小麦miR395a前体克隆、遗传转化及组织表达模式分析

miRNA是一类在调控植物发育和生物及非生物逆境胁迫响应过程中发挥重要功能的非编码小RNA,为了探究miR395a在小麦抗病中的功能和作用机制,比较了不同物种中的miR395a成熟序列,分析发现miR395a在不同物种中具有较高的保守性,其中小麦与拟南芥、番茄以及大豆中的miR395a成熟序列具有高度一致性。并从小麦叶片中克隆了miR395a的前体序列,并将其连接到植物表达载体pCambia1301上,构建了miR395a前体的过量表达载体,之后通过农杆菌介导的遗传转化法,转化至小麦栽培品种(百农207)中,获得56株转基因植株,并通过PCR鉴定出11株阳性转基因植株。用RT-qPCR技术对不同组织中miR395a的表达量进行分析,结果显示,miR395a为组成型表达,但在不同组织中的表达量有差异,其中在三叶期和抽穗期叶片中的表达量较高,叶鞘中次之,旗叶中表达量最低。综上,获得了过量表达miR395a前体的小麦转基因植株,为进一步研究miR395a在小麦抗病中的功能及作用机制提供了材料来源。

水稻OsENOD93b基因组织表达模式与生物信息学分析

主要探究OsENOD93b基因在水稻中的组织表达模式,并对其作生物信息学分析。采用实时荧光定量PCR技术分析OsENOD93b基因的表达模式。用ExPASy-Protparam、Protscale、CDD、SOPMA、Phyre 2、Psort等在线工具对OsENOD93b进行生物信息学分析。经组织表达模式分析可知,OsENOD93b基因在叶片中的含量最多,其次是茎,含量最少的为根。通过ExPASy-Protparam分析发现,OsENOD93b分子量为16.42989 ku,是一种具有亲水性的不稳定的碱性蛋白。该蛋白属于ENOD93超级家族。通过SOPMA在线软件对OsENOD93b蛋白的二级结构进行分析预测,发现其由无规则卷曲(41.56%)、α-螺旋(39.61%)、延伸链区(14.94%)和β-转角(3.90%)4种形式组成。此外,利用不同在线工具对OsENOD93b蛋白的三级结构、保守区域、亚细胞定位进行生物信息学分析。结果表明,OsENOD93b基因在进化过程中具有一定的保守性,并有多样的潜在功能待研究。研究结果为进一步探明OsENOD93b基因的生物学功能提供了依据。