组蛋白去乙酰化酶2在帕金森病中的作用及机制研究

目的旨在探究组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)通过类甲基化转移酶3(METTL3)/细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)轴调控帕金森病(PD)中神经元死亡的作用机制。方法SH-SY5Y细胞分组:Control组、MPP^(+)组、MPP^(+)+HDAC2抑制剂组、MPP^(+)+HDAC2抑制剂+sh-NC组、MPP^(+)+HDAC2抑制剂+sh-METTL3组。观察各组细胞在细胞死亡、细胞活性、HDAC2、METTL3、SOCS3、组蛋白H3赖氨酸18乳酸化(H3K18la)方面的差异。比较oe-NC组及oe-METTL两组SOCS3的m6A修饰水平、METTL3在SOCS3上的富集程度、METTL3表达、SOCS3表达、SOCS3 mRNA稳定性。结果MPP^(+)组与Control组相比,HDAC2基因和蛋白相对表达量升高(P<0.05),细胞死亡率升高(P<0.05),细胞活性及H3K18la在METTL3上的富集程度降低(P<0.05),METTL3、H3K18la、SOCS3均下调(P<0.05)。MPP^(+)+HDAC2抑制剂组与MPP^(+)组相比,细胞死亡率降低(P<0.05),细胞活性及H3K18la在METTL3上的富集程度升高(P<0.05),METTL3、H3K18la、SOCS3上调(P<0.05)。MPP^(+)+HDAC2抑制剂+sh-NC组与MPP^(+)+HDAC2抑制剂组在细胞死亡率、细胞活性、METTL3表达、SOCS3表达上无差异(P>0.05)。MPP^(+)+HDAC2抑制剂+sh-METTL3组与MPP^(+)+HDAC2抑制剂+sh-NC组相比,细胞死亡率升高(P<0.05),细胞活性降低(P<0.05),METTL3及SOCS3表达下调(P<0.05)。Oe-METTL3与oe-NC组比较,SOCS3的m6A修饰水平及METTL3在SOCS3上的富集程度升高(P<0.05),METTL3及SOCS3升高(P<0.05),SOCS3 mRNA稳定性升高(P<0.05)。结论在PD中HDAC2通过诱导METTL3组蛋白去乳酸化抑制METTL3表达,这一机制引起SOCS3的m6A修饰水平降低,并导致SOCS3表达下调,进而促进PD发病。

组蛋白去乙酰化酶CfSnt2调控果生刺盘孢生长发育和致病力

炭疽病是油茶Camellia oleifera的重要病害,该病害的优势致病菌是刺盘孢属Colletotrichum的果生刺盘孢C.fructicola,在全国的油茶产区普遍发生。我们前期发现组蛋白乙酰转移酶CfGcn5调控油茶果生刺盘孢的生长发育和致病过程,但组蛋白去乙酰化酶在该病菌中的生物学功能尚不清楚。本研究以组蛋白去乙酰化酶CfSnt2为研究对象,利用反向遗传学的方法,通过对野生型、CfSNT2基因敲除突变体及互补菌株的生物学表型进行比较分析,发现CfSNT2基因敲除突变体的菌丝生长速率明显减缓、分生孢子的产量显著减少、附着胞形成率降低、对细胞壁胁迫剂的响应异常,同时对油茶致病力显著减弱。以上现象说明CfSnt2调控果生刺盘孢的生长、产孢、附着胞的形成、对细胞壁完整性胁迫剂的耐受性及致病力。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂ACY1215通过调控能量代谢酶保护脂多糖/D-氨基半乳糖诱导的急性肝衰竭小鼠机制研究

目的探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂ACY1215对急性肝衰竭(ALF)小鼠的保护作用及其可能的作用机制。方法将30只小鼠随机分为对照组、模型组和ACY1215处理组,采用脂多糖和D-氨基半乳糖联合腹腔注射诱导小鼠ALF模型,常规行血生化和组织病理学检查,采用Western blot法检测肝组织苹果酸脱氢酶1(MDH1)、异柠檬酸脱氢酶(IDH1)和果糖-2,6-二磷酸酶2(PFKFB2)及白介素-1β(IL-1β)和IL-18分子蛋白的表达。结果肝组织病理学检查显示,ALF模型制备成功,而ACY1215干预组肝组织病理学损害显著减轻;模型组血清ALT、AST和TBIL水平分别为(3743.5±655.9)U/L、(2539.4±488.1)U/L和(89.56±7.2)μmol/L,显著高于对照组【分别为(34.5±7.6)U/L、(32.3±9.3)U/L和(6.2±2.4)μmol/L,P<0.05】,而ACY1215处理组各项指标均显著降低【分别为(951.5±328.9)U/L、(475.3±131.24)U/L和(38.41±9.5)μmol/L,P<0.05】;模型组小鼠肝组织MDH1和IDH1表达较对照组显著减弱,PFKFB2、IL-18和IL-1β表达较对照组显著增强,而ACY1215干预组肝组织MDH1和IDH1表达较模型组显著增强,而PFKFB2、IL-18和IL-1β表达较模型组显著减弱。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂ACY1215可以通过对能量代谢酶的调节发挥保护ALF小鼠的作用。

香烟烟雾提取物通过氧化应激下调组蛋白去乙酰化酶2诱导小鼠骨骼肌细胞早衰

目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)是否通过氧化应激减少抗衰老分子组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)的表达而诱导骨骼肌细胞早衰。方法诱导C2C12成肌细胞分化成骨骼肌细胞,观察CSE处理对骨骼肌细胞氧化应激、衰老和HDAC2表达的影响,应用氧化剂H2O2和抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)为工具药,检测细胞中丙二醛(MDA)含量、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的变化,应用β半乳糖苷酶染色检测衰老细胞百分率,采用实时荧光定量PCR检测HDAC2 mRNA水平,Western blot法检测HDAC2蛋白水平。结果与对照组相比,CSE和H2O2可增加小鼠骨骼肌细胞MDA含量和ROS水平,而降低SOD、GSH-Px的活性,同时伴有β半乳糖苷酶的水平增加和抗衰老分子HDAC2 mRNA和蛋白水平的降低。NAC预处理后,可降低CSE诱导的MDA含量和ROS活性,提高SOD、GSH-Px的活性,同时β半乳糖苷酶表达降低,HDAC2的水平升高。结论 CSE可能是通过氧化应激降低HDAC2诱导小鼠骨骼肌细胞早衰。

红霉素上调组蛋白去乙酰化酶2表达减轻氧化应激下THP-1细胞的糖皮质激素抵抗

目的探讨红霉素(EM)对氧化应激下人THP-1单核细胞糖皮质激素抵抗的作用及机制。方法 EM预孵育THP-1细胞后予烟草烟雾提取物(CSE)刺激细胞,用质粒脂质体法将构建好的组蛋白去乙酰化酶2沉默RNA(HDAC2-siRNA)转染细胞,ELISA检测细胞培养上清白细胞介素8(IL-8)的含量,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分析HDAC2表达情况。结果 EM组的IL-8抑制率明显高于CSE组,而低于对照组(P<0.05),EM组地塞米松半数抑制浓度(IC50-Dex)低于CSE组,而高于对照组(P<0.05)。EM组HDAC2蛋白的表达高于CSE组,而低于对照组(P<0.05)。除此之外,应用HDAC2-siRNA转染细胞后HDAC2 mRNA及HDAC2蛋白的表达均明显低于对照组及空转组,而加用EM后其表达明显升高(P<0.05)。结论 CSE刺激下的THP-1细胞对地塞米松的敏感性明显降低,EM可通过上调HDAC2蛋白的表达减轻氧化应激下THP-1细胞的糖皮质激素抵抗。

组蛋白去乙酰化酶1、2在大肠癌及腺瘤组织中的表达及其与临床病理的关系

目的:研究组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)和组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)在大肠正常组织、腺瘤、腺癌组织中的表达,探讨其可能的临床病理及预后的关系.方法:以免疫组织化学SP法检测HDAC1和HDAC2在正常大肠组织、腺瘤、腺癌组织中的表达.通过计算染色指数(SI),评估两者的表达水平与年龄、肿瘤大小、分期、分化等临床病理特征之间的关系.采用Kaplan-Meier法进行生存分析.结果:HDAC1和HDAC2在正常组织表达明显低于腺瘤及癌组织(14.3±9.3vs22.4±12.4,22.8±8.5;5.6±3.3,12.3±4.2vs16.2±9.7,均P<0.05).HDAC2在三者中的表达呈递增趋势.直径≥5cm的癌组织HDAC1的表达高于<5cm的癌组织(25.1±8.2vs20.4±8.5),差异均有统计学意义.结论:HDAC1和HDAC2是大肠癌发生的早期事件,两者共同促进大肠癌的发生发展,可能成为大肠癌治疗的新靶点.

血清组蛋白去乙酰化酶2、叉头框蛋白A1在子痫前期诊断及妊娠结局评估中的价值

目的探究血清组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)、叉头框蛋白A1(FOXA1)表达在子痫前期(PE)诊断、严重程度及妊娠结局评估中的价值。方法以分娩的150例PE孕妇(PE组)和100例健康孕妇(对照组)为研究对象,将PE组分为轻度PE(MPE组,n=81),重度PE(SPE组,n=69)。比较不同组别孕妇血清HDAC2、FOXA1水平,然后根据其HDAC2、FDXA1水平把PE孕妇分为HDAC2高表达组(n=72)和HDAC2低表达组(n=78),FOXA1高表达组(n=74)和FOXA1低表达组(n=76)。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清HDAC2、FOXA1对PE及不良妊娠结局的预测效能。Spearman相关性分析HDAC2、FOXA1与PE病情的关系。结果PE组血清HDAC2、FOXA1水平均明显低于对照组(P<0.05)。血清HDAC2、FOXA1及联合诊断PE的ROC曲线下面积(AUC)为0.863、0.843、0.912。MPE组血清HDAC2、FOXA1水平明显高于SPE组(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,HDAC2、FOXA1均与PE严重程度呈负相关(r=-0.667、-0.712,均P=0.000)。对照组血清HDAC2、FOXA1水平明显高于PE组(P<0.05)。HDAC2低表达组早产儿、肝脏损害、新生儿窒息比例高于HDAC2高表达组(P<0.05)。FOXA1高表达组肝脏损害、早产儿、胸腹腔积液、新生儿窒息比例低于FOXA1低表达组(P<0.05)。血清HDAC2、FOXA1及联合预测PE孕妇不良妊娠结局的AUC为0.788、0.799、0.885。结论PE孕妇血清HDAC2、FOXA1水平与PE病情具有明显负相关性,低水平HDAC2、FOXA1的PE患者不良妊娠结局风险较高,临床可监测HDAC2、FOXA1来辅助诊断PE及预测妊娠结局。

垂体同源盒2和组蛋白去乙酰化酶9基因多态性与缺血性脑卒中MRI表现的关系

目的探讨垂体同源盒2(PITX2)基因位点rs6843082、rs2200733和组蛋白去乙酰化酶9(HADC9)基因位点rs2107595多态性与缺血性脑卒中MRI影像学表现的关系。方法收集631例缺血性脑卒中患者的头颅MRI影像资料,包括病灶部位、数目、大小及对周围组织的影响。采用Sequenom基因分型技术检测所有患者外周血基因位点rs6843082、rs2200733和rs2107595的基因分型,并运用PLINK软件分析基因多态性位点(加性模型、显性模型、隐性模型、等位基因模型)与MRI表现的关联性。结果 rs6843082的加性模型、显性模型、等位基因模型与缺血性脑卒中发生在枕叶均有关联(P<0.05);rs2200733的隐性模型与缺血性脑卒中发生在枕叶、显性模型与缺血性脑卒中发生在颞叶均有关联(P<0.05);rs2107595的显性模型与缺血性脑卒中发生在丘脑及顶叶、隐性模型与缺血性脑卒中发生枕叶在均有关联(P<0.05)。3个基因位点多态性与病灶数目、病灶大小以及病灶对周围组织的影响均无关联(P>0.05)。结论 PITX2和HADC9基因多态性可能与缺血性脑卒中的MRI病灶部位相关。

水稻组蛋白脱乙酰化酶SIR2的功能注释分析

依赖于NAD+的组蛋白脱乙酰化酶SIR2对酵母和哺乳动物细胞的存活、衰老、凋亡等生理活动的调节起着重要的作用。利用生物信息学方法对SIR2在水稻中的生物学功能进行研究。结果表明,SRT701和SRT702分别位于第4条和第12条染色体上;它们编码的蛋白均含有N-糖基化、蛋白激酶C磷酸化、酪蛋白激酶II磷酸化和豆蔻酰化4个相同的位点;SRT701主要位于细胞核,而SRT702主要位于内质网,它们均有跨膜区,且为疏水性蛋白质,都无信号肽;多序列比对发现植物SIR2家族的SIR2结构域高度保守;电子表达谱分析发现SRT701主要表达于叶片和花序,SRT702表达于整个植物中。利用RT-PCR方法进行检测的结果表明,SRT701在水稻根、茎、叶中均有表达,而SRT702只在叶、茎中有表达,根中没有表达,说明利用生物信息学方法所得的结果只能作为初步预测。水稻SRT701和SRT702器官特异性的表达模式表明它们可能在组织或器官形成中起着重要作用。

克拉霉素对激素反应性通路中组蛋白去乙酰化酶2及糖皮质激素受体的影响

目的观察克拉霉素对激素反应性通路中组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)及糖皮质激素受体(GR)的影响,探讨克拉霉素对烟雾暴露哮喘小鼠可能的治疗作用。方法选择BALB/c小鼠作为研究对象,通过卵蛋白致敏激发建立哮喘模型组(OVA组)、烟雾暴露哮喘组(SEA组)以及哮喘接触烟雾暴露后通过克拉霉素治疗组(CAM组),同时设立对照组平行比较。采用组织病理学检测各组小鼠肺组织炎症情况,并通过PCR检测肺组织中HDAC2mRNA的表达情况和Western blot检测肺组织中HDAC2和GR蛋白的表达。结果组织病理学观察OVA组和SEA组均存在肺组织气道炎症,其中SEA组纤毛被严重破坏,而CAM组炎症细胞浸润减弱。与CAM组相比,SEA组小鼠支气管肺泡灌洗液中IL-4和IL-8水平均显著提高(104.36±14.39 vs.65.49±10.82、681.35±66.18 vs.321.49±90.37,P=0.031、0.017)。CAM组HDAC2mRNA表达显著高于SEA组(0.062±0.013 vs.0.031±0.015,P=0.032)。Western blot检测结果显示,与CAM组相比,SEA组HDAC2蛋白(0.23±0.017 vs.0.49±0.022,P=0.033)和GR蛋白(0.19±0.014 vs.0.64±0.023,P=0.011)表达均显著降低。结论克拉霉素能抑制烟雾暴露的哮喘小鼠气道炎症反应,作用机制可能通过与GR相结合,影响下游HDAC2基因表达有关。

组蛋白去乙酰化酶2的表达在烟草烟雾暴露后哮喘大鼠气道Th1/Th2平衡中的作用研究

目的通过研究烟草烟雾暴露对哮喘大鼠气道组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)2以及血浆、支气管肺泡灌洗液(BALF)中干扰素(interferon,IFN)-γ、白细胞介素(interleukin,IL)-4表达的影响,探讨HDAC2在辅助性T淋巴细胞(T helper cell)Th1/Th2平衡中的作用。方法 50只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、哮喘组、烟雾暴露+哮喘组、布地奈德+哮喘组、布地奈德+烟雾暴露+哮喘组,建立哮喘大鼠模型、哮喘大鼠烟雾暴露模型以及布地奈德干预模型。免疫组织化学法检测各组大鼠气道HDAC2蛋白的表达,酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血浆和BALF中Th1型特征性细胞因子IFN-γ以及Th2型特征性细胞因子IL-4水平。结果与对照组相比,烟雾暴露+哮喘组、哮喘组大鼠气道HDAC2蛋白表达降低,与哮喘组相比,烟雾暴露+哮喘组大鼠气道HDAC2蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与布地奈德+哮喘组相比,布地奈德+烟雾暴露+哮喘组大鼠气道HDAC2蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,哮喘组大鼠和烟雾暴露+哮喘组大鼠血浆、BALF中IFN-γ表达减少,IL-4表达增加,差异均有统计学意义(P均<0.01);与哮喘组相比,烟雾暴露+哮喘组大鼠血浆、BALF中IFN-γ表达减少,IL-4表达增加,差异均有统计学意义(P均<0.01);与布地奈德+哮喘组相比,布地奈德+烟雾暴露+哮喘组大鼠血浆、BALF中IFN-γ表达减少,IL-4表达增加,差异均有统计学意义(P均<0.01);肺组织HDAC2蛋白的表达与血浆中IFN-γ表达呈正相关(r=0.533,P<0.01),与IL-4表达呈负相关(r=-0.642,P<0.01)。结论烟草烟雾暴露可以下调哮喘大鼠模型肺组织HDAC2蛋白的表达,从而影响气道炎症,IFN-γ、IL-4的表达以及布地奈德的治疗效果,这可能是烟草烟雾恶化哮喘气道Th 1/Th2平衡的一个免疫学机制。

克拉霉素对烟雾暴露哮喘小鼠肺组织中组蛋白去乙酰化酶2及糖皮质激素受体α表达的影响

目的探讨克拉霉素对烟雾暴露哮喘小鼠肺组织中组蛋白去乙酰化酶2及糖皮质激素受体α表达的影响。方法将40只SPF级BALB/c雌性小鼠按随机数字表法随机分为对照组(Control group),哮喘组(OVA group),哮喘+烟雾暴露组(SEA group),哮喘+烟雾暴露+克拉霉素干预组(CAM group),每组10只。通过卵蛋白致敏激发建立哮喘模型,哮喘小鼠烟雾暴露建立烟雾暴露哮喘小鼠,给予烟雾暴露小鼠克拉霉素干预。小鼠肺组织切片HE染色,组织病理学观察不同组小鼠肺组织病理变化及炎症评分(UNNDERWOOD标准);Elisa法检测小鼠支气管肺泡灌洗液中白介素(IL-4)及CXCL8炎症介质的表达水平;采用组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)活性检测试剂盒检测不同组小鼠肺组织中组蛋白去乙酰化酶2活性;Western blot法检测小鼠肺组织组蛋白去乙酰化酶2及糖皮质激素受体α蛋白表达。结果肺组织病理切片示哮喘组及烟雾暴露哮喘组小鼠肺组织炎症显著,克拉霉素干预组小鼠肺组织炎症减轻,病理炎症评分克拉霉素干预组炎症评分(1.833±.0373)低于烟雾暴露哮喘组(4.917±0.187)(P=0.031);克拉霉素干预组小鼠肺组织灌洗液中IL-4(60.78411±11.8858)及CXCL8(313.421±96.5448)低于烟雾暴露哮喘组(P=0.042,P=0.027);与烟雾暴露哮喘组(124.444±16.960)相比,克拉霉素干预组小鼠肺组织中HDAC2(266.889±28.205)活性提高(P=0.035),同时HDAC2及GRα表达升高(P=0.041,P=0.035)。结论克拉霉素可降低烟雾暴露哮喘小鼠肺组织炎症反应,改善小鼠肺组织中组蛋白去乙酰化酶2及糖皮质激素受体α的表达。

水稻组蛋白脱乙酰化酶HD2 HDACs蛋白质的生物信息学分析

HD2 HDACs家族成员是植物特异性的组蛋白脱乙酰化酶并参与基因的转录调控.本研究利用生物信息学方法对水稻组蛋白脱乙酰化酶HD2 HDACs家族成员(HDT701、HDT702、HDT2201和HDT2202)的生物学功能进行研究.结果表明,HD2 HDACs家族成员位于不同的染色体上,分布于细胞的不同部位;它们编码的蛋白均含有依赖于cAMP-和cGMP的蛋白激酶、蛋白激酶C、酪蛋白激酶II与酰胺化4个相同的位点;它们均无跨膜区,都为不稳定的亲水性蛋白质,都无信号肽.多序列比对发现粳稻与籼稻HD2 HDACs的同源性非常高;水稻HD2 HDACs蛋白质的结构域比较特殊;这些蛋白可能参与植物的基因复制、信号传导、转录过程和免疫应答等过程.

急性肝衰竭大鼠肝组织组蛋白去乙酰化酶2的表达

目的观察D-氨基半乳糖盐酸盐诱导急性肝衰竭模型大鼠在丙酮酸乙酯保护下,组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)的表达情况。方法将78只雄性Wistar大鼠随机分成正常组、模型组、EP干预组和EP治疗组。采用免疫组织化学法检测肝组织HDAC2表达;采用ELISA法检测肝组织匀浆HDAC2水平。结果与正常组比,模型组HDAC2的表达量减少(P<0.05),其中造模12h和24h肝组织HDAC2表达的IOD/Area值分别为0.0817±0.0118和0.0726±0.0111,明显低于正常组(0.1125±0.0047,P<0.01);EP干预组和治疗组与模型组间HDAC2的表达无明显差异(P>0.05)。结论 EP虽然对肝脏有保护作用,但不能影响HDAC2的表达。HDAC2的减少在急性肝衰竭的进展过程中,可能发挥重要的作用。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对胶质瘤细胞增殖及E2F1表达的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)对胶质瘤细胞增殖及E2F1表达的影响。方法体外培养胶质瘤细胞U251,用2个E2F1干扰质粒she2f1a和she2f1b转染细胞,空载体BS/U6为对照,噻唑蓝比色法及核染色法检测细胞增殖率;TSA处理U251细胞2 h、4 h、8 h,及多种HDACIs包括曲古菌素A(TSA)TSA、伏立诺他(SAHA)、M344、丁酸钠(NaBu)NaBu、丙戊酸(VPA)、苯甲酰胺(M344)处理细胞8 h,二甲基亚砜(DMSO)处理为对照,蛋白免疫印迹法检测E2F1表达;用TSA处理8、12、24 h,DMSO处理为对照,噻唑蓝比色法分析细胞增殖率;采用多种HDACIs(TSA,SAHA,NaBu,VPA,M344)处理细胞24 h,噻唑蓝比色法分析细胞增殖率。结果与BS/U6比较,2个E2F1干扰质粒she2f1a和she2f1b都能沉默E2F1表达和抑制细胞增殖(P<0.05);与对照组比较,TSA处理细胞2 h和4 h未见抑制E2F1表达,处理8 h能抑制E2F1表达,其它HDACIs均能抑制E2F1表达;与对照组相比,TSA处理8 h未影响细胞增殖率(P>0.05),但TSA处理12 h能抑制细胞增殖(P<0.05),处理24 h抑制效应更强(P<0.05)。而且,其它HDACIs均能抑制细胞增殖(P<0.05)。结论 HDACIs能抑制胶质瘤细胞E2F1表达及其介导的细胞增殖。

组蛋白去乙酰化酶2在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化和原位杂交法检测80例宫颈鳞癌组织及25例正常宫颈黏膜组织中HDAC2蛋白及mRNA的表达情况,并分析其表达与宫颈鳞癌临床病理学特征的关系。结果 HDAC2蛋白在宫颈鳞癌组织中的阳性表达率(65.0%)显著高于正常宫颈黏膜组织(16.0%)(P<0.001)。在TNMⅠ期宫颈鳞癌组织中HDAC2蛋白的阳性表达率(37.8%)显著低于TNMⅡ期者(88.4%)(P<0.001);在有淋巴结转移宫颈鳞癌组织中HDAC2蛋白的阳性表达率(87.1%)显著高于无淋巴结转移者(51.0%)(P=0.001);HDAC2蛋白表达与癌的分化程度无关(P=0.158)。HDAC2 mRNA在宫颈鳞癌组织中的阳性表达率(57.5%)显著高于正常宫颈黏膜组织(8.0%)(P<0.001)。在TNMⅠ期宫颈鳞癌组织中HDAC2 mRNA的阳性表达率(29.7%)显著低于TNMⅡ期者(81.4%)(P<0.001);在有淋巴结转移组中HDAC2 mRNA的阳性表达率(80.6%)显著高于无淋巴结转移者(42.9%)(P=0.001);HDAC2 mRNA表达与癌的分化程度无关(P=0.351)。HDAC2蛋白及mRNA的表达呈正相关关系(r=0.482,P<0.001)。结论 HDAC2的过表达可能与宫颈鳞癌的发生、发展有关,并对判断宫颈鳞癌患者的生物学行为有一定意义。

重组组蛋白去乙酰化酶2-pEGFP-C2质粒的构建及表达

目的将组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)基因克隆入pEGFP-C2载体,探讨构建的质粒转染进非洲绿猴肾成纤维细胞COS-7株相关蛋白和mRNA的表达及蛋白分布部位的情况。方法从人肝癌细胞(HepG2)中获得组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)的cDNA,采用Xho I和BamH I双酶切,用T4连接酶将该cDNA连接pEGFP-C2质粒,将构建成功的pEGFP-C2-HDAC2质粒经PCR、限制性内切酶酶切和测序鉴定后转染非洲绿猴肾成纤维细胞(COS-7),荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,RT-PCR和Western blot鉴定HDAC2的表达。结果双酶切鉴定可见HDAC2质粒片段,转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达,PCR结果可检测到HDAC2 mRNA表达,同时Western blot可检测HDAC2蛋白和GFP蛋白的表达。结论成功构建了重组pEGFP-C2-HDAC2表达质粒,HDAC2蛋白可与绿色荧光蛋白在COS-7细胞中融合表达。

稻瘟病菌组蛋白脱乙酰化酶SIR2 HDACs的功能初探

利用生物信息学方法对稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)组蛋白脱乙酰化酶SIR2家族成员(SRT3001、SRT3002、SRT3003、SRT3004、SRT3005、SRT3006和SRT3007)的生物学功能进行研究。结果表明,SIR2 HDACs家族成员位于不同的染色体上,分布于细胞的不同部位;它们编码的蛋白均含有蛋白激酶C磷酸化、酪蛋白激酶II磷酸化、N-糖基化、N-豆蔻酰化4个相同的位点;它们均无跨膜区,且为亲水蛋白质,都无信号肽。多序列比对发现稻瘟病菌SIR2 HDACs家族结构域高度保守,均含有SIR2结构域;这些蛋白可能参与病原菌的转录调节、能量代谢和染色质沉默等过程。

小鼠组蛋白去乙酰化酶2多肽抗血清的制备

目的利用人工合成小鼠组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)多肽制备特异性抗HDAC2抗血清,用于相关疾病的体内外诊断。方法根据HDAC2基因编码的氨基酸序列合成多肽,与载体偶联后免疫动物,所制备的抗血清用ELISA、Western blot及免疫组织化学方法鉴定。结果 ELISA检测表明所制备的抗血清可同多肽抗原发生阳性反应,效价1∶4 000;Western blot结果显示抗血清可与多肽抗原及APP/PS1转基因小鼠的脑组织发生反应;免疫血清1∶100,1∶200,1∶400,1∶800四个稀释度均能与小鼠脑组织中的HDAC2反应。结论所制备的多肽抗血清可识别组织及血清中的HDAC2,可应用于相关领域的体内外研究。

组蛋白去乙酰化酶4抑制肌细胞增强因子2C介导的肺动脉高压小鼠肺血管重构研究

目的观察经组蛋白去乙酰化酶4抑制剂(HDAC4i)处理后小鼠肺组织中组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)、肌细胞增强因子2C(MEF2C) mRNA及其蛋白表达水平变化,以及小鼠肺血管的病理生理改变,探讨HDAC4是否调节MEF2C介导的肺动脉平滑肌细胞增殖。方法健康雄性BALB/C小鼠32只,随机分为肺动脉高压模型(PAH)组(野百合碱处理)、HDAC4i组(HDAC4i处理)、PAH+HDAC4i组(野百合碱联合HDAC4i处理)及阴性对照组(NC组)4组,每组8只。在第2周、第4周监测4组小鼠肺动脉血流动力学改变、右心室肥厚指数[RV/(LV+S)],采用荧光定量PCR与蛋白质印迹技术检测小鼠肺组织MEF2C mRNA及其蛋白表达水平变化,采用免疫组化检测小鼠肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨桥蛋白(OPN)及HDAC4蛋白表达及定位。结果第2周和第4周,PAH组、PAH+HDAC4i组及HDAC4i组小鼠RV/(LV+S)均明显高于NC组(P<0.01);PAH组、PAH+HDAC4i组及HDAC4i组小鼠右心室收缩压(RVSP)均明显高于NC组(P<0.01)。与NC组比较,第4周PAH组、PAH+HDAC4i组及HDAC4i组MEF2C mRNA及其蛋白表达量均升高,且MEF2C mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化显示:与NC组比较,PAH组、PAH+HDAC4i组及HDAC4i组小鼠肺动脉平滑肌细胞呈现OPN表达水平上升,而α-SMA与HDAC4蛋白表达水平明显下降。结论 HDAC4抑制MEF2C介导的肺动脉高压小鼠肺血管重构。