小鼠中枢组胺能神经元的特异性投射环路

目的探讨小鼠中枢组胺能神经元的特异性投射环路。方法将腺相关病毒(AAV)携带的人源绿色荧光蛋白作为示踪剂(AAV-hrGFP)微量注射至组胺脱羧酶Cre小鼠的结节乳头核,免疫荧光染色显示hrGFP的脑内分布,确定组胺能神经元的投射环路。结果绿色荧光蛋白hrGFP特异性表达在结节乳头核的组胺能神经元,并投射至大脑皮层、尾壳核、伏隔核、隔核、基底前脑、外侧下丘脑、杏仁核、终纹床核、丘脑、导水管周围灰质及臂旁核等脑区。结论中枢组胺能神经的特异性投射至脑内广泛区域,该研究结果有利于进一步阐明其调节觉醒、情绪等行为的神经功能环路。

新生鼠下丘脑结节乳头核组胺能神经细胞的原代培养

目的探讨新生鼠下丘脑结节乳头核(TM)组胺能神经细胞的体外培养方法.方法从新生鼠(24 h内)下丘脑后部分离出TM神经细胞,采用含有B27的Neurobasal Medium培养液进行体外原代培养.应用免疫细胞化学染色对培养的细胞进行鉴定.结果从新生鼠下丘脑中分离的TM神经细胞,在本实验条件下生长良好.原代培养7～9 d的神经细胞在形态上趋向成熟.免疫细胞化学染色结果表明培养的神经细胞呈组胺免疫反应阳性,为组胺能神经细胞.结论新生鼠下丘脑TM神经细胞可进行体外原代培养,它可作为研究中枢组胺神经系统的体外细胞模型.

Estazolam逆转结节乳头体核组胺引发的觉醒

目的观察增加γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyricacid,GABA)受体与GABA亲和力的Estazolam对结节乳头体核(tuberomammillary nucleus,TMn)组胺(histamine,HA)产生觉醒的作用,探究GABA与TMn的HA对睡眠-觉醒周期的调节。方法♂SD大鼠随机分为对照组,生理盐水组,Estazolam组,HA组,以及HA+Estazolam(2.5mg)组,HA+Estazolam(5mg)组。颅骨和颈肌植入脑电图(EEG)和肌电图(EMG)电极,带芯的不锈钢导管植入TMn邻近区以备微量注射药物。术后恢复7d,各组分别记录24h的EEG和EMG,分析睡眠-觉醒周期中各时相的变化。结果:TMn内注射HA(1μg.kg-1)在24h中觉醒时间增加(P<0.01),慢波睡眠被抑制,但不影响异相睡眠(paradoxicalsleep,PS)。灌胃给予Estazolam(5mg.kg-1)产生以深度慢波睡眠(SWS2)增加(P<0.01)为主要特征的总睡眠时间增加。在HA引起的觉醒达高峰(2h)的时候分别灌胃给予Estazolam2.5mg.kg-1与5mg.kg-1,使觉醒转为睡眠,并呈剂量依赖性。结论TMn内HA能神经元促进和维持觉醒,作用于GABA神经元末梢的苯二氮类(benzodiazepine,BZD)1受体的Estazolam,通过增加SWS2而增加总睡眠时间,并逆转HA引起的觉醒状态。