的影响

目的:探讨微小RNA-181b(miR-181b)过表达对人胶质瘤细胞中膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)和金属蛋白酶组织抑制剂3(TIMP3)表达的调控作用及对细胞侵袭能力的影响。方法:将培养于DMEM培养基的人胶质瘤U87细胞分为阴性对照组(不做任何处理)、空载组(转染Lipofetamine 2000)、乱序组(转染乱序has-miR-181b寡核苷酸)和miR-181b组(转染has-miR-181b寡核苷酸)。qRT-PCR法检测各组细胞中miR-181b基因表达水平,Western blotting法检测各组细胞中MT1-MMP和TIMP3蛋白的相对表达水平,基质胶侵袭试验检测各组细胞的侵袭能力,测定各组细胞的趋化运动抑制率、迁移率和细胞黏附率;生物信息学数据库预测miR-181b的侯选靶基因。结果:miR-181b组U87细胞中miR-181b基因表达水平明显高于其他各组(P<0.01),呈过表达。miR-181b组U87细胞中MT1-MMP蛋白表达水平低于其他各组(P<0.01),miR-181b与MT1-MMP蛋白表达水平呈负相关关系(r=-0.787,P<0.05);miR-181b组U87细胞中TIMP3蛋白表达水平高于其他各组(P<0.01),miR-181b与TIMP3蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.801,P<0.05)。基质胶侵袭试验中miR-181b组穿膜细胞数明显低于其他各组(P<0.05)。与其他3组比较,miR-181b组U87细胞的趋化运动抑制率升高、迁移率和细胞黏附率降低(P<0.05)。生物信息学数据库预测,在MT1-MMP的3′非翻译区(3′UTR)有1个与miR-181b的结合位点,在TIMP3的3′UTR有2个与miR-181b的结合位点。结论:miR-181b过表达可下调MT1-MMP和上调TIMP3蛋白的表达,从而抑制胶质瘤细胞的侵袭能力;miR-181b作为关键性调节miR,可能成为胶质瘤治疗的重要靶标。

TIMP-3在肝癌组织中的表达及其与肿瘤侵袭转移的关系

目的:检测金属蛋白酶-3组织抑制剂(TIMP-3)在肝细胞癌患者血浆和肿瘤及正常肝组织中的表达并探讨其临床意义。方法:收集56例肝细胞癌患者和30例对照组的血浆,从肿瘤大小、分化程度、肝外转移、门脉转移及淋巴转移几个因素比较TIMP-3蛋白表达水平;取手术标本包括30例原位癌组织标本、30例门脉癌栓组织标本、30例淋巴转移组织标本以及30例肝正常组织标本,采用RT-PCR和Western blotting法检测各个样本的TIMP-3mRNA及蛋白表达,结合临床病理资料分析其意义。结果:(1)有肝外转移患者的血浆TIMP-3蛋白表达水平明显低于无肝外转移者(P<0.05)。(2)TIMP-3 mRNA在原位肝癌组织中表达水平为0.52±0.09,在门脉癌栓组织中的表达水平为0.42±0.07,在淋巴转移灶的表达水平为0.40±0.08,在正常肝组织中表达水平为0.78±0.09;3组肿瘤组织与正常肝组织相比,TIMP-3 mRNA表达均降低,显著差异(P<0.01)。(3)TIMP-3蛋白在原位肝癌组织中表达水平为77.04±8.83,在门脉癌栓组织中的表达水平为64.43±3.80,在淋巴转移灶的表达水平为62.80±3.73,在正常肝组织中表达水平为115.08±8.60;3组肿瘤组织与正常肝组织相比TIMP-3蛋白表达均降低,显著差异(P<0.01)。结论:肝癌患者血浆和组织中TIMP-3的表达水平明显下降,在转移灶中的表达下降更显著,提示TIMP-3的低表达与肿瘤细胞的侵袭转移能力有关。

MMP-3、TIMP-3在人胃癌组织中的表达及意义

目的:探讨MMP-3和TIMP-3在人胃癌组织中的表达及其意义。方法:根据胃癌的病理大体分型将40例胃癌组织分为早期组和晚期组。其中,早期组同时不伴有淋巴结转移,晚期组伴有淋巴结转移。采用光镜、透射电镜和免疫组化方法对这两组胃癌组织的超微结构,MMP-3,TIMP-3表达和MMP-3/TIMP-3的比值进行检测。结果:MMP-3和TIMP-3主要表达于癌细胞胞浆内。早期组MMP-3阳性表达细胞较少,晚期组阳性细胞较多,二者数密度和面密度比较,具有统计学意义(P<0.01);早期组TIMP-3阳性表达细胞较多,晚期组阳性细胞较少,二者比较,具有统计学意义(P<0.01)MMP-3/TIMP-3的比值在胃癌晚期较早期增大,具有统计学意义(P<0.01);电镜观察显示胃癌早期淋巴细胞浸润较多,癌细胞穿基膜不明显,晚期则淋巴细胞浸润较少,癌细胞穿基膜明显。结论:MMP-3,TIMP-3的表达程度和MMP-3/TIMP-3的比值可作为判定胃癌的侵袭和转移的指标,对其预后的判断具有参考价值。

TIMP-3基因真核表达载体的构建及其对乳腺癌MDA-MB-453细胞生长及侵袭的抑制作用

目的:构建组织基质金属蛋白酶抑制剂3(TIMP-3)真核表达载体并转染乳腺癌MDA-MB-453细胞,探讨TIMP-3对MDA-MB-453细胞生长及侵袭的抑制作用。方法:采用RT-PCR法从人新鲜胎盘组织中获得TIMP-3cDNA,连接至pMD18-T载体,EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切pMD18-T-TIMP3重组质粒及pcDNA3.1载体并连接,构建pcDNA-TIMP-3真核载体,酶切鉴定、测序。将乳腺癌MDA-MB-453细胞分为正常对照组、pcDNA空载体组(只转染pcDNA空载体)和pcDNA-TIMP-3组(转染pcDNA-TIMP-3)。Western blotting法测定蛋白表达,采用MTT法和Boyden小室侵袭实验测定各组细胞的增殖活性及侵袭能力。结果:重组载体经过EcoRⅠ和XbaⅠ酶切后,产生633bp的TIMP-3目的片段和pcDNA 3.1线性化载体,经自动测序仪测定TIMP-3序列完全正确。转染重组载体后MDA-MB-453细胞稳定表达了TIMP-3,与正常对照组和pcDNA空载体组比较,pcDNA-TIMP-3组细胞增殖活性明显降低(P<0.05),穿透以Ⅰ型胶原(ColⅠ)、层黏连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)和玻璃连接蛋白(VN)包被的Matrigel膜的侵袭细胞数明显减少(P<0.05)。结论:成功构建pcDNA3.1-TIMP-3真核表达载体,可在MDA-MB-453细胞中高表达TIMP-3蛋白,并对MDAMB-453细胞生长及侵袭性有抑制作用。

MMP-3、TIMP-3在人胃癌组织中的表达及意义

目的:探讨MMP-3和TIMP-3在人胃癌组织中的表达及其意义。方法:根据胃癌的病理大体分型将40例胃癌组织分为早期组和晚期组。其中,早期组同时不伴有淋巴结转移,晚期组伴有淋巴结转移。采用光镜、透射电镜和免疫组化方法对这两组胃癌组织的超微结构,MMP-3,TIMP-3表达和MMP-3/TUMP-3的比值进行检测。结果:MMP-3和TIMP-3主要表达于癌细胞胞浆内。早期组MMP-3阳性表达细胞较少,晚期组阳性细胞较多,二者数密度和面密度比较,具有统计学意义(P<0.01);早期组TIMP-3阳性表达细胞较多,晚期组阳性细胞较少,二者比较,具有统计学意义(P<0.01)MMP-3/TIMP-3的比值在胃癌晚期较早期增大,具有统计学意义(P<0.01);电镜观察显示胃癌早期淋巴细胞浸润较多,癌细胞穿基膜不明显,晚期则淋巴细胞浸润较少,癌细胞穿基膜明显。结论:MMP-3,TIMP-3的表达程度和MMP-3/TIMP-3的比值可作为判定胃癌的侵袭和转移的指标,对其预后的判断具有参考价值。

兔退变椎间盘纤维环及髓核组织中的PG、MMP-3、TIMP-2表达变化及意义

目的：观察兔退变椎间盘纤维环和髓核组织中蛋白多糖（PG）、基质金属蛋白酶-3（MMP-3）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-2（TIMP-2）的表达，并探讨其意义。方法新西兰大白兔42只，直立位下建立椎间盘退变模型，均分为实验组和对照组。两组分别于建模后4、8、12周各取7只动物，取 L4～5椎间盘组织采用高碘酸-希夫（PAS）染色检测髓核与纤维环组织中的 PG，以灰度值表示其相对表达量；免疫组化 SP法检测椎间盘纤维环和髓核组织中的 MMP-3及 TIMP-2，以平均光密度值（MOD）表示其相对表达量。结果实验组、对照组建模4、8、12周髓核组织中 PG灰度值均高于纤维环组织（P＜0．05）；两组建模12周时纤维环、髓核PG灰度值均高于8周时，且建模8周时髓核 PG灰度值高于4周时（P＜0．05）。随着建模时间的延长，实验组中MMP-3和TIMP-2的相对表达量均增加明显。髓核中，对照组及实验组同一时间点 MMP-3的平均 MOD值明显高于 TIMP-2。实验组纤维环中TIMP-2较 MMP-3表达变化明显。结论椎间盘退变过程中髓核中PG的含量变化早于纤维环，通过对 MMP-3/TIMP-2在椎间盘退变中所起作用的研究结合髓核 PG的变化可能会对临床诊断、基因治疗和组织工程技术的应用有一定帮助。而且对 MMPs和TIMPs的表达水平的调节来控制椎间盘基质代谢的平衡，可能会成为治疗椎间盘退变的新方向。

超敏C-反应蛋白、MMP-3与TIMP-1在急性冠脉综合征的表达

目的探讨急性冠脉综合征(ACS)患者血清超敏C-反应蛋白(hs-CRP)质金属蛋白酶3、基(MMP-3)、金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)与冠状动脉粥样硬化斑块稳定性的关系。方法对58例ACS患者,12例稳定型心绞痛患者及15例正常体检者外周血血清hs-CRP、MMP-3、TIMP-1水平进行检测并进行相关性分析。结果ACS组血清hs-CRP、MMP-3水平与正常对照组的差异具有显著性(P<0.05,P<0.01),急性心肌梗死组患者TIMP-1水平与稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组、正常对照组的比较有非常显著性差异(P<0.01)。ACS组间指标相关分析显示,血清hs-CRP水平与MMP-3水平无相关性(r=0.099,P=0.539),与TIMP-1水平有显著相关性(r=0.415,P=0.007),血清MMP-3水平与TIMP-1水平有显著相关性(r=0.333,P=0.033)。结论ACS患者血清hs-CRP、MMP-3、TIMP-1水平升高与ACS的发生关联,提示与动脉粥样硬化(AS)斑块不稳定有关。

贲门癌中组织金属蛋白酶抑制因子-3基因启动子甲基化水平及其临床意义

目的研究贲门癌中组织金属蛋白酶抑制因子-3（TIMP-3）基因启动子甲基化水平及其蛋白表达的相关性，并分析与临床病理之间关系。方法运用甲基化特异性实时荧光定量聚合酶链反应（qMSP）技术和免疫组织化学方法检测65例贲门癌患者的癌组织、癌旁正常胃组织中TIMP-3基因启动子甲基化状态及蛋白表达情况。结果TIMP-3基因启动子甲基化在贲门癌和癌旁正常胃组织阳性表达率分别为78．5％（51／65）和13．8％（9／65）（P=0．018），其甲基化率与肿瘤直径、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及病期呈正相关。TIMP-3蛋白在贲门癌和癌旁正常胃组织阳性表达率分别为26．2％（17／65）和95．4％（62／65）（P=0．016），其在贲门癌中的表达与肿瘤直径、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期呈负相关。贲门癌TIMP-3启动子甲基化及蛋白表达呈负相关（相关系数γ=0．455，P=0．000）。结论TIMP一3启动子甲基化在贲门癌中导致蛋白表达缺失，并在贲门癌侵袭、转移过程中发挥重要作用。

血清Nrf2和TIMP3水平在川崎病早期诊断及预后中的意义

目的探讨血清核因子红细胞2相关因子(Nrf2)和组织抑制剂金属蛋白酶3(TIMP3)表达在川崎病(KD)早期诊断及预后中的意义。方法选取2019年9月至2021年9月我院收治的KD患儿84例为研究对象(KD组),另选取同期我院体检中心进行体检的健康儿童84例作为对照组,其中KD组根据患儿预后情况又分为冠状动脉病变(CAL)组(18例)及无CAL组(66例),收集基本资料及实验室指标。酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清Nrf2和TIMP3水平;相关性分析采用Pearson法;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Nrf2和TIMP3水平预测KD及CAL的价值。结果KD组血清Nrf2和TIMP3水平显著低于对照组,血小板计数(PLT)、白细胞介素-6(IL-6)、血沉(ESR)及氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)水平均显著高于对照组(P<0.05);KD患儿血清Nrf2与IL-6、NT-proBNP均呈负相关(r=-0.512、-0.530,P<0.05),血清TIMP3与IL-6、NT-proBNP均呈负相关(r=-0.465、-0.482,P<0.05);ROC曲线显示,Nrf2诊断KD的AUC为0.769,截断值为789.85 U/L,其敏感度、特异度分别为79.76%、67.86%,TIMP3诊断KD的AUC为0.790,截断值为147.76 pg/ml,其敏感度、特异度分别为65.48%、79.76%,二者联合诊断KD的AUC为0.857,明显高于二者单独诊断(Z_(联合vs.Nrf2)=2.951、P=0.003,Z_(联合vs.TIMP3)=2.658、P=0.008)。CAL组血清Nrf2和TIMP3显著低于无CAL组,IL-6、ESR及NT-proBNP水平均显著高于无CAL组(P<0.05);ROC曲线显示,Nrf2预测CAL的AUC为0.812,截断值为634.12 U/L,其敏感度、特异度分别为94.44%、62.12%,TIMP3预测CAL的AUC为0.736,截断值为127.71 pg/ml,其敏感度、特异度分别为94.44%、48.48%,二者联合预测CAL的AUC为0.889,明显高于二者单独预测(Z_(联合vs.Nrf2)=2.254、P=0.024,Z_(联合vs.TIMP3)=2.724、P=0.006)。结论KD患儿血清Nrf2、TIMP3低表达,二者联合用于KD诊断及预后均有一定价值。

基质金属蛋白酶-2和组织金属蛋白酶抑制因子-3在贲门癌中的表达及其临床意义

目的 研究基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及组织金属蛋白酶抑制因子-3（TIMP-3）在贲门癌中的表达及与病理分期间的关系.方法 115例贲门癌患者手术切除标本,以其中40例患者癌旁非肿瘤胃组织（离癌灶边缘〉5 cm）为正常对照,二步法免疫组织化学检测MMP-2、TIMP-3的表达,分析二者表达与病理分期之间的关系;并通过Kaplan-Meier寿命表法分析与预后的关系;COX模型多因素分析贲门癌的独立预后因子.结果 MMP-2在贲门癌和癌旁对照组织阳性表达率分别为57.4%（66例）和40.0%（16例）（P〈0.05）,其表达与肿瘤大小、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及病期正相关,与贲门癌患者预后呈负相关（P〈0.05）.TIMP-3在贲门癌和癌旁对照组织阳性表达率分别为48.7%（56例）和95.0%（38例）（P〈0.05）,其在贲门癌中的表达与肿瘤大小、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及病期负相关,与患者预后正相关.结论 MMP-2表达增加及TIMP-3表达缺失,在贲门癌侵袭、转移中发挥重要作用.联合检测MMP-2与TIMP-3,有助于了解贲门癌的发展和评估贲门癌患者的预后.

下调人乳腺癌MCF-7细胞系miRNA-221和miRNA-222表达对抑制肿瘤细胞增殖及迁移能力的探讨

目的通过敲低微小RNA(microRNA,miRNA)-221和miRNA-222的表达上调组织金属蛋白酶抑制剂3(TIMP3)的方法来研究人乳腺癌MCF-7细胞系的增殖和迁移能力。方法根据miRBase数据库中Homo sapiens(hsa)-miRNA-221和hsa-miRNA-222的寡核苷酸序列和一段无义序列分别设计并重组成质粒:反义抑制miRNA-221(antisense-miRNA-221,AS-miRNA-221)、反义抑制miRNA-222(antisense-miRNA-222,AS-miRNA-222)、共同反义抑制miRNA-221/222(antisense-miRNA-221/222,AS-miRNA-221/222)和无义抑制(Scramble),并将其分别利用脂质体LipofectamineTM2000转染进人乳腺癌MCF-7细胞中,经G418筛选后建立稳定表达的对照细胞株[未转染正常细胞(Control组)和无义抑制细胞(Scramble组)]和低表达miRNA-221、miRNA-222细胞株(即ASmiRNA-221组、AS-miRNA-222组和AS-miRNA-221/222组)。转染24 h后于荧光显微镜下观察转染效率;采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测各组细胞中miRNA-221和miRNA-222的表达量,采用逆转录PCR检测各组细胞中质粒载体上携带的抗性neo基因的表达情况,以此来验证转染是否成功;分别采用实时荧光定量PCR、免疫印迹法检测TIMP3和金属蛋白酶17(ADAM17)的表达差异;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测并绘制生长曲线,观察低表达miRNA-221、miRNA-222各组细胞的生长能力;采用划痕修复实验观察转染后细胞的迁移能力。结果转染24 h之后,在荧光显微镜下观察到各转染组细胞的绿色荧光蛋白表达较多,即转染效率较高。检测转染后各组细胞中neo基因、miRNA-221和miRNA-222的表达。与Control组比较,Scramble组、ASmiRNA-221组、AS-miRNA-222组、AS-miRNA-221/222组neo基因表达明显升高;与Scramble组比较,AS-miRNA-221组、AS-miRNA-222组、AS-miRNA-221/222组miRNA-221和miRNA-222的表达量明显降低,即证实转染了反义抑制miRNA-221/222的低表达稳定细胞株构建成功。与Scramble组比较,AS-miRNA-221组、AS-miRNA-222组、AS-miRNA-221/222组细胞TIMP3 mRNA表达升高,而其调控的ADAM17水平降低。生长曲线显示低表达miRNA-221、miRNA-222各组细胞的生长能力明显受到抑制。划痕修复实验结果显示低表达miRNA-221、miRNA-222各组细胞的迁移能力降低。结论通过敲低miRNA-221、miRNA-222、上调TIMP3表达可以抑制人乳腺癌细胞系MCF-7的增殖和迁移能力。