组织蛋白酶B抑制剂对小鼠急性肝功能衰竭的保护作用及机制

目的探讨组织蛋白酶B抑制剂对小鼠急性肝功能衰竭的保护作用及机制。方法将雄性昆明种小鼠45只分为对照组、模型组和保护组,每组各15只。模型组和保护组一次性腹腔注射脂多糖/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN),保护组于造模前30min予组织蛋白酶B抑制剂(CA-074me)腹腔注射,而模型组、对照组分别注射同等体积的0.5%氯化钠溶液作为对照,给药后6 h分别取血清、肝组织标本。检测肝功能变化及凝血酶原时间(PT),观察肝脏病理改变,末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肝细胞凋亡,免疫组织化学分析细胞色素c表达,RT-PCR检测肝组织中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达。另取75只小鼠按上述方法分组处理,每组25只,比较各组小鼠24 h存活率。统计学处理采用t检验和x^2检验。结果保护组小鼠24 h存活率明显高于模型组分别为76%(19/25)和36%(9/25)(x^2=8.12,P<0.05);保护组小鼠血清ALT[(568.50±45.68)U/L比(1394.55±78.58)U/L]、AST[(755.16±51.14)U/L比(1 488.72±64.62)U/L]、TBil[(22.82±2.04)μmol/L比(52.08±4.10)μmol/L]和PT[(14.26±.32)s比(17.40±0.30)s]水平均明显低于模型组(均P<0.05);与模型组比较,保护组小鼠肝组织炎性细胞浸润明显减少,肝细胞坏死程度明显减轻,凋亡指数明显下降[(18.4±2.6)%比(30.4±2.8)%,P<0.05];保护组小鼠肝组织中细胞色素c[(0.19±0.02)比(0.33±0.05)]和Caspase-3[(0.18±0.03)比(0.34±0.05)]表达水平明显低于模型组(均P<0.05)。结论 CA-074me对小鼠急性肝功能衰竭具有保护作用,可减轻肝细胞炎性反应、坏死和凋亡,降低急性肝功能衰竭的病死率,其机制可能与CA-074me下调细胞色素c和Caspase-3的表达有关。

真菌来源的组织蛋白酶B抑制剂F04ZA-1203A的研究

目的组织蛋白酶B(cathepsin B,CatB)是一种主要存在于溶酶体的半胱氨酸蛋白水解酶,具有广谱蛋白水解酶活性,能够降解多种基底膜蛋白,为癌细胞的转移打开通道,促进肿瘤细胞向深部组织浸润。因此,研究CatB抑制剂在抗肿瘤转移方面具有潜在的应用价值。本研究筛选CatB抑制剂,发现潜在的抗癌药物先导化合物。方法利用自建的快速、高效的组织蛋白酶B抑制剂的高通量筛选方法,从大量真菌菌库及其来源的代谢产物中筛选能够产生CatB抑制活性产物的菌株,对其发酵产物进行有机溶剂提取、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱及HPLC制备分离获得活性化合物,经紫外、质谱、核磁等理化数据的分析进行结构鉴定。结果筛选分离得到一个活性化合物F04ZA-1203A,结构解析确定了其为已知化合物thielavin B,该化合物对CatB的抑制IC50为1.85μg/ml。结论F04ZA-1203A(thielavin B)对CatB有强的抑制活性,国内外未见报道。

Cathepsin B抑制剂对反复惊厥新生大鼠海马组织Clusterin表达的干预作用

目的探讨新生期大鼠反复惊厥后海马丛生蛋白(Clusterin)的表达及溶酶体蛋白酶抑制剂Cathepsin B(CBI)对其表达的干预作用。方法 6日龄SD大鼠随机分为3组:对照组、惊厥组(RS组)、CBI组,每组6只。RS组新生大鼠每日吸入0.04～0.05 mL三氟乙醚诱导其惊厥发作5次,每次间隔30 min,连续9 d;对照组同样操作但不吸入三氟乙醚;CBI组惊厥前腹腔注射CBI(2μL,0.5 g.L-1),采用同样方法吸入三氟乙醚诱导其惊厥发作。于出生35 d(P35)处死3组大鼠,并取其海马组织。采用免疫印迹技术检测其Clusterin的表达。3组蛋白水平比较采用SPSS 17.0软件进行方差分析。结果 RS组海马中Clusterin表达(1.19±0.10)明显高于对照组(0.64±0.24),两两比较差异有统计学意义(P<0.01)。CBI组海马Clusterin表达(0.80±0.16)明显低于RS组,差异有统计学意义(P<0.01),CBI组海马Clusterin表达与对照组比较差异无统计学意义。结论惊厥后Clusterin蛋白表达水平明显上调,表明Clusterin参与了新生大鼠反复惊厥后所致脑损伤的分子机制,CBI对其表达有明显干预作用。

墨西哥落羽杉中三个活性双黄酮研究

从墨西哥落羽杉 (Taxodiummucronatum)枝叶中分离得到 3个化合物 ,通过MS、1DNMR、 2DNMR以及与参考文献比较的方法鉴定它们分别为 3个已知双黄酮 ,即 :a mentoflavone (1) ,podocarpusflavoneA (2 ) ,4′ ,7 dimethylamentoflavone (3)。本文还对文献中amentoflavone的C - 2 和C - 6 的碳谱数据归属进行了修正。体外生物活性筛选结果表明 ,这 3个双黄酮均为组织蛋白酶B的抑制剂 ,其IC50 值分别为 1 75、 1 6 8和 0 5 5 μmol/L ;这 3个双黄酮均显示一定的细胞毒活性 ,其中化合物 1对肿瘤细胞株BGC 82 3的IC50 值为 3 5 1μmol/L ,化合物 2对肿瘤细胞株HT 2 9的IC50 值为 11 16 μmol/L ,化合物 3对肿瘤细胞株A5 49、BEL 74 0 2、DU14 5、HT 2 9的IC50 值分别为 7 74、 17 16、 12 4 2、 14 5 4μmol/L。