几种食品辅料抑制鲢鱼组织蛋白酶B、L、H参与鱼糜凝胶软化的研究

研究了不同浓度的4种食品辅料(马铃薯淀粉、蛋清粉、牛血浆蛋白、乳清蛋白浓缩物)对鲢鱼组织蛋白酶B、L、H的活性、鱼糜蛋白自溶及鱼糜制品凝胶强度的影响。实验结果表明,4种食品辅料对组织蛋白酶B、L、H的活性均有抑制作用,且酶活性与食品辅料之间的关系呈剂量依赖性;4种食品辅料都有能力缓解鲢鱼鱼糜蛋白的自溶,对鱼糜凝胶的网状结构具有保护作用,能够减缓凝胶软化的产生。其中,添加量为3%的乳清蛋白浓缩物起到的效果更为显著。

腌干鲢鱼组织蛋白酶B、L活力变化的响应面法预测研究

以鲢鱼为原料,进行腌制和热泵干燥加工,研究内源组织蛋白酶B、L活性在加工过程中的变化。选取加工过程对鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)组织蛋白酶B、L活力影响较大的3个工艺参数(温度、pH值、盐质量分数)作为试验因素,并根据酶学特性和干燥过程中各理化指标的测定结果确定其试验水平。采用响应面法考察此3因素对组织蛋白酶B、L活性的影响,并根据回归方程对腊干鲢鱼加工过程中的组织蛋白酶活力进行预测。结果表明:回归方程可用于组织蛋白酶B、L实际活力预测;两种酶的潜在活力在加工过程中均呈下降趋势,加工结束时组织蛋白酶B和L的潜在酶活力分别为初始的43.18%和26.08%;通过回归方程对组织蛋白酶B、L在腌制前、腌制后、干燥2d、干燥5d、干燥7d实际活力进行预测,组织蛋白酶B实际酶活力分别为潜在酶活力的36.7%、39.9%、46.5%、46.5%和53.5%,而组织蛋白酶L则为6.6%、5.6%、10.4%、10%和12.6%。

饲料中添加适宜水平铁对建鲤肉质、鱼糜稳定性及组织蛋白酶B/L的影响

探讨饲料中添加适量铁对建鲤肉质、鱼糜品质及其肌肉中组织蛋白酶B/L的影响。以添加适宜水平铁的饲料饲喂90 d的建鲤(适宜组,铁实测质量分数146.1 mg/kg)为研究对象,同时以未添加铁组(缺乏组,铁实测质量分数53.9 mg/kg)作为对照。采样后测定鱼肉品质指标及肌肉中组织蛋白酶B/L活性,并采用免疫组化法进行蛋白表达定量;而后将2组鱼肉加工为鱼糜,并测定其稳定性指标。结果表明,与缺乏组相比,适宜组肌原纤维耐折力、断裂指数分别稍有上升及下降,但差异不显著(P>0.05);剪切力极显著增加31.80%(P<0.01),可溶胶原蛋白含量、不溶胶原蛋白含量和总胶原蛋白含量均分别极显著增加305.45%、180.98%、219.35%(P<0.01)。适宜组鱼肉p H及失水率略呈下降趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。适宜组组织蛋白酶B/L活性分别极显著(P<0.01)及显著(0.01<P<0.05)低于缺乏组,免疫组化显示两种酶在建鲤肌肉中均有表达,且适宜组表达量均极显著低于缺乏组(P<0.01)。适宜水平铁能极显著提高鱼糜肌动球蛋白初始Ca^2+-ATPase活性、总疏基含量(P<0.01),降低二硫键含量(0.01<P<0.05)、表面疏水性(P<0.01)及TBA值(P<0.01)。饲料中添加适宜水平铁下调了建鲤肌肉CAT B/L的活性及表达量,改善了建鲤鱼肉的硬度品质,并且提高了加工鱼糜的稳定性。

饲料中适宜含量铁对建鲤鱼糜冻藏品质变化及组织蛋白酶B/L的影响

对经过不同铁含量的饲料(缺乏组53.9 mg/kg,适宜组146.1 mg/kg)饲喂90 d后的建鲤,取鱼肉加工为鱼糜,于-20℃条件下进行冻藏实验,取样点为0、1、2、4、6周,测定鱼糜冻藏品质指标的变化,包括Ca^(2+)-ATPase活性、总巯基、二硫键、表面疏水性、TBA值;鱼糜冻藏期间组织蛋白酶B、组织蛋白酶L活性采用荧光合成肽底物法进行测定。结果表明,适宜含量铁能极显著提高鱼糜肌动球蛋白初始Ca^(2+)-ATPase活性、总巯基含量(p<0.01),降低二硫键含量(0.01<p<0.05)、表面疏水性(p<0.01)及TBA值(p<0.01),且可延缓冻藏期间Ca^(2+)-ATPase活性、总巯基含量的下降,以及表面疏水性、二硫键含量的增大;冻藏6周后,缺乏组和适宜组TBA值分别上升264%、143%;适宜组组织蛋白酶B/L活性均低于缺乏组,且对组织蛋白酶L活性下降有一定促进作用,而对组织蛋白酶B作用不明显。综上所述,饲料中添加适宜含量铁能够减缓冻藏期间建鲤鱼糜蛋白质的变性,降低组织蛋白酶B/L活性残留,对提高鱼糜冻藏品质稳定性具有潜在的促进作用。

急性髓系白血病初诊患者组织蛋白酶B、L及血管内皮生长因子mRNA表达及意义

目的:探讨组织蛋白酶B、L(CTSB、CTSL)及血管内皮生长因子(VEGF)在初诊的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中mRNA的表达及其相关性。方法:采用实时荧光定量RT-PCR的方法检测CTSB、CTSL及VEGF mRNA的相对表达水平,分析三者在AML初诊患者中及良性血液病患者中的表达变化及相关性。结果:AML骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cell,BMMNC)中CTSB、CTSL mRNA的表达水平均明显高于良性血液病患者(P<0.05)。在AML中存在VEGF mRNA的过度表达,其表达水平明显高于良性血液病组(P<0.05)。在AML中,CTSB、CTSL与VEGF三者间的mRNA的表达相互间存在显著正相关性。在初诊的AML组中CTSB、CTSL及VEGF高表达与AML缓解率及髓外浸润相关。结论:在AML患者中存在CTSB、CTSL及VEGF的过度表达,且三者存在着显著的相关性;AML患者CTSB、CTSL及VEGF的联合检测及动态观察可作为AML临床辅助诊断及预后判断的指标之一。

组织蛋白酶B和L在早期妊娠绒毛及蜕膜中的表达

目的观察组织蛋白酶B(cathepsinB,CB)和L(cathepsinL,CL)在人早期妊娠绒毛及蜕膜中的表达,探讨它们在胚胎着床及发育过程中的作用。方法研究组包括:正常早期妊娠行人工流产者30例、早期自然流产者25例、正常分泌期子宫内膜10例和葡萄胎15例。应用免疫组织化学法检测CB和CL的表达。结果CB、CL主要阳性表达于正常早期妊娠滋养层细胞和蜕膜细胞。CB在正常分泌期内膜、正常早期妊娠蜕膜、自然流产蜕膜中的阳性率表达分别为10%(1/10)、83.3%(25/30)、32.0%(8/25);CL则分别为0、63.3%(19/30)、32.0%(8/25);CB和CL在3组间的表达有显著性差异(P<0.05)。CB在早期妊娠绒毛、自然流产绒毛、葡萄胎组织中表达强阳性率分别为10.0%(3/30)、0、66.7%(10/15);CL则分别为26.7%(8/30)、4.0%(1/25)、80.0%(12/15)。CB和CL在3组间的表达有显著性差异(P<0.05)。结论CB和CL在正常和异常妊娠蜕膜和绒毛中的表达差异提示它们胚胎着床过程中可能起着很重要的作用。

组织蛋白酶B、L在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨组织蛋白酶B、L在非小细胞肺癌中的表达及意义。方法收集44例非小细胞肺癌标本,石蜡包埋切片,通过免疫组化的方法检测组织蛋白酶B、L的表达。结果组织蛋白酶B、L随着肿瘤分期的进展其表达阳性率明显升高,Ⅲ期～Ⅳ期的病人组织蛋白酶B、L的表达与Ⅰ期～Ⅱ期的病人有显著差异(P<0.05)。组织蛋白酶B和L的表达高度相似。结论组织蛋白酶B、L的表达与非小细胞肺癌的进展和预后有关。

组织蛋白酶L及其酶学特性研究

组织蛋白酶L很难通过常规的肌动球蛋白提取方法完全去除.由琼脂糖凝胶6B凝胶层析图谱显示,组织蛋白酶L的活性主峰明显偏离肌动球蛋白主峰,表明该酶是肌动球蛋白非结合型酶.凝胶柱层析后测定L型组织蛋白酶粗酶液(Lmix)的活性,结果表明Lmix的热稳定性与pH和温度密切相关,其最适pH为5.0,最适温度为45℃.在最适pH5.0时,Lmix的活性随NaCl浓度的增加而增大.专一性底物及酶激活剂、抑制剂影响研究表明,Lmix为内含巯基的半胱氨酸型组织蛋白酶.

组织蛋白酶L、B在子痫前期胎盘滋养细胞异常表达的研究

目的:探讨组织蛋白酶L(Cathepsin L,CTSL)与组织蛋白酶B(Cathepsin B,CTSB)在子痫前期胎盘滋养细胞异常表达的情况。方法:选取40例子痫前期、40例早发型子痫前期孕妇为研究对象,另选取40例正常健康孕妇为对照组,采用免疫组化法测定各组孕妇血清CTSL、CTSB表达情况及采用RT﹣PCR法测定各组CTSL、CTSB的表达量。结果:与对照组相比,子痫前期、早发型子痫患者CTSL、CTSB阴性表达率较高,其中早发型子痫患者CTSL、CTSB阴性表达率高于子痫前期,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。对照组CTSLmRNA、CTSBmRNA表达量显著高于子痫前期及早发型子痫前期患者,而早发型子痫患者则低于子痫前期,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:人类滋养层细胞CTSL、CTSB异常表达与子痫的发生关系密切,通过测定子痫患者CTSL、CTSB水平可有效预测患者病情进展。

组织蛋白酶-B、组织蛋白酶-L及尿激酶类纤溶酶原激活剂在非霍奇金淋巴瘤中的表达及其意义

目的 探讨组织蛋白酶-B（CTS-B）、组织蛋白酶-L（CTS-L）及尿激酶类纤溶酶原激活剂（uPA）在非霍奇金淋巴瘤（NHL）中的表达,分析三者间及与临床病理因素间的相关性.方法 选取未经化疗或放疗的NHL患者39例,以淋巴结反应性增生15例作为对照.采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应（PCR）法检测淋巴结肿瘤组织CTS-B、CTS-L及uPA mRNA的相对表达水平.分析三者的表达变化及与临床病理因素间的相关性.结果 CTS-B、CTS-L、uPA mRNA在NHL患者中表达水平明显高于对照组（0.403比0.128、0.209比0.057、0.459比0.031,均P＜0.05）,且三者间存在相关性.CTS-B、CTS-L、uPA mRNA在晚期NHL组中表达水平高于早期组（0.453比0.341、0.204比0.085、0.372比0.196,均P＜0.05）,CTS-B、CTS-L、uPA mRNA在NHL化疗敏感组中的相对表达水平低于化疗耐受组（0.401比0.556、0.085比0.205、0.316比0.499,均P＜0.05）.结论 CTS-B、CTS-L、uPA在NHL中高表达,与NHL的生物学行为密切相关;NHL患者CTS-B、CTS-L及uPA的联合检测及动态观察可作为NHL临床辅助诊断及预后判断的指标之一.

组织蛋白酶B和蛋白酶L与复发性流产的相关性

目的 复发性流产(RSA)不仅危害女性生殖健康,而且给患者家庭带来沉重负担,但其发病机制复杂,具体病因尚不明确。通过检测RSA患者和正常妊娠女性蜕膜和绒毛组织中组织蛋白酶B和蛋白酶L的表达量,揭示其与RSA的相关性,进而阐述蛋白酶B和蛋白酶L在RSA发病中的作用,为进一步研究RSA病因提供支持。方法 选取2018年5月—2019年11月在天津市第一中心医院就诊的RSA患者30例为观察组,另选取同期在该院就诊的正常早孕要求终止妊娠的患者30例为对照组。所有研究对象检查合格后,在无菌条件下,分别于人工流产手术和清宫术中获得研究对象的绒毛和蜕膜组织,制成石蜡切片。采用免疫组织化学法分别检测两组患者绒毛和蜕膜组织中组织蛋白酶B和蛋白酶L的表达。结果 在绒毛组织中,蛋白酶B主要表达于滋养细胞的细胞质中,合体滋养细胞细胞质表达强于细胞滋养细胞,间质毛细血管内皮细胞可见少量表达。观察组患者绒毛组织蛋白酶B表达水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。在绒毛组织中,蛋白酶L主要表达于绒毛组织滋养细胞的细胞质中,与细胞滋养细胞相比,合体滋养细胞细胞质表达更强。观察组患者绒毛组织蛋白酶L表达水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。在蜕膜组织中,蛋白酶B主要表达于蜕膜细胞的细胞质中,腺细胞和毛细血管上皮细胞可见少量表达。观察组患者蜕膜组织蛋白酶B表达水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。在蜕膜组织中,蛋白酶L主要表达于蜕膜细胞的细胞质中,少量表达于腺细胞和毛细血管上皮细胞中。观察组患者蜕膜组织蛋白酶L表达水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 组织蛋白酶B和蛋白酶L均在早孕蜕膜和绒毛组织中表达,组织蛋白酶B和蛋白酶L与胚胎植入和胎盘形成有关,绒毛、蜕膜组织蛋白酶B和蛋白酶L表达减低与RSA发生有关,可能是导致复发性流产的重要因素。

戒烟对吸烟大鼠气道上皮细胞核因子κB、基质金属蛋白酶9及金属蛋白酶组织抑制物1表达的影响

目的 通过研究吸烟及戒烟大鼠气道上皮细胞核因子κB（NF-κB）、细胞基质金属蛋白酶9（MMP-9）及细胞金属蛋白酶组织抑制物1（TIMP-1）mRNA及蛋白质的表达水平,探讨吸烟及戒烟对慢性阻塞性肺疾病气道炎症和气道重塑的影响.方法 雄性Wistar大鼠24只,随机分为对照组、吸烟组和戒烟组,每组8只.分别采用原位杂交和免疫组织化学的方法检测各组大鼠气道上皮细胞中NF-κB、MMP-9及TIMP-1 mRNA及蛋白的表达水平.结果 ①与对照组（0.29±0.06,0.29±0.06）相比,吸烟组（0.45±0.04,0.41±0.03）、戒烟组（0.40±0.05,0.37±0.03）NF-κB mRNA和蛋白表达水平均增高（P值均＜0.05）;与吸烟组相比,戒烟组NF-κB mRNA和蛋白表达水平降低（P值均＜0.05）.②与对照组（0.30±0.06,0.30±0.06）相比,吸烟组（0.52±0.03,0.51±0.07）、戒烟组（0.38±0.03,0.33±0.02）MMP-9 mRNA和蛋白表达水平均增高（P值均＜0.05）;与吸烟组相比,戒烟组MMP-9mRNA和蛋白表达水平均降低（P值均＜0.05）.③与对照组（0.26±0.04,0.26±0.04）相比,吸烟组（0.49±0.05,0.37±0.03）、戒烟组（0.42±0.04,0.35±0.03）TIMP-1 mRNA和蛋白表达水平均增高（P值均＜0.05）;与吸烟组相比,戒烟组TIMP-1 mRNA和蛋白表达水平降低（P值均＜0.05）.④与对照组（1.00±0.02,1.00±0.02）相比,吸烟组（1.07±0.14,l.37±0.19）MMP-9/TIMP-1 mRNA和蛋白表达值大于1（P值均＜0.05）,而戒烟组（0.92±0.13,0.94±0.10）MMP-9/TIMP-1 mRNA和蛋白表达值小于1（P值均＜0.05）.⑤各组NF-κB和MMP-9的mRNA及蛋白的表达呈正相关（r值分别为0.87和0.66,P值均＜0.05）.结论 吸烟大鼠气道上皮细胞NF-κB、MMP-9和TIMP-1 m-RNA及蛋白的表达水平升高,并且MMP-9/TIMP-1大于1,戒烟后NF-κB、MMP-9和TIMP-1的表达有所下降,且MMP-9/TIMP-1小于1,提示吸烟可以引起气道上皮的炎症和重塑,戒烟可以减轻气道炎症和重塑.

慢性阻塞性肺疾病患者血清CatS、CatL、CatB与炎性因子、CAT评分及预后的相关性研究

目的探究急性加重期慢性阻塞性肺疾病(AECOPD)患者血清组织蛋白酶L(CatL)、组织蛋白酶S(CatS)、组织蛋白酶B(CatB)与炎性因子(IL-8、IL-10、TNF-α、CRP)、COPD评估测试(CAT)评分及预后的关系。方法选择2022年1月—12月河北大学附属医院收治的224例AECOPD患者为病例组,同期选择健康体检肺功能正常者62例为对照组。比较两组血清CatS、CatL、CatB、CRP、IL-8、IL-10、TNF-α水平及CAT评分;采用Pearson检验分析AECOPD患者血清CatS、CatL、CatB与炎性因子和CAT评分的相关性。对224例AECOPD患者随访28 d,统计死亡例数,比较生存组与死亡组临床资料及各实验室指标,采用Logistic回归模型分析AECOPD预后的影响因素。结果病例组血清CatB低于对照组(P<0.05),CatS、CatL高于对照组(P<0.05);病例组血清IL-10低于对照组(P<0.05),CRP、IL-8、TNF-α、CAT显著高于对照组(P<0.05)。Pearson检验显示,AECOPD患者血清CatS、CatL与CRP、IL-8、TNF-α、CAT评分呈正相关(P<0.05),与IL-10呈负相关(P<0.05);血清CatB与CRP、IL-8、TNF-α、CAT评分呈负相关(P<0.05),与IL-10呈正相关(P<0.05)。224例AECOPD患者中,随访28 d死亡39例。生存组和死亡组性别、年龄、COPD病程、白细胞计数、白蛋白、饮酒史、饮酒史、高血压占比、糖尿病占比、冠心病占比差异无统计学意义(P>0.05);与生存组比较,死亡组机械通气占比、PaCO_(2)、CatS、CatL升高(P<0.05),PaO_(2)、CatB显著降低(P<0.05)。Logistic回归模型显示,机械通气、PaCO_(2)、CatS、CatL是AECOPD预后的危险因素(P<0.05),PaO_(2)、CatB为其保护因素(P<0.05)。结论AECOPD患者血清CatS、CatL、CatB与炎性因子、CAT评分及预后关系密切,三者水平检测有助于评估AECOPD病情和预后。

原因不明性不孕患者子宫内膜基质金属蛋白酶-9mRNA的表达及其性激素调节

目的 检测基质金属蛋白酶 9(MMP 9)及其抑制物 1 (TIMP 1 )mRNA在原因不明性不孕患者黄体中期子宫内膜中的表达 ,及与性激素的相关性。方法 采用原位杂交、逆转录聚合酶链反应(RT PCR)技术 ,对 38例原因不明不孕患者 (研究组 )和 2 0例正常生育期妇女志愿者或男方因素不孕患者 (对组照 )的黄体中期子宫内膜行MMP 9、TIMP 1mRNA检测 ,同期放射免疫法测定雌二醇 (E2 )、孕酮 (P)水平。结果 子宫内膜腺上皮、间质细胞胞浆、胞核均有MMP 9、TIMP 1mRNA的表达 ,研究组较对照组表达少 ,研究组黄体中期子宫内膜MMP 9mRNA表达水平为 0 .42± 0 .1 9,显著低于对照组的 0 .57± 0 .1 9(P <0 .0 5) ;研究组TIMP 1mRNA表达水平为 0 .59± 0 .1 9,显著低于对照组的 0 81± 0 .2 0 (P <0 .0 1 )。研究组黄体中期血清P水平为 (34± 1 5)nmol/L ,显著低于对照组的 (53± 1 7)nmol/L(P<0 .0 1 ) ,而血清E2 水平与对照组比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5)。对照组P水平与MMP 9mRNA表达呈正相关 (r=0 .72 2 ,P <0 .0 1 ) ,而研究组无相关性 (P >0 .0 5) ;两组P水平与TIMP 1mRNA ,E2 与MMP 9、TIMP 1mRNA均无相关性 (P >0 .0 5)。结论 原因不明不孕患者黄体中期P水平影响MMP 9、TIMP 1mRNA的表达并致活性下降 。

ATP6L对人肝癌细胞HCCLM3侵袭能力的影响及其机制

目的观察ATP6L表达变化对人肝癌细胞HCCLM3侵袭能力等肿瘤生物学特性的影响，并探讨其作用机制。方法构建ATP6L-RNAi真核表达载体ATP6L-sh与阴性对照载体Con-sh，并分别转染至HCCLM3细胞，建立稳定干扰ATP6L的细胞株和阴性对照细胞株，通过细胞侵袭实验（Transwell）检测人肝癌细胞HCCLM3的体外侵袭能力变化，通过Westernblot实验、明胶酶谱测定、原位荧光酶谱测定等实验技术，检测ATP6L—sh和Con—sh两株细胞ATP6L蛋白表达水平、上清液基质金属蛋白酶（MMP）-2的活性以及胞内组织蛋白酶B（CathepsinB）活性的变化。结果与阴性对照细胞株比较，稳定干扰ATP6L表达的ATP6L-sh细胞株ATP6L蛋白表达水平明显下调，体外侵袭能力明显减弱。ATP6L—sh细胞与对照细胞分泌上清液中MMP-2活性分别为1．81±0．18、18．40±1．26（P〈0．05）；细胞内CathepsinB活性分别为228．6±21．1、471．7±21．4（P〈0．05），活性均明显降低。结论ATP6L在肿瘤侵袭过程中发挥重要作用，抑制ATP6L蛋白表达可有效降低肝癌细胞HCCLM3的侵袭能力，ATP6L蛋白对肿瘤细胞侵袭能力的影响可能与调控MMP-2和CathepsinB活性有关。

核转录因子-κB抑制剂姜黄阻断脓毒症诱导的肌蛋白水解

美国学者经过实验证实姜黄可防止大鼠脓毒症诱导的肌蛋白水解，此外，他们还发现了姜黄对脓毒症诱导不同肌蛋白水解途径的影响（即：泛素-蛋白酶体途径、钙蛋白酶途径、组织蛋白酶L依赖性蛋白水解途径）以及核转录因子-κB（NF-κB）和p38／MAP激酶失活在姜黄阻断肌蛋白水解中的作用。