基于组织驻留记忆CD4^(+)T细胞探讨溃疡性结肠炎复发过程中“伏邪”的生物学基础

从组织驻留记忆CD4^(+)T细胞(CD4^(+)TRM)细胞入手,综述其生理病理特点及其在溃疡性结肠炎(UC)复发中的作用,探讨UC复发过程中“伏邪”的生物学基础,为中医药抗UC复发提供新策略。CD4^(+)TRM细胞在UC的发病机制中具有核心作用,参与了UC肠道炎症的反复发作。伏邪是感邪后藏伏于体内不立即发病的邪气,或湿热瘀血等邪气并未随疾病治愈根除而是潜伏于内的病邪,是UC反复发作、迁延难愈的主要病因。伏邪的致病特点与CD4^(+)TRM细胞免疫记忆、感而引动、待机而发的特性暗相契合,因此CD4^(+)TRM细胞可能是UC“伏邪”的生物学基础之一。

组织驻留记忆T细胞在实体瘤治疗中的研究进展

血液循环中存在大量的免疫细胞,它们能够阻止病原微生物的感染和入侵,并在肿瘤防治中发挥重要作用。组织驻留记忆T细胞(TRM)是一个特殊的肿瘤浸润淋巴细胞亚群,能够无限期地驻留在组织中,对其同源抗原作出快速的免疫应答。TRM包括CD4^(+)和CD8^(+)两个亚群,均以表达CD69和CD103标记物为主要特征,通过产生杀伤性细胞因子等方式,激活固有免疫和适应性免疫应答。TRM在减缓肿瘤发生发展、抑制转移和降低肿瘤复发等方面的作用已在多种实体瘤中得到证实。为深入研究这些细胞的生物学特性和免疫机制,在查阅文献的基础上,梳理组织驻留记忆T细胞的基本生物学特征,综述CD8^(+)TRM细胞在乳腺癌、非小细胞肺癌和肝癌等实体瘤治疗中的作用和研究进展,旨在为肿瘤治疗提供新的策略和靶点。

基于记忆性CD4^(+) T细胞探讨中医药防治溃疡性结肠炎复发的新策略

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是炎症性肠病的一种表型,以结肠和直肠慢性、持续、反复发作的黏膜炎症为主要特征,临床典型表现为腹痛、腹泻、里急后重、黏液脓血便等[1]。本病好发于青少年,主要见于北美和欧洲等发达国家,流行病学资料显示我国UC的患病率约为1.18/10万,且其发病率和患病率逐年增加,目前,UC已被世界卫生组织列为现代难治疾病之一[2]。

结核抗原特异性CD4^＋中央型记忆T细胞的检测及分布特性研究

目的比较活动期肺结核患者和纯蛋白衍生物(purified protein derivative,PPD)试验阳性健康人记忆T细胞的产生和分布特性。方法取乙二胺四乙酸(ethylene diaminete traacetic acid,EDTA)抗凝静脉血,Ficoll进行密度梯度离心获取PBMCs。采用卡介苗刺激后,通过CD4、CD154、CCR7、CD45RA4种抗体共染色,用流式细胞仪检测结核抗原特异性CD4+记忆T细胞。结果以CD4+CD154+双阳性区设门,研究结核抗原特异性CD4+记忆T细胞,结果显示,肺结核患者CD4+CD154+CD45RA-CCR7+中央型T淋巴细胞亚群分布频率显著降低(P<0.05),CD4+CD154+CD45RA+CCR7+初始T细胞亚群的比例明显增高(P<0.05)。结论肺结核患者CD4+中央型记忆T淋巴细胞亚群的产生存在异常,可能与免疫功能低下和结核病发病密切相关。

槲皮素和乙酸龙脑酯对细菌脂多糖诱导流产孕小鼠子宫组织中CD4^+/CD8^+T细胞的影响

目的探讨小鼠子宫组织中CD4+和CD8+T细胞在早期胚胎丢失中的意义,研究槲皮素和乙酸龙脑酯对细菌脂多糖(LPS)诱导流产小鼠的保胎效果和对母胎界面免疫平衡的调节作用。方法采用LPS尾静脉注射,制造小鼠流产模型,孕4~7d分别口服不同保胎药物,用药前后检测各组(n=10)小鼠子宫组织CD4+/CD8+T细胞亚群的变化。结果LPS促流产后,小鼠子宫壁CD4+T细胞数量显著增多(P<0.01),CD8+T细胞无明显变化(P>0.05),CD4+/CD8+比值显著升高(P<0.01)。预先口服保胎药物能不同程度抑制LPS的作用。其中以槲皮素和乙酸龙脑酯联合使用组的保胎效果最为明显,CD4+/CD8+比值下降,较LPS流产模型组差异极显著(P<0.01)。结论小鼠子宫组织CD4+/CD8+比值升高与早期胚胎丢失关系密切,槲皮素和乙酸龙脑酯能够调节小鼠子宫局部的免疫微环境,从而起到一定的促孕保胎作用。

rhG-CSF动员的外周血采集物与稳态骨髓中CD4^＋CD8^＋初始及记忆T细胞亚群的比较

本研究探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员的外周血采集物(G-PB)与稳态骨髓(SS-BM)中CD4+、CD8+初始、记忆T细胞亚群的差异。依据细胞表面CD45RA和CD62L的表达将CD4+、CD8+T细胞划分为初始T细胞(naive,CD45RA+CD62L+)、中心记忆T细胞(central memory,TCM,CD45RA-CD62L+)、效应记忆T细胞(effector memory,TEM,CD45RA-CD62L-)、终末分化效应记忆T细胞(terminally differentiated effector memory,TTD,CD45RA+CD62L-)。用流式细胞仪测定G-PB与SS-BM中CD4+、CD8+初始和记忆T细胞的比例组成,并计算每微升采集物中各细胞亚群的绝对数量。结果表明:G-PB中CD4+、CD8+T细胞的比例组成及CD4+/CD8+比值均高于SS-BM(p<0.05);G-PB中CD4+初始T细胞的比例显著低于SS-BM(p<0.001),而CD4+TEM比例显著高于SS-BM(p<0.001);G-PB中CD8+初始和记忆T细胞亚群的比例与SS-BM无显著差异(p>0.05);与SS-BM相比,G-PB中CD4+CD62L+T细胞的比例明显降低(p=0.001),每微升G-PB移植物中的各淋巴细胞亚群均明显高于SS-BM(p<0.001)。结论:G-PB与SS-BM中CD4+、CD8+初始和记忆T细胞亚群在相对和绝对数量方面存在明显的差异,这种差异可能影响G-PB和SS-BM移植后急性、慢性移植物抗宿主病发生率及其程度的异同。

初始CD4^+T和记忆性Th1细胞在淋巴器官的分布和IFN-γ的表达

目的比较观察抗原特异性初始CD4+T细胞和效应性/记忆性Th1细胞在体内外IFN-γ的产生和在淋巴组织的分布。方法将标记相同数量的OVA-抗原受体转基因小鼠(OVA-TCR-Tg)的初始CD4+T细胞和Th1细胞被动输给正常小鼠后,利用流式细胞仪在单个细胞水平上观察初始CD4+T细胞和Th1细胞在体内淋巴组织器官的分布和IFN-γ的产生。结果体外经抗原刺激后,大于98%的Th1细胞和4.1%的初始CD4+T细胞表达IFN-γ。当被动输入机体后,初始CD4+T细胞主要分布于淋巴结,而Th1细胞主要分布于脾脏。当再次受到抗原的刺激后,记忆性Th1细胞能迅速产生IFN-γ。初始CD4+T细胞与效应/记忆Th1细胞在淋巴结和脾脏不同的分布,可能与CD62L的表达有关。结论本研究在我们以前研究的基础上进一步探讨了CD4+T细胞和记忆性Th1细胞的差异。此结果为进一步揭示初始CD4+T细胞与Th1细胞的差异提供了实验和理论依据。

CD154(CD40L)的表达与初始和记忆CD4^+ T细胞相关性的探讨

目的:探讨CD154+细胞的表型特征与初始和记忆CD4+ T细胞以及与细胞因子表达之间的关系。方法:正常人外周血单个核细胞(PBMC),经抗CD3+抗CD28单克隆抗体(mAb)刺激培养后,利用多种抗细胞表面分子和抗细胞因子以及抗CD154抗体进行标记,用流式细胞术检测。结果:体外刺激PBMC6h后,CD154表达于CD4+ T细胞,而不表达于CD8+T细胞。对比分析CD4+CD154+ T和CD4+CD154- T细胞上CD45RA(初始)和CD45RO(记忆)表面分子的结果表明,大多数CD4+CD154+ T细胞为记忆细胞。当利用抗CD3或抗CD3+抗CD28mAb刺激后,分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α的CD4+ T细胞均为CD4+CD154+ T细胞,而且单个细胞可以同时分泌两种以上细胞因子。进一步研究表明,CD4+CD154+ T细胞低表达或不表达CD25,不表达CD62L,50%左右的细胞表达CCR7。结论:体外短时间刺激PBMC,经过对细胞表型和细胞因子表达的研究,表明CD154分子结合其他表面标记或细胞因子的表达可以用于鉴别初始和记忆CD4+ T细胞。

过敏性紫癜患儿外周血CD4^+记忆T细胞亚群表达的意义

目的探讨CD4+记忆T细胞亚群在过敏性紫癜(HSP)免疫发病机制中的意义。方法收集初发HSP患儿25例,并将其分为HSP无肾脏损害组(N-HSPN组)15例和紫癜性肾炎组(HSPN组)10例,另选取10例本院健康体检儿童作为正常对照组,抽取患儿急性期、恢复期外周血,用梯度密度离心法分离新鲜单个核细胞(PBMC),用流式细胞仪检测PBMC中CD4+效应记忆T细胞(CD4+Tem)、CD4+中央记忆T细胞(CD4+Tcm)水平。结果 HSP患儿急性期外周血CD4+T细胞水平、CD4+/CD8+比例均较正常组降低(均<0.05),而CD8+T细胞数水平与正常组比较差异无统计学意义(>0.05)。急性期N-HSPN和HSPN组患儿外周血CD4+Tem水平均明显高于正常对照组(均<0.05),而N-HSPN和HSPN组比较差异无统计学意义(>0.05);N-HSPN和HSPN患儿CD4+Tcm的表达与正常组比较差异均无统计学意义(均>0.05)。恢复期NHSPN和HSPN组HSP患儿外周血CD4+Tem水平仍明显升高,与急性期比较差异无统计学意义(均>0.05),但仍然明显高于正常组(均<0.05)。结论 HSP患儿存在CD4+T细胞的异常,CD4+Tem的异常升高可能是HSP发生的一个重要因素;CD4+Tem可能只是参与了HSP血管炎的免疫损伤,而与是否导致HSPN的病理过程无关,不能作为检测HSP肾脏损害的有效指标。

原发皮肤CD4^(+)小到中等大T细胞淋巴组织增生性疾病临床病理观察

目的观察原发皮肤CD4+小到中等大T细胞淋巴组织增生性疾病(Primary cutaneous CD4+small/medium T-cell lymphoproliferative disorder,PCSMTCLPD)临床病理特征。方法收集3例PCSMTCLPD患者临床资料,取病变组织进行病理检查,利用HE染色、免疫组化等方法明确诊断并随访,结合文献分析疾病的临床病理特点。结果2例表现为背部皮肤单发性结节,1例表现为头颈部多发性结节;光镜下见真皮内致密淋巴细胞弥漫、结节状、条带状浸润,局部浸润到皮下脂肪组织,皮肤附件内可见少量淋巴细胞浸润,并见小血管增生现象;其中异型淋巴细胞形态小到中等大,形态多样,核深染,可见小核仁;免疫组化阳性表达CD3、CD4,部分阳性表达Bcl-6、PD-1、CXCL-13,阴性表达CD10、CD8,细胞增殖活性较低,Ki-67约10~20%,诊断为PCSMTCLPD。随访10~39月,未见病变复发或进展,患者健康状况良好。结论PCSMTCLPD具有惰性临床过程,正确诊断并选择适当的治疗措施具有重要临床意义。

莲蓣消瘿汤对桥本甲状腺炎患者外周血中CD4^(+)CD45RO^(+)记忆性T细胞的影响

目的:观察莲蓣消瘿汤对甲状腺功能正常的桥本甲状腺炎(HT)患者外周血CD4^(+)CD45RO^(+)记忆性T细胞水平的影响。方法:将132例甲状腺功能正常的HT肝郁脾虚证患者随机分为中药组(莲蓣消瘿汤)、西药组(硒酵母)、中药联合西药组(联合组),每组44例,治疗12周,治疗前后通过化学发光免疫分析法检测血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)、甲状腺球蛋白抗体(Tg Ab)浓度,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清白细胞介素-17(IL-17)、干扰素-γ(IFN-γ)的表达量,流式细胞技术测定CD4^(+)CD45RO^(+)记忆性T细胞在外周血单个核细胞(PBMC)中的百分比。结果:联合组、中药组、西药组患者治疗后TPO-Ab、Tg Ab低于治疗前(P<0.05),联合组、中药组患者治疗后IL-17、IFN-γ、CD4^(+)CD45RO^(+)记忆性T细胞在PBMC中百分比均低于治疗前(P<0.01);治疗后组间比较,联合组患者血清TPO-Ab、Tg Ab、IL-17、IFN-γ水平明显低于中药组、西药组(P<0.05),中药组患者血清TPO-Ab、Tg Ab、IL-17、IFN-γ水平低于西药组(P<0.05),联合组、中药组患者CD4^(+)CD45RO^(+)记忆性T细胞在PBMC中百分比均低于西药组(P<0.01),中药组患者治疗后CD4^(+)CD45RO^(+)记忆性T细胞在PBMC中百分比与联合组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:莲蓣消瘿汤能降低甲状腺功能正常的HT患者血清TPO-Ab、Tg Ab滴度及血清IL-17、IFN-γ水平,并降低CD4^(+)CD45RO^(+)记忆性T细胞在PBMC中百分比,调节机体免疫功能,改善桥本甲状腺炎。

口腔鳞状细胞癌外周血、癌组织及癌旁组织中CD4^+T、CD8^+T淋巴细胞上TIM-3的表达及临床意义

目的研究负性共刺激分子T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(TIM-3)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者外周血、癌组织及癌旁组织中CD4^+T、CD8^+T淋巴细胞上的表达及其临床意义。方法选取2018年4月至2019年10月郑州大学第一附属医院收治的41例OSCC患者作为OSCC组,选取同期20例健康体检者作为对照组。通过流式细胞术检测CD4^+T、CD8^+T淋巴细胞上TIM-3的表达水平,进一步探讨其与OSCC患者临床病理特征的关系。结果TIM-3在OSCC患者外周血CD4^+T、CD8^+T淋巴细胞上的表达水平高于对照组(P<0.05)。TIM-3在OSCC患者癌组织中CD4^+T、CD8^+T淋巴细胞上的表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。有淋巴结转移的OSCC患者外周血中CD4^+T、CD8^+T淋巴细胞上TIM-3的表达水平高于无淋巴结转移的OSCC患者(P<0.05)。TIM-3在OSCC患者癌组织中CD4^+T、CD8^+T淋巴细胞上的表达水平与年龄、性别、部位、肿瘤大小、病理学分级、TNM分期、淋巴结转移无关(P>0.05)。结论TIM-3在OSCC患者外周血和癌组织中CD4^+T、CD8^+T淋巴细胞上呈高表达,且OSCC患者外周血中CD4^+T、CD8^+T淋巴细胞上TIM-3的表达水平与淋巴结转移有关,TIM-3可能参与OSCC的发生发展,并有望成为OSCC新的生物标志物及免疫治疗的新靶点。

膀胱癌患者高表达活化的CD4^+记忆性T细胞和CD8^+T细胞和低表达M0巨噬细胞与临床预后佳有关

目的研究膀胱癌免疫细胞的浸润模式,探索免疫细胞与预后的关系。方法从癌症基因组图谱(TCGA)下载膀胱癌转录本数据及相应临床数据,CIBERSORT软件反卷积法计算22种免疫细胞所占比例,R软件分析各临床分期中免疫细胞浸润模式,Kaplan-Meier生存分析各免疫细胞与预后的关系。结果从TCGA数据库下载基因转录本数据共433例,包含414例膀胱癌组织,19例正常组织。数据矫正后用CIBERSORT软件计算免疫细胞所占比例,筛选后得到膀胱癌组织146例,正常膀胱组织4例。活化的CD4^+记忆性T细胞、CD8^+T细胞在膀胱癌临床Ⅳ期表达量最低,M0巨噬细胞在膀胱癌临床Ⅳ期表达量最高,膀胱癌组织活化的CD4^+记忆性T细胞、CD8^+T细胞高表达,M0巨噬细胞低表达利于预后。结论膀胱癌组织活化的CD4^+记忆性T细胞、CD8^+T细胞高表达,M0巨噬细胞低表达,与临床预后好有关。

人初始和记忆CD4^+T细胞信使RNA基因芯片检测结果分析

目的探讨健康成人外周血初始和记忆CD4^+T细胞静息状态下表面分子、趋化因子受体、细胞因子和转录因子mRNA表达的差异。方法抽取健康成年人外周血,分离PBMC,染色后流式分选出CD45RO-的初始和CD45RO+的记忆CD4^+T细胞,裂解细胞,进行mRNA表达谱芯片检测。结果相比初始T细胞,静息状态下记忆CD4^+T细胞表达高水平的表面分子CTLA-4、PD-1、FAS、CD25,趋化因子受体CCR4、CCR6、CXCR3、CXCR5,细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17和转录因子T-bet、EOMES、STAT4、GATA3和RORγt,并表达低水平的表面分子CD62L、CCR7、ICAM-I、CD40L,细胞因子IL-1β和转录因子NF-κB。结论静息状态下,与初始CD4^+T细胞相比,记忆CD4^+T细胞高表达某些活化分子、细胞因子、转录因子mRNA,可能是记忆CD4^+T细胞发生快速免疫应答的关键因素。

低剂量雷帕霉素给药对流感病毒感染的小鼠肺组织常驻CD8^+记忆T细胞的影响

目的雷帕霉素(rapamycin)已被报道可以促进记忆性CD8^+T细胞,包括效应性记忆(effector memory)CD8^+T细胞及中央记忆性(central memory)CD8^+T细胞的分化,但是其对组织常驻(tissue resident)CD8^+记忆T细胞的调控作用尚未见报道。本研究旨在探索雷帕霉素对小鼠组织常驻CD8^+记忆T细胞的影响。方法将C57BL/6J野生型小鼠随机分成2组:对照组和雷帕霉素处理组。向其输注能够特异性识别LCMV抗原gp33-41的P14细胞(CD8^+T细胞),而后利用表达LCMV gp33-41的流感病毒感染小鼠。利用流式染色技术检测和比较2组小鼠在不同时间点的血液、淋巴结以及肺脏中抗原特异性CD8^+记忆T细胞的比例和数量以及相应的表面分子、胞内细胞因子。结果与对照组相比,雷帕霉素处理组的外周血、引流淋巴结以及肺组织内的抗原特异性CD8^+记忆T细胞均显著增多,同时发现外周血中CD8^+记忆前体细胞比例增多,淋巴结中的中央型CD8^+记忆T细胞比例及数量增多、CD8^+记忆T细胞的功能增强,肺脏组织常驻CD8^+记忆T细胞的CD103和CD69的表达上升。结论感染流感病毒后,持续低剂量给予雷帕霉素能够抑制mTOR信号从而提高组织特异性常驻CD8^+记忆细胞的形成和维持,这为新型流感疫苗的研发提供了新的思路。

原发性皮肤CD4^(+)小/中T细胞淋巴组织增生性疾病一例

患者,女,55岁。右耳后结节半年。皮损组织病理示:真皮组织内、皮肤附属器周围见大量中等大小淋巴细胞浸润,细胞轻度异型,背景可见小淋巴细胞和组织细胞。免疫组化提示:CD4(+)、CD8(+,少数细胞)、CD20(+)、CD3(+)、CD2(+)、CD79a散在(+)、CD5(+)、CD7(+)、Ki-67(+,<5%)。TCRG基因重排检测在目标条带范围内查见克隆性扩增峰。诊断:原发性皮肤CD4;小/中T淋巴组织增生性疾病,予以局部手术切除。

CD4^+T淋巴细胞亚群研究进展

在免疫应答期间．外周血T淋巴细胞发育为功能不同的亚群．并通过分泌特殊的细胞因子．影响细胞免疫，调节体液免疫应答。T淋巴细胞按表型不同可分为CD4^＋和CD8^＋两大亚群．它们多数表达T细胞受体．但识别的抗原和所受的主要组织相容性复合体（major histoconapatibility complex, MHC）的限制性不同。现将近年来关于CD4^＋T淋巴细胞亚群的研究进展综述如下。

自身免疫性肝病相关抗体与CD_4^+ CD_(25)^(+high)调节性T细胞的临床意义探讨

目的探讨自身免疫性肝炎(AIH)患者外周血CD4+CD25+high调节性T细胞的作用。方法抗核抗体酶联免疫分析法检测(ANA)。自身免疫性肝病谱线性免疫分析法(LIVER-LIA)测定抗肝肾微粒体1(LKM-1)、抗肝细胞溶质抗原1(LC-1)、抗线粒体-2(AMA-M2)、抗可溶性肝抗原/抗肝胰抗原(SLA/LP)。用流式细胞仪技术比较分析AIH患者51例、慢性乙型肝炎(CHB)30例及键康正常人20例外周血中的CD4+CD25+high调节性T细胞,用免疫组织化学法检测AIH和CHB患者肝组织Foxp3的表达情况。结果AIH占51%(51/100),AIH组外周血中CD4+CD25+high/CD4+百分率显著低于正常组(P<0.05)和CHB组(P<0.01),并且CHB组显著高于正常组(P<0.05);同时AIH组外周血中CD4+T细胞也显著高于CHB组(P<0.01);肝组织Foxp3+细胞主要分布于肝小叶内窦周隙、汇管区,AIH组肝组织Foxp3+表达显著低于CHB组(P<0.01)。结论CD4+CD25+high调节性T细胞下降可能是自身免疫性肝炎发病的原因之一。

BCG复种或结核菌素复强反应对外周血CD4+记忆T细胞特征的影响

目的探讨复种BCG或结核菌素试验复强反应对外周血CD4^(+)记忆T细胞特征的影响。方法将结核菌素纯蛋白衍生物(TB-PPD)皮试和干扰素释放试验(QuantiFERON-TB Gold in-tube,QFT)均为阴性的健康者(PPD-QFT-)分成2组,其中一组接种BCG(BCG复种组),另一组接种安慰剂(对照组)。12周后,采集受试者外周血进行流式细胞术分析,然后在受试者右臂和左臂皮内分别注射TB-PPD和重组结核杆菌融合蛋白ESAT6-CFP10(EC),48 h观察皮试反应。结果对照组和BCG复种组再次TB-PPD皮试阳性率分别为14.3%和47.9%。对照组、TB-PPD阳转者与TB-PPD阴性反应者比较,其外周血CD27-CD28+CD4^(+)-EM细胞百分含量增加而CD27+CD28-CD4^(+)-CM细胞百分含量降低。BCG复种组、TB-PPD阳转者外周血CD27+CD28-CD4^(+)-EM细胞含量低于TB-PPD阴性反应者。结论成人复种BCG或TB-PPD皮试复强反应可影响外周血CD4^(+)