组蛋白乙酰转移酶Tip60降表达的肺腺癌细胞侵袭迁移能力变化及其机制

目的观察组蛋白乙酰转移酶Tip60降表达的肺腺癌细胞侵袭迁移能力变化并探讨其机制。方法肺腺癌细胞系A549分为Tip60降表达组、降表达阴性对照组及对照组,Tip60降表达组、降表达阴性对照组分别转染Tip60干扰siRNA及阴性对照siRNA,对照组不进行转染。采用Western blotting法检测细胞SETDB1蛋白,实时荧光定量PCR法检测细胞SETDB1 mRNA。采用CCK-8法观察细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞侵袭能力,划痕修复实验观察细胞迁移能力。使用Cistrome DB数据库的UCSC Browser功能搜索发现肺腺癌细胞A549中SETDB1启动子区H3组蛋白第9位赖氨酸(H3K9)和第27位赖氨酸(H3K27)残基存在明显富集峰,采用染色质免疫沉淀检测细胞SETDB1基因启动子区H3组蛋白H3K9、H3K27的乙酰化水平。结果Tip60降表达组SETDB1蛋白及mRNA表达均小于对照组、降表达阴性对照组(P均<0.05)。培养24、48、72 h时,Tip60降表达组细胞增殖能力均小于对照组、降表达阴性对照组;Tip60降表达组侵袭细胞数少于对照组、降表达阴性对照组;培养24、48 h时Tip60降表达组划痕愈合率均小于对照组、降表达阴性对照组(P均<0.05)。Tip60降表达组SETDB1启动子区组蛋白H3K9及H3K27乙酰化水平均小于对照组、降表达阴性对照组(P均<0.05)。结论Tip60降表达可抑制肺腺癌细胞的侵袭迁移能力,其机制可能与调控SETDB1启动子区H3组蛋白乙酰化水平有关。

菜心组蛋白乙酰转移酶基因BrcuHAC1克隆与表达分析

为揭示组蛋白乙酰化修饰在十字花科作物抽薹发育表观遗传调控中的功能,以油青49和油青甜菜心80天的菜心为材料,通过PCR和RACE方法克隆了菜心BrcuHAC1基因c DNA和g DNA全长序列,并进行生物信息学分析,同时采用实时荧光定量PCR方法检测目的基因的时空表达特性。结果表明,克隆获得了BrcuHAC1基因全长6 061 bp,包括CDS区5 067 bp,编码1 688个氨基酸。对应的g DNA全长为7 376 bp,含有15个外显子和14个内含子,最长的外显子长度为1 599 bp,内含子的长度范围为50~210 bp。启动子序列中含有多个基本转录元件和顺式作用元件,如光反应元件、脱落酸响应元件、参与厌氧诱导的增强子元件等。多序列比对结果表明,BrcuHAC1的氨基酸序列中含有高等植物HAC1基因的6个保守结构域。系统发育分析结果显示,菜心与油菜、甘蓝、白菜处于同一分支,其亲缘关系最近。时空特异性分析结果表明,BrcuHAC1在菜心的根、茎、花、叶中均有表达,其中在花中表达量最高,叶次之,根最低;BrcuHAC1从苗期至完全抽薹开花期的表达量呈现上升趋势,说明BrcuHAC1在菜薹花发育过程中可能起到一定的调控作用。本研究结果为揭示组蛋白乙酰转移酶调控菜心抽薹分子机制提供了一定的理论依据。

两种组蛋白乙酰转移酶P/CAF和p300协同提高WT1基因启动子和内部增强子活性

目的P/CAF(p300/CBP-associated factor)和p300都是组蛋白乙酰转移酶家族成员,它们都含有组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferase,HAT)区。本文的目的是检测P/CAF和p300及其HAT区在维耳姆斯氏瘤1(WT1)基因转录调控中的作用。方法构建WT1启动子/内部增强子/荧光素酶报告基因质粒,通过瞬时转染和荧光素酶活性测定实验检测P/CAF和p300及其HAT区在WT1基因转录调控中的作用。结果P/CAF和p300都能提高WT1基因启动子和内部增强子活性。当P/CAF和p300共同作用时,它们能协同提高WT1基因的转录活性。在WT1基因转录激活的过程中,P/CAF和p300的HAT区发挥重要作用。结论P/CAF和p300能够协同提高WT1基因的转录活性,在此过程中,P/CAF和p300的HAT区发挥重要作用。

一种简便可靠的组蛋白乙酰转移酶(HAT)抑制剂荧光检测方法

组蛋白乙酰转移酶(HAT)参与真核细胞基因转录的调节,其抑制剂由于具有调节转录并产生抗病毒、抗炎、抗氧化等作用,有希望成为一类新药.非放射性分光光度HAT测定方法虽然可替代广泛使用的放射性检测方法,但缺乏灵敏度和准确性.建立了一种简单的非放射性荧光检测方法,即测量辅酶A(CoASH)与邻苯二甲醛(OPA)和巯基乙醇反应的荧光产物.此法与分光光度法相比具有更高的准确性,可进行多种化合物HAT抑制活性的筛选.这种新方法有望成为研究转录调节和新药开发方面的一种有效工具.

甜菜组蛋白乙酰转移酶(HAT)超家族成员的鉴定与表达模式分析

组蛋白乙酰转移酶(Histone acetyltransferase,HAT)催化的组蛋白乙酰化修饰能够通过改变染色质结构调控植物的生长发育和胁迫应答。但是,关于甜菜HAT家族成员的信息及其参与非生物胁迫应答的情况尚未有明确报道。本研究利用生物信息学方法对甜菜HAT基因家族进行系统进化、基因结构、功能结构域、非生物胁迫下基因表达模式进行分析。研究结果表明,甜菜共有7个HAT家族成员,分别归属于GNAT、TAFII250和CBP家族。7个HAT成员分别分布在5条染色体上;编码长度为461~1904 aa氨基酸。甜菜组蛋白乙酰转移酶(BvHATs)除含有Acetyltransf_1、Acetyltransf_10和HAT_KAT11保守结构域外,还含有zf-TAZ、ZZ、PHD等多种功能结构域,并且不同成员间功能结构域差异较大。基于转录组测序结果,发现在不同非生物胁迫下的BvHATs基因水平发生显著变化。其中Bv4_085980_ujsz在盐胁迫和碱胁迫下都发生显著变化,而Bv2_026300_ydyh在冷胁迫下有明显下调。BvHATs家族基因参与非生物胁迫应答,但系统进化和表达模式分析表明BvHATs参与的调控通路可能不同于拟南芥。本研究为今后阐明BvHATs的基因功能提供了必要信息。

组蛋白乙酰转移酶的研究进展

组蛋白乙酰化与基因转录等生物效应有密切的关系，组蛋白乙酰化主要是由组蛋白乙酸转移酶催化的。本文主要介绍了基因转录有关组蛋白乙酰转移酶，包括ＨＡＴＡ／Ｇｃｎ５ｐ、ｐ３００／ＣＢＰ、ｐ／ＣＡＦ、ＡＣＴＲ、 Ｓｒｃ１、 ＴＡＦⅡ ２５０、 Ｅｌｐ３等的来源，与其相互作用的蛋白质及其主要功能。

鹅乙酰辅酶A酰基转移酶1基因的克隆、表达及生物信息分析

本实验旨在探究鹅乙酰辅酶A酰基转移酶1(ACAA1)基因的分子结构和功能特性,及其在鹅肥肝形成过程肝脏中的表达变化。选用体型和体重相当的70日龄健康朗德鹅42只,正常填饲,填饲到21 d转为限制饲养。然后分别在填饲前(OF0)、填饲第7天(OF7)、填饲第14天(OF14)、填饲第21天(OF21)、限制饲养第7天(F7)、限制饲养第14天(F14)和限制饲养第21天(F21)7个填饲阶段各采集6只鹅肝脏组织样本;采用RT-PCR和RACE方法克隆获得朗德鹅ACAA1基因cDNA全长序列并进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR方法检测ACAA1基因在朗德鹅不同填饲阶段肝脏中的表达。结果表明:鹅ACAA1基因cDNA全长为3 352 bp,其中CDS区为1 323 bp,5’UTR长度为77 bp,3’UTR长度为1 952 bp,编码441个氨基酸;在朗德鹅肥肝形成过程中,ACAA1基因在肝脏中的表达量呈先上升后下降的趋势,其在填饲14 d的鹅肝脏中表达量最高(P<0.05),在填饲结束限饲阶段的鹅肝脏中表达最低(P<0.05),限饲到21 d,其表达量恢复到填饲前水平。结果提示,ACAA1基因的表达与鹅肥肝的形成密切相关,为研究ACAA1基因在鹅肥肝形成中的生物学功能及其分子机制奠定基础。

玉米组蛋白乙酰转移酶的鉴定与表达规律分析

组蛋白乙酰转移酶(Histone acetyltransferases,HATs)催化组蛋白乙酰化,通过调节组蛋白乙酰化状态影响染色质的结构,进而影响基因的转录,在植物的生长、发育和胁迫反应过程中发挥重要的调控作用。目前有关玉米HATs家族基因的系统研究尚未见报道。本研究利用生物信息学方法,对玉米HATs家族基因进行系统进化分析、保守结构域分析、组织表达特性分析以及生物和非生物胁迫下的表达规律分析。结果发现,玉米HATs家族基因可以分为GANT、MYST和CBP 3个亚家族,均包含多个保守的结构域,在不同组织和生物/非生物胁迫过程中表达水平呈现明显的不同。利用Real-time PCR技术,检测HATs家族基因在激素处理玉米后的表达水平,发现该家族成员在茉莉酸和水杨酸处理后表现出不同的表达规律。这些结果表明玉米HATs家族基因在玉米生长发育以及响应生物和非生物胁迫过程发挥重要的作用,为阐明玉米HATs家族基因的功能及其调控机制奠定了基础。

重组p300组蛋白乙酰转移酶结构域的表达及应用

组蛋白乙酰化修饰是基因起始转录的关键步骤.p300等组蛋白乙酰转移酶(HATs)催化组蛋白和非组蛋白的乙酰化.HATs具有多种细胞功能,而且乙酰化对底物蛋白的功能改变也具有重要功能.组蛋白乙酰转移酶p300可乙酰化多种细胞内蛋白,某些病毒蛋白与p300有相互作用并促进病毒复制.因此,p300是细胞内具有广泛功能的转录激活因子.组蛋白乙酰转移酶结构域(HAT区)是p300乙酰化酶活性的最小中心功能域,在p300乙酰化底物中具有重要功能.本文重组表达了对应p300 HAT区的GST-p300 HAT蛋白,对其乙酰化酶的活性进行检测.结果证实,p300 HAT蛋白在体外可高效乙酰化组蛋白H3.随后,对体外乙酰化反应的条件进行优化.总之,本文构建了一种简单高效、非放射性体外乙酰化体系,适用于对潜在底物蛋白的乙酰化水平和机制进行分析,以及乙酰化蛋白的相关功能的研究.

组蛋白乙酰化/去乙酰化与基因表达调控研究进展

在真核生物中,组蛋白是构成核小体的重要成分,其乙酰化与去乙酰化修饰在真核生物基因表达调控中起重要作用。组蛋白乙酰化异常(低乙酰化或高乙酰化)常会引起基因表达紊乱,进而引起疾病的发生。对组蛋白乙酰转移酶(Histone acetyltransferase,HAT)及组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylase,HDAC)的种类,组蛋白乙酰化与去乙酰化与基因表达调控、疾病发生的关系进行了综述。

组蛋白去乙酰酶抑制剂的药理学研究进展

组蛋白的乙酰化调节,参与了基因表达的调控;组蛋白乙酰转移酶和组蛋白去乙酰酶活性共同决定了组蛋白的乙酰化水平。组蛋白去乙酰酶抑制剂可提高组蛋白的乙酰化水平,并对一些非组蛋白成分产生影响,从而调节某些特定基因的表达。综述了组蛋白去乙酰酶抑制剂的药理作用及其临床应用前景。

组蛋白去乙酰化酶在认知功能障碍中的作用

表观遗传学是指在不改变DNA序列的情况下发生的可遗传变异的学科,主要包括DNA甲基化,组蛋白乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化等,其中组蛋白乙酰化是表观遗传学最为常见类型之一.组蛋白乙酰化主要发生组蛋白H3和H4 N-端尾部的赖氨酸残基上,受组蛋白乙酰转移酶（histone acetyltransferases,HATs）和组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylases,HDACs）的调节,其水平高低与基因的转录激活和抑制密切相关.

组蛋白去乙酰化酶抑制剂的研究进展

核小体是真核生物染色质的基本单位，核小体的中部由4种组蛋白（H2A，H2B，H3，H4）各两分子形成八聚体，周围围绕DNA，尾部为组蛋白H1。核小体表面修饰与基因表达调控联系密切。组蛋白乙酰化是其中一种重要的共价修饰，通过招募染色体构型重建复合体引起染色体构型发生改变。染色体构型改变使高度螺旋的染色质变得相对松弛，便于转录因子与DNA结合。使组蛋白乙酰化的主要是组蛋白乙酰转移酶（histone acetyltransferase，HAT）和组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitors，HDACI）。

新结构组蛋白去乙酰化酶抑制剂筛选及抗肿瘤活性初步观察

组蛋白的乙酰化调节是基因表达调控的一种重要机制，它参与了机体病理、生理水平的多方面调节。组蛋白乙酰转移酶和组蛋白去乙酰化酶活性共同决定了组蛋白的乙酰化水平。组蛋白去乙酰化酶抑制剂可以提高组蛋白的乙酰化水平，从而调节某些特定基因的表达。我们建立了非同位素法高通量筛选组蛋白去乙酰化酶抑制剂的模型，筛选了约二百种化合物，发现三种能够抑制组蛋白去乙酰化酶的化合物。实验证明，它们能在细胞水平促进组蛋白的乙酰化，并对体外培养的多种肿瘤细胞具有明显的杀伤作用。初步体内实验表明，化合物H9能抑制小鼠体内肿瘤的发生、发展。新结构的组蛋白去乙酰化酶抑制剂可能具有新型抗肿瘤药物的应用前景。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂抗炎机制的研究进展

组蛋白乙酰转移酶（HATs）和组蛋白去乙酰化酶（HDACs）通过对组蛋白氮端氨基酸残基进行乙酰化或去乙酰化,调节组蛋白的乙酰化水平,进而调控基因表达,对维持细胞正常功能有重要作用。组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACIs）是一类在转录水平调控基因表达的化合物,通过诱导组蛋白过乙酰化,引起染色体重建、细胞周期停滞、诱导细胞分化和凋亡以及调节转录因子活化和抑制等一系列生物学效应,具有神经保护、抗氧化、脏器保护、抗炎等作用。

组蛋白修饰酶Gcn5和Hda1对高浓发酵中啤酒酵母絮凝性的影响

高浓发酵中酵母的发酵性能常常受到环境因素变化的影响，使酵母性能变差，引起发酵缓慢，影响啤酒风味等。在工业化生产中，酵母FLO和MAL基因会影响酵母的发酵性能，这两个基因的表达受到Setl甲基转移酶的影响，其结果是引起酵母絮凝，而在高浓发酵前期能提高酵母利用麦芽糖的能力。本试验研究了其它组蛋白修饰酶可能具有的功能，比较了多种组蛋白，最终发现高浓发酵中的酵母絮凝是由组蛋白脱乙酰化酶Hdal或组蛋白乙酰转移酶Gcn5缺失所诱发的。Gcn5的缺失还可以改善酵母细胞对高浓度麦芽糖的利用，在高浓发酵条件下，编码沉默信息调控复合物HAD的SIR2基因的缺失不会影响酵母的絮凝。除了Hdal和Gcn5会明显影响酵母的絮凝外，本研究还发现在所有组蛋白修饰酶中，COMPASS在FLO基因的沉默调节方面的作用是最为重要的。

乙酰转移酶MYST家族的生物学功能

组蛋白乙酰化是表观遗传修饰的重要方式,主要受到组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferases,HATs)和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDACs)催化.MYST是人类HATs的4大家族之一,包括MOF(males absent on the first),TIP60(tat interacting protein 60 kD),结合ORC1的组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferase binding to ORC1,HBO1),单核细胞白血病锌指蛋白(monocytic leukemia zinc finger protein,MOZ)和MOZ相关蛋白(MOZ related factor,MORF)等,均具有典型的MYST结构域.MYST介导的乙酰化是重要的翻译后修饰,其催化底物包括组蛋白和非组蛋白,如组蛋白H3,H4,H2A,H2A突变体,以及许多参与DNA代谢、细胞增殖和发育调控的蛋白因子.MYST蛋白家族参与许多细胞的生理过程,本文主要综述其在调节基因转录、DNA损伤修复和肿瘤发生发展等方面的生物学功能.

巨噬细胞及组蛋白乙酰化对其极化的调控

巨噬细胞是极具异质性及多能性的免疫细胞,可响应不同环境信号而极化为对组织稳态或宿主防御具有特定功能的表型。经典活化的巨噬细胞和替代活化的巨噬细胞是巨噬细胞极化后的两类主要亚群。表观遗传修饰可通过调控基因表达对巨噬细胞极化发挥调节作用,组蛋白乙酰化是其修饰机制中最常见的类型之一,本文就组蛋白乙酰化调控巨噬细胞极化的研究进展作一综述。

基因HAT1在小麦生理型雄性不育系中的表达分析

组蛋白乙酰转移酶(HAT)在生物生殖发育中对染色体的结构修饰和基因的表达调控发挥着重要作用。为探讨组蛋白乙酰化与小麦生理型雄性不育的关系,利用实时荧光定量技术,分析了化学杀雄剂SQ-1诱导的生理型雄性不育小麦花药各发育时期组蛋白乙酰转移酶基因HAT1的表达水平。结果表明,与同期可育花药相比,生理型雄性不育小麦花药的HAT1基因表达水平在单核期显著升高,二核期变化趋势基本相同,三核期显著降低。DNA Ladder显示,不育花药在单核期出现明显的DNA片段化,比正常花药提前凋亡。这表明SQ-1诱导的小麦生理型雄性不育可能与HAT1基因表达异常和花药细胞提前凋亡有关。

脑室注射Aβ_(1-40)对海马MAO-B、ChAT、TH基因表达的影响

目的 研究脑室注射Aβ1-4 0 对海马单胺氧化酶B(MAO B)、胆碱乙酰转移酶 (ChAT)、酪氨酸羟化酶 (TH)基因表达的影响。方法 利用立体定向仪将Aβ1-4 0 注射脑室 ,建立大鼠阿尔采海默病 (AD)模型 ,采用逆转录PCR技术研究MAO -B、ChAT、TH在海马的差异表达。结果 通过莫氏水迷宫实验及胆碱乙酰转移酶的基因表达验证AD模型成功 ,MAO B、ChAT、TH的RT PCR结果表明该基因片段在AD鼠海马低表达。结论 MAO B、ChAT、TH低表达 ,使神经递质Ach、DA合成减少 。