蛋白酶体抑制剂协同组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导T细胞淋巴瘤凋亡及其与蛋白聚集体关系的研究

本研究探讨蛋白酶体抑制剂硼替唑米(bortezomib)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对T淋巴瘤细胞株Jurkat和Hut78的协同诱导凋亡作用,以及两药联合对蛋白聚集体形成的影响。硼替唑米(10nmol/L)单药或硼替唑米(10nmol/L)联合SAHA(2μmol/L)处理Jurkat和Hut78细胞,应用台盼蓝拒染法计数细胞生长抑制率;细胞涂片观察细胞形态学改变;流式细胞术检测细胞凋亡变化;透射电子显微镜观察细胞凋亡和聚集体形成的超微结构特征。研究结果表明,与对照组和单用硼替唑米组比较,两药合用能够显著抑制Jurkat和Hut78细胞生长,促进细胞凋亡。流式结果显示,两药合用组的Jurkat和Hub78细胞凋亡细胞比例分别为(41.8±4.7)%和(72.7±11.7)%,显著高于对照组[(3.6±1.3)%和(7.0±1.9)%]和单用硼替唑米组[(6.3±2.3)%和(18.7±9.2)%](p均<0.01)。超微结构显示,单用硼替唑米组细胞内多为典型的聚集体结构,两药合用组细胞内聚集体密度降低,数量减少甚至消失,且凋亡细胞明显增多。结论:蛋白酶体抑制剂联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂能有效诱导T淋巴瘤细胞凋亡,两药具有协同作用。硼替唑米促进聚集体形成,SAHA能破坏聚集体结构,是增强硼替唑米促凋亡效应的可能机制之一。

辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对乳腺癌细胞增殖影响的动物实验研究

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对乳腺癌细胞株增殖周期的影响。方法饲养Balb/c-nu/nu雌性裸鼠,细胞悬液皮下注射法构建人乳腺癌细胞株MCF-7裸鼠移植瘤模型,随机分为6组,经尾静脉注射不同剂量的SAHA,获取血细胞分析、血脂、肝功能、肾功能、裸鼠体重、瘤重等数据,计算肿瘤生长抑制率、移植瘤的体积,进行统计分析。结果不同剂量的SAHA作用于乳腺癌荷瘤裸鼠后,通过比较肿瘤体积及抑瘤率均显示出疗效,在0.10~0.42 mg/kg剂量范围内,SAHA的治疗效应呈现剂量依赖关系;其作用后导致血清胆红素和谷丙转氨酶水平升高,对红细胞、白细胞及血小板计数、尿素氮、肌酐水平影响不明显。结论 SAHA是乳腺癌细胞增殖抑制剂,其抑制效应有一定的量效关系;其对机体副作用较小。

辛二酰苯胺氧肟酸对血管生成的抑制作用及其机制

目的研究辛二酰苯胺氧肟酸(SAHA)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生物学特性的影响及对血管生成的作用。方法 CCK-8法检测SAHA对HUVEC增殖能力的影响。TranswellTM小室法、基质胶体外成管实验、Western blot法、基质胶体内血管生成实验分别观察15μmol/L SAHA处理HUVEC 48 h后HUVEC迁移能力的变化;HUVEC在基质胶上形成管腔样结构的能力;HUVEC细胞中血管内皮生长因子(VEGF)信号通路相关蛋白表达的变化以及小鼠体内基质胶栓中新生血管的数量。结果 SAHA能够抑制HUVEC的增殖,抑制作用呈剂量、时间依赖性;与对照组相比较,SAHA处理组迁移过膜的HUVEC细胞数明显降低;HUVEC形成的管腔样结构SAHA处理组明显少于对照组;SAHA抑制HUVEC中VEGF相关信号通路;SAHA处理后小鼠体内的基质胶栓中新生的血管数明显少于对照组。结论 SAHA能够抑制HUVEC增殖及体内外血管形成能力,并且其可能机制是SAHA阻断了VEGF相关的信号通路。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对慢性社交挫败应激小鼠恐惧记忆消退的影响及作用机制

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylases inhibitor)辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对慢性社交挫败应激模型(social defeat,SD)小鼠恐惧记忆消退的影响及作用机制。方法雄性C57BL/6J小鼠(7~8周龄)56只,随机分成7组(每组n=8),分为两步:对照组、对照-SAHA组、社交挫败组、社交挫败-SAHA组,验证SAHA对恐惧记忆消退的作用;以及社交挫败组、社交挫败-空载病毒组、社交挫败-BDNF病毒组,验证BDNF对恐惧记忆消退的影响,通过条件性恐惧记忆实验(fear conditioning test,FC)测定小鼠恐惧记忆消退,免疫印迹法(western blot,WB)测定小鼠海马HDAC2及BDNF的表达水平,免疫荧光法检测小鼠海马病毒过表达BDNF情况。结果(1)社交挫败组小鼠与对照组相比恐惧记忆消退情况明显受损(P<0.05),小鼠海马HDAC2表达水平明显升高(0.50±0.02),BDNF表达水平明显降低(0.16±0.03);(2)应用SAHA后,小鼠恐惧记忆消退明显改善(P<0.05);与对照组相比腹腔注射SAHA的对照-SAHA组小鼠海马HDAC2水平(0.26±0.02)显著降低(P<0.001),BDNF水平(0.40±0.03)明显升高(P<0.001);与社交挫败组腹腔注射SAHA的社交挫败-SAHA组小鼠HDAC2水平(0.39±0.03)显著降低(P<0.001),BDNF水平(0.28±0.01)明显升高(P<0.001);(3)海马过表达BDNF病毒后,小鼠恐惧记忆消退明显改善(P<0.05)。结论SAHA可以改善慢性应激社交挫败小鼠恐惧记忆消退,其机制可能与抑制海马HDAC2,从而上调海马BDNF表达有关。

三氧化二砷与传统及新型药物协同抑制皮肤T细胞淋巴瘤细胞系增殖

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)与传统药物地塞米松(Dexamethasone,DXM)、依托泊苷(Etoposide,VP-16)、甲氨蝶呤(Methotrexate,MTX)和新型药物硼替佐米(Bortezomib,BTZ)、组蛋白去乙酰化酶抑制剂-辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilidehydroxamic acid,SAHA)联合对人皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)细胞系Hut-78、Hut-102细胞的增殖抑制作用。方法:不同浓度的As2O3单药或与DXM/VP-16/MTX/BTZ/SAHA联合作用于Hut-78、Hut-102细胞48 h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,应用联合指数分析两药是否具有协同效应。结果:As2O3、DXM、VP-16、MTX、BTZ、SAHA单药对Hut-78、Hut-102细胞的增殖均具有显著的抑制作用,呈剂量依赖性,培养48h的半数抑制浓度分别为5μmol/L、500μg/L、2.5μg/L、1μg/L、10μmol/L、2.5μmol/L。As2O3与DXM/VP-16/MTX/BTZ/SAHA联合时具有协同效应,抗肿瘤作用更为显著。结论:As2O3单药及其与DXM/VP-16/MTX/BTZ/SAHA联合在体外可有效抑制CTCL细胞增殖。As2O3是一种很有前景的治疗CTCL的药物,As2O3与DXM/VP-16/MTX/BTZ/SAHA等传统或新型药物联合可为CTCL临床的治疗提供实验依据。

辛二酰苯胺氧肟酸对人脐静脉内皮细胞增殖及血管形成的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(Histone deacetylases inhibitor,HDACi)辛二酰苯胺氧肟酸(Suberoy-lanilide hydroxamic acid,SAHA)对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)增殖及血管形成能力的影响。方法收集处于对数生长期的HUVEC,以不同浓度的SAHA分别处理24和48 h,另设不加SAHA的对照组,采用CCK-8法检测细胞的增殖活力,并计算增殖抑制率和半数抑制浓度(IC50)。采用流式细胞术检测经15μmol/L SAHA处理48 h的HUVEC凋亡和细胞周期,基质胶体外血管生成试验检测HUVEC的体外成管能力,Western blot法检测HUVEC细胞周期及凋亡相关蛋白的表达水平。结果随着SAHA浓度的增加及作用时间的延长,其对HUVEC增殖的抑制作用增强,SAHA浓度高于80μmol/L时,抑制率增加不明显,24和48 h的IC50值分别为60.53和30.49μmol/L;经15μmol/L SAHA处理48 h,与对照组相比,HUVEC的凋亡率明显增加(P<0.001),S期细胞比例明显升高(P<0.001),G0/G1期比例明显降低(P<0.001),体外成管能力明显下降,P21、caspase-3激活型、caspase-9酶原和激活型蛋白的表达水平均明显升高(P<0.001)。结论 SAHA能够抑制HUVEC增殖及体外血管形成能力,并使P21、caspase-3和caspase-9蛋白水平上调,为肿瘤的治疗提供了一种新的思路。

SAHA处理对猪手工克隆胚胎体外发育潜能的影响

为了探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸（SAHA）对德保猪手工克隆胚胎（HMC）发育潜能的影响,试验摸索SAHA的适宜处理浓度[0（对照）,1.0,2.5,5.0,7.5,10.0μmol/L]和时间（0,6,12,24 h）;之后分为4组,SAHA组、体外受精（IVF）组、孤雌激活（PA）组、对照（HMCC）组,分别在体外发育的1细胞期、2细胞期、4细胞期、囊胚期收集胚胎,在相同时期下比较各组胚胎组蛋白H4K8乙酰化（Ac H4K8）水平差异和相关基因（HDAC1、HAT1、ASF1A、OCT-4）相对表达量。结果表明：7.5μmol/L SAHA处理囊胚率显著高于对照（P〈0.05）,12 h囊胚率显著高于0 h（P〈0.05）;所以适宜处理浓度为7.5μmol/L,适宜处理时间为12 h。在1细胞期、2细胞期、囊胚期,SAHA组Ac H4K8水平接近IVF组水平（P〉0.05）。在囊胚期,SAHA组HDAC1基因相对表达量接近IVF组（P〉0.05）;在囊胚期,SAHA组OCT-4基因相对表达量接近IVF组（P〉0.05）。说明SAHA可以使HMC胚胎Ac H4K8水平接近IVF水平,并纠正克隆胚胎乙酰化的异常,从而提高克隆胚胎发育潜能。

SAHA与妇科恶性肿瘤关系的研究进展

妇科恶性肿瘤是严重危害女性健康的疾病,目前非手术药物治疗主要为化疗,虽然有一定效果,但是传统的化疗药物存在普遍的耐药现象和严重的不良反应。妇科恶性肿瘤有效低毒的治疗新策略亟待探索。研究发现,组蛋白去乙酰化高表达与肿瘤发生密切相关,组蛋白去乙酰化酶抑制剂成为研发抗肿瘤新辅助治疗的热点。辛二酰苯胺异羟肟酸作为第一个被批准应用于临床的组蛋白去乙酰化酶抑制剂,受到越来越多的关注。