日本血吸虫31kDa组织蛋白酶B DNA疫苗保护性免疫效果观察

目的 观察日本血吸虫 31k Da组织蛋白酶 B DNA疫苗 (Sj31B1 N)在小鼠体内的保护性免疫效果。方法 用 Sj31B1 N和 Sj31B1 N +p UC DNA疫苗肌注免疫 BAL B/ C小鼠 ,用空白质粒载体VR10 12做对照 ,在 0、4、8周共免疫 3次 ,每次免疫前及末次免疫后 4周从尾静脉采血收集血清 ,经EL ISA法检测小鼠血清抗体升高时 ,用日本血吸虫尾蚴攻击感染小鼠。结果 Sj31B1 N和 Sj31B1 N+p U C减虫率分别为 2 4.2 %和 2 2 .0 % ;肝卵减少率分别为 34 .9%和 39.5 % ,每雌肝卵减少率分别为 30 .4%和 35 .3%。结论 小鼠接种 Sj31B1 N后对日本血吸虫感染有减虫、减卵作用及抗雌虫生殖的作用。加质粒佐剂 p

日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗的免疫保护效果研究

目的 :观察已构建日本血吸虫大陆株 31kDa组织蛋白酶BDNA疫苗VR1 0 1 2 Sj31及VR1 0 1 2 SjGST Sj31在BALB c小鼠体内的免疫保护效果。方法 :用纯化的空白质粒载体VR1 0 1 2、重组质粒VR1 0 1 2 Sj31及VR1 0 1 2 SjGST Sj31于股四头肌注射免疫BALB c鼠 :将 36只 6～ 8周龄BALB c鼠随机分为 3组 ,每组 1 2只 ,对照组 (A组 )注射空白质粒载体VR1 0 1 2 ,B组注射重组质粒VR1 0 1 2 Sj31 ,C组注射重组质粒VR1 0 1 2 SjGST Sj31。质粒剂量均为 1 0 0 μg ,每隔 2周免疫 1次 ,共免疫 3次 ,第 3次免疫后第 2 1天 ,每只鼠经腹部感染 1 0条尾蚴 ,4 2天后剖杀计数各小鼠成虫数和每克肝卵数 ,观察诱导产生的减虫和减卵效果 ,并用ELISA分析小鼠血清中的抗体。结果 :ELISA分析表明 ,第 3次免疫后小鼠出现特异性IgG抗体。与空白质粒对照组比较 ,2个实验组的减虫率分别为 2 5 0 %及 30 0 % (P <0 0 5 ) ,肝组织减卵率分别为 5 4 90 %及 6 9 74 % (P <0 0 0 1 ) ,每雌肝减卵率分别为 4 7 96 %、5 4 6 2 % (P <0 0 0 1 )。与B组相比 ,C组的肝组织减卵率为 32 92 % (P <0 0 0 1 ) ,每雌肝减卵率为 1 2 79% (P <0 0 5 )。结论 :DNA疫苗VR1 0 1 2 Sj31和VR1 0 1 2 SjGST Sj31能诱导小鼠产生一定水平的抗?

日本血吸虫组织蛋白酶B核酸疫苗血清抗体与抗生殖免疫关系的初步研究

目的 探讨日本血吸虫组织蛋白酶BDNA疫苗 (Sj31B1N)抗生殖免疫的可能机理。 方法 用Sj31B1N免疫小鼠 ,每 2周 1次 ,每次免疫前均尾静脉采血 1次 ,作血清抗体动态变化分析 ,免疫 4次后尾蚴攻击感染。感染后 4 5天 ,计数成虫负荷和肝、肠组织内虫卵数。结果 用Sj31B1N免疫小鼠后第 2周部分小鼠血清中出现了抗体 ,随时间延长 ,出现抗体阳性组小鼠数量增多 ,抗体滴度增加。抗体阳性组小鼠与阴性组小鼠对比 ,成虫减少率为 4 0 .6% ,肝组织减卵率为 4 8.0 % ,肠组织减卵率为 4 5.4 %。结论 核酸疫苗Sj31B1N可有效地诱导小鼠产生抗体 ,并且具有免疫保护作用。核酸疫苗Sj31B1N所诱导的体液免疫可能是抗日本血吸虫生殖免疫的机理之一。

大肠癌组织蛋白酶B表达及其与肿瘤微血管密度和生物学行为的关系

目的:探讨不同类型大肠癌组织蛋白酶()表达及其与肿瘤微血管密度(BCathepsinB,CBmicrovesseldensity,)和生物学行为的关系。MVD方法:采用免疫组化方法对例不同类型大肠癌及进行半定量和定量研究。47CBMVD结果:CB在大肠癌粘液性癌表达高于非粘液性癌,差别具显著性(P<),强阳性组值高于阴性组,二者具有显著差异0.05CBMVD(P<)。大肠癌表达与淋巴结转移关系密切(0.05CBP<)。0.05结论:结果提示,大肠癌表达与值和肿瘤浸润转CBMVD移有关,在粘液性大肠癌浸润转移中作用可能更为重要。

组织蛋白酶B酶联免疫吸附测定方法的建立

背景:组织蛋白酶B(CB)与恶性肿瘤的分期、转移和预后关系密切。目的:建立CB酶联免疫吸附测定(ELISA)方法,以便评价肿瘤患者血清CB含量与预后的关系。方法:将含有CB cDNA的重组痘苗病毒转染Hela细胞,表达目的蛋白重组CB;经Western blot分析和制备型电泳纯化后,免疫新西兰大白兔,获得CB多克隆抗体。纯化后的抗体一部分作为固化抗体,另一部分用辣根过氧化物酶标记:棋盘滴定法确定工作浓度。结果:痘苗病毒真核表达系统可以高效表达目的蛋白。制备型电泳能简单、有效地纯化蛋白。重组CB免疫动物后,可获得高效价的CB多克隆抗体,用以制备相应的固化抗体和酶标抗体检测CB。结论:用重组CB免疫动物后可获得相应抗体,以建立CB检测的ELISA方法。

免疫组化方法检测胃癌组织中组织蛋白酶B的表达

目的 研究胃癌组织中组织蛋白酶B的表达及探讨组织蛋白酶B表达与胃癌预后指标 (肿瘤组织学类型 ,TNM分期 )的关系。方法 应用免疫组织化学方法研究 54例胃腺癌标本中组织蛋白酶B的表达。结果 周围正常胃粘膜上皮组织蛋白酶B阳性率为 5 .6 % (3/ 54) ,胃癌组织中的阳性率为 61 .1 % (33/ 54) ,较周围正常胃粘膜上皮明显升高 (P <0 .0 1 )。组织蛋白酶B的表达与胃癌预后指标 (肿瘤组织学类型 ,TNM分期 )无明显相关性。结论 人胃癌组织中组织蛋白酶B的表达明显升高。

海参体壁组织蛋白酶B酶学性质的研究

提取并研究了海刺参体壁组织蛋白酶B的酶学性质,结果表明,该酶最适反应pH为5.5,最适反应温度为40℃,在20℃～30℃酶活稳定,金属离子Ca2+、Mg2+、K+、Mn2+、Fe2+、Cu2+和Zn2+均能抑制酶活,其中Ca2+、Mg2+作用微弱,而Zn2+可完全抑制酶活;碘乙酸、EDTA对酶具有一定的抑制作用,亮抑酶肽、抗痛素和E-64对酶可完全抑制。DTT和L-半胱氨酸对酶有一定的激活作用。

明胶酶B及其组织金属蛋白酶抑制剂与食管癌生物学行为的关系

目的 研究明胶酶B(gelatinB)及其相应的组织金属蛋白酶抑制剂 -1(TIMP -1)在食管癌组织中的表达及其在细胞浸润转移过程中的作用。方法 采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白 -过氧化物酶 (S -P)法检测 5 0例食管癌组织中明胶酶B及TIMP -1的表达。结果 明胶酶B在食管癌组织中的阳性表达率为 76.0 % ,其表达与淋巴结转移呈正相关 (Pearson列联系数为 0 .3 43 ,P <0 .0 5 ) ,TIMP -1在食管癌组织中的阳性表达率为 3 0 .0 % ,其表达与淋巴结转移呈负相关 (Pearson列联系数为0 .3 3 3 ,P <0 .0 5 )。结论 明胶酶B促进食管癌转移 ,TIMP -1对食管癌有独立的抑制作用。通过检测食管癌组织中的明胶酶B及TIMP -1的表达 。

烟夜蛾组织蛋白酶B酶原基因的克隆、序列分析和原核表达

利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术从烟夜蛾Helicoverpa assulta(Guene)雌虫卵巢中扩增得到了组织蛋白酶B酶原基因(cathepsin B,CB)cDNA片段,将其克隆至pMD19-T载体。测序结果表明,该片段长度为1017bp,含有组织蛋白酶B酶原基因完整开放阅读框架(ORF)(Gen Bank登录号:EF154237)。序列分析结果显示:烟夜蛾组织蛋白酶B(HassCB)编码338个氨基酸残基,预测N-末端含有长度为21个氨基酸残基的信号肽序列;去除信号肽序列后,预测成熟蛋白分子量为35.5kDa,等电点为5.96。氨基酸序列比对结果表明,HassCB与其他昆虫的组织蛋白酶B酶原氨基酸序列有较高的一致性。将去除信号肽序列的HassCB(HassCBa)重组到表达载体pGEX-4T-1中,并转入原核细胞中表达,SDS-PAGE和Western印迹分析表明:该基因能在大肠杆菌BL21中表达,电泳检测到一条大约61kDa的目的条带,与预测的融合蛋白分子量相符。用该基因制备多克隆抗体并测得该抗体对重组表达的HassCBa的效价为1∶51200。通过免疫印迹检测证实,此抗体既能识别重组表达的HassCBa,又能识别烟夜蛾卵巢匀浆液中的HassCB。

核因子κB、基质金属蛋白酶3在退变腰椎间盘组织中的表达

背景:对于椎间盘退变的原因一直是国内外学者研究的重点。近年来随着研究的深入,在椎间盘退变过程中多种细胞因子、黏附分子、趋化因子、炎症递质、蛋白质酶等发挥着重要作用。目的:比较正常腰椎间盘组织及退变腰椎间盘组织中核因子κB、基质金属蛋白酶3的表达,分析两者的相关性。方法:收集唐山市第二医院脊柱外科手术切除退变椎间盘组织68例(病变组),腰椎爆裂骨折正常椎间盘组织10例(对照组),应用苏木精-伊红染色、免疫组织化学方法和ELISA方法检测核因子κB、基质金属蛋白酶3的表达,并对两者相关性进行分析。结果与结论:苏木精-伊红染色结果显示对照组可见纤维环和髓核结构,腰椎间盘髓核的软骨细胞表现为不规则的软骨陷窝,病变组细胞增殖明显,细胞核呈圆形或卵圆形,髓核细胞胞质呈空泡状。免疫组织化学方法显示病变组核因子κB、基质金属蛋白酶3吸光度值明显高于对照组(P<0.05)。ELISA检测病变组核因子κB、基质金属蛋白酶3的表达均高于对照组(P<0.05)。两者具有正相关性(r=0.6430,P<0.01)。

组织蛋白酶B在卵巢癌中的表达及意义

目的:探讨卵巢癌组织中组织蛋白酶B(cathepsinB,CB)的表达及其与微血管密度(MVD)、癌细胞增殖标记指数(Ki67标记)的关系。方法:采用免疫组化链霉菌抗生素蛋白过氧化物酶连接法(SP法)检测10例正常卵巢,13例卵巢良性肿瘤和73例卵巢癌组织中CB,CD34和Ki67的表达,并结合临床、病理及随访资料进行分析。结果:CB在正常和良性卵巢组织中不表达,在卵巢癌组织中CB阳性表达率为52.1%(38/73)。CB表达阳性和阴性的卵巢癌组织中,MVD的平均值分别为37.62±11.42,23.51±8.14(P<0.05);Ki67标记指数分别为59.34±17.53,44.60±12.71(P<0.05)。卵巢癌组织中CB的阳性表达与年龄、病理类型和组织学分化等级无关(P>0.05),与FIGO分期、腹水和转移有关(P<0.05)。CB表达阳性的生存期低于阴性者。结论:CB阳性表达与生存率有关,可能是卵巢癌的不良预后因素。

组织蛋白酶B在胃癌浸润转移中的作用研究

本文使用特异的兔抗人肝组织蛋白酶B抗体及全长人CBcDNA,采用原位杂交及免疫组化技术研究CB在人胃癌组织中的表达,结果显示在两种不同的水平(mRNA及蛋白质水平)上,胃癌组织中CB的表达明显增高,且与浸润深度、生长类型及淋巴结转移有关,而与组织学类型无关,统计学上有显著性差异(P<0.05).提示CB在胃癌的生长浸润过程中起着一定作用。

组织蛋白酶B-RNAi-LV载体构建及其对小鼠脑微血管内皮细胞系bEND.3的影响

目的构建组织蛋白酶B(Cathepsin B,CTSB)小RNA(siRNA)慢病毒载体,并探讨其对小鼠脑微血管内皮细胞(bEND.3)的影响。方法设计并合成含有干扰Cathesin B基因的19 nt的双链寡DNA片段,将此片段克隆到携有绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒表达载体质粒pGCSIL-GFP上,经测序正确后,命名为pGCSIL-GFP-CTSB,将慢病毒表达载体pGCSIL-GFP-CTSB、慢病毒包装载体pHelper1.0和pHelper2.0 3质粒共同转染于293T细胞,获得携带Cathepsin B基因的RNAi慢病毒(Cathesin B-RNAi-Lentivirus,即CTSB-RNAi-LV),通过Real time-PCR和Western blotting方法观察CTSB-RNAi-LV对bEND.3的影响。结果 1.pGCSIL-GFP-CTSB中携带有正确的Cathesin B siRNA基因;2.目的基因Cathepsin B siRNA被RNAi慢病毒高效地转导入靶细胞bEND.3内,并达到稳定的表达;3.CTSB-RNAi-LV能有效降低bEND.3中Cathepsin B mRNA和蛋白表达。结论成功构建了RNAi慢病毒载体pGCSIL-GFP-CTSB;并成功包装了RNAi慢病毒CTSB-RNAi-LV;CTSB-RNAi-LV能有效地抑制bEND.3中Cathepsin B mRNA和蛋白表达水平下调。

组织蛋白酶B在胃癌组织中表达及其意义

目的：探讨组织蛋白酶Ｂ（ＣＢ）在胃癌中的表达以及与胃癌浸润的关系、方法：用免疫组织化学ＳＰ法对３８例胃癌组织中组织蛋白酶Ｂ的表达进行检测。结果：ＣＢ有较强阳性表达的胃癌在分化型和差分化型之间没有显著差异；进展期癌的表达显著高于早期癌；６８．４％的胃癌标本中肿瘤间质的成纤维细胞和血管内皮细胞呈ＣＢ阳性反应。结论：ＣＢ的表达增高与胃癌的浸润有密切关系，血管内皮细胞表达ＣＢ增多可能是促进肿瘤浸润生长的机制之一。

重组组织蛋白酶B的表达和纯化

背景:研究表明组织蛋白酶B（CB）与肿瘤转移相关。目的:用基因工程技术生产大量重组CB,为研究CB的生物学特性和制备CB抗体供临床检测作准备。方法:用重组痘苗病毒转染真核细胞,采用真核表达目的蛋白CB,用聚丙烯酚胺凝胶电泳和免疫印迹法鉴定目的蛋白。根据CB的分子量和等电点,用制备型电泳纯化蛋白。结果:痘苗病毒真核表达系统可以高效表达目的蛋白,产量为0.12mg/10_8 细胞。重组CB的分子量（31kDa和25kDa）、等电点（4552～5.588）和免疫原性与天然CB一致。制备型电泳能简单、有效地纯化蛋白。结论:运用痘苗病毒真核表达系统可以高效表达CB。

重组白细胞介素-4增强日本血吸虫组织蛋白酶B核酸疫苗诱导小鼠的保护力

目的探讨重组白细胞介素-4(IL-4)真核表达质粒增强日本血吸虫组织蛋白酶BDNA疫苗对小鼠的免疫保护效果。方法将小鼠IL-4基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1以构建小鼠重组IL-4表达质粒,并联合日本血吸虫组织蛋白酶B的表达质粒DNA(VR1012-Sj31)肌注免疫小鼠,设重组IL-4表达质粒、组织蛋白酶B表达质粒和2种空载体质粒对照组。免疫组化检测IL-4和组织蛋白酶B在小鼠肌细胞内的表达,末次免疫3周后攻击感染,用减虫率及减卵率表示保护力。结果重组IL-4和组织蛋白酶BDNA均在小鼠肌细胞表达,重组IL-4和组织蛋白酶BDNA联合免疫小鼠,产生43.2%的减虫率和76.6%的减卵率,与组织蛋白酶BDNA单独免疫相比差异有显著性(P<0.01,P<0.05)。结论重组IL-4能提高日本血吸虫组织蛋白酶B核酸疫苗的抗血吸虫保护力作用,具有佐剂的免疫效应。

血清学诊断肝纤维化新指标——金属蛋白酶组织抑制因子检测方法学建立及应用评价

目的 自行建立一种改良固相致敏红细胞吸附技术 (SPASE)用于快速检测肝硬化病人血清中金属蛋白酶组织抑制因子 1,2 (TIMP 1和TIMP 2 ) ,同时研究TIMP 1和TIMP 2在肝硬化病人肝组织中的定位及表达状态 ,以及肝组织TIMPs与血清TIMPs的相关性。探讨血清中TIMP 1和TIMP 2可否作为肝纤维化的血清学诊断新指标。方法 应用自行建立的SPASE检测 10 82例肝病病人 (其中肝硬化 3 10例 )血清标本中的TIMP 1和TIMP 2。用原位杂交及免疫组织化学技术分别检测 40例肝硬化病人活检肝组织中TIMP 1和TIMP 2mRNA及相关抗原的表达 ,并与病人自身血清检测结果对比。另检测 2 0例正常肝组织作为对照。结果 SPASE法特异性中和抑制试验示中和抑制率均在 70 %以上 ,检测 3 10例肝硬化病人血清中TIMP 1和TIMP 2的阳性率分别为 79.68%和 65 .16%。 40例肝硬化病人肝组织中TIMP 1和TIMP 2mRNA及相关抗原表达阳性率为 10 0 % ,TIMP 1表达强度高于TIMP 2 (P <0 .0 1) ;阳性信号主要位于肝细胞胞质内 ,未见细胞核表达。 40例肝硬化肝活检病人血清检测结果 ,TIMP 1阳性率为 10 0 % ,TIMP 2阳性率为 77.5 % ( 3 1/4 0 )。正常肝组织无一例有TIMPs相关抗原表达。结论 TIMPs定位于肝硬化病人的肝细胞胞质内 。

组织蛋白酶B、基质金属蛋白酶-2在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨组织蛋白酶B(CB)和基质金属蛋白酶(MMP)-2在非小细胞肺癌发生、发展及转移中的作用。方法应用免疫组织化学法检测75例非小细胞肺癌组织及28例良性肺病变中CB和MMP-2的表达情况,并将检测结果与临床病理特征进行综合分析。结果 CB和MMP-2的表达主要定位于细胞质,CB和MMP-2在非小细胞肺癌中表达的阳性率明显高于良性肺病变(P<0.05)。非小细胞肺癌中MMP-2蛋白的表达与有无淋巴结转移情况密切相关。肺癌组织中CB、MMP-2的表达水平呈显著正相关。结论 CB和MMP-2在非小细胞肺癌中表达上调,联合检测CB和MMP-2对肿瘤的诊断和预后判断有一定的临床意义。

58例喉癌组织蛋白酶B表达及临床特征分析

目的探讨组织蛋白酶B(cathepsin B,CB)表达与喉癌发生、发展及浸润转移的关系。方法喉癌组58例肿瘤组织,其中临床分期Ⅰ期7例,Ⅱ期14例,Ⅲ期26例,Ⅳ期11例;病理分级高分化15例,中分化22例,低分化21例。另选择19例癌旁组织作对照。采用免疫组织化学SABC染色法和原位杂交法检测CB蛋白表达和mRNA水平情况。结果喉癌组CB蛋白定位于癌细胞胞浆,阳性率(44/58,75.9%)显著高于癌旁组(1/19,5.3%),淋巴转移组显著高于无转移组,不同临床分期阳性率显著不同。CB mRNA阳性率(35/58,60.3%)显著高于癌旁组(0/19),临床特征分析与CB蛋白相同。结论CB在喉癌组织中蛋白和mRNA水平均为高表达,CB表达与喉癌的发生、发展及浸润转移有关。

55例胃癌组织中组织蛋白酶B的观察研究

组织蛋白酶B(CB）为一溶酶体酶，能降解许多细胞外基质成分。其与许多人类及啮齿类肿瘤的生长浸润有关。本文采用免疫组化技术使用特异的免抗人肝CB抗体来研究人胃癌组织中的CB表达情况。结果显示：与正常胃组织相比，胃癌组织中CB的表达明显增高，且肿瘤细胞中CB表达增加与浸润深度、生长类型及淋巴结有无转移有关，而与组织学类型无关，统计学上有显著性差异（P＜0.05）。提示CB在胃癌组织中的表达与肿瘤的生长浸润有关，CB在肿瘤的浸润过程中起一定的作用。