过表达组蛋白去乙酰基酶11抑制基底样乳腺癌细胞的侵袭和转移（英文）

目的研究组蛋白去乙酰基酶11(HDAC11)在基底样乳腺癌(BLBC)细胞侵袭和转移中的调控作用。方法利用GEO和TCGA数据库分析了HDAC11在BLBC中的表达,并用Transwell实验和裸鼠模型研究HDAC11对BLBC细胞侵袭和转移的影响。使用免疫共沉淀的方法观察HDAC11与Twist蛋白的相互结合,用启动子报告基因和染色体免疫共沉淀的方法鉴定HAS2是否为Twist的靶基因。结果与其他乳腺癌亚型相比,HDAC11在基底样乳腺癌中的表达较低。在BLBC细胞中过表达HDAC11可以强烈抑制BLBC细胞的体外迁移、侵袭和在裸鼠体内转移。HDAC11识别并占据Twist蛋白的DNA结合域,对抗其促侵袭的功能,并抑制Twist诱导的HAS2基因转录。结论 HDAC11过表达可抑制BLBC细胞的侵袭和转移。

人组蛋白α-氨基乙酰基转移酶Nat11表达纯化、晶体生长及底物结合研究

α-氨基乙酰基转移酶11(Nat11)催化组蛋白H4和H2A氨基端乙酰化修饰,发挥着重要的表观遗传调控功能。将人Nat11基因构建到原核表达载体p SUMO中,转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行重组表达。通过镍柱亲和层析等一系列体外纯化步骤,获得高纯度Nat11。利用等温滴定量热法(ITC),测得Nat11与底物多肽微摩尔量级结合常数。利用质谱技术,发现纯化后的Nat11结合有大肠杆菌内源产生的乙酰辅酶A或辅酶A,在ITC滴定过程中可以产生对多肽底物的乙酰化修饰,表明纯化获得的Nat11在溶液中具有酶活力。随后,对Nat11进行晶体生长研究,通过初筛优化获得蛋白截短体及底物-酶融合蛋白单晶。

植物组蛋白乙酰基转移酶的研究进展

组蛋白乙酰化是一个动态的、可逆的过程,包括组蛋白乙酰化和去乙酰化两个过程。组蛋白乙酰基转移酶催化组蛋白乙酰化,与组蛋白去乙酰化酶共同作用来调节组蛋白乙酰化状态。组蛋白乙酰化状态影响染色质的结构,进而影响基因的转录,在植物的生长、发育和胁迫反应过程中具有十分重要的调节作用。对组蛋白乙酰基转移酶的细胞内分布、分类、底物特异性以及在发育和胁迫反应中的功能进行了综述。

酵母组蛋白乙酰基转移酶GCN5和去乙酰化酶RPD3在大肠杆菌中的表达

以酵母基因组DNA为模板,通过PCR方法分别扩增出在5′端带有6xHis标签的gcn5和rpd3基因,将其克隆到pBV220质粒中,分别构建成表达质粒pBVgcn5和pBVrpd3,转化大肠杆菌(Escherichiacoli)并进行诱导表达。SDS PAGE显示,含重组质粒的菌株经热诱导后分别过量表达出约50kDa的蛋白。利用6xHis亲和层析纯化了这两种重组酶。对组蛋白乙酰基转移酶GCN5进行体外活性检测,证实其具有组蛋白乙酰基转移酶活性。本工作为通过体外实验研究乙酰化和去乙酰化修饰与基因转录调控的关系奠定了基础。

DNA甲基转移酶1和组蛋白脱乙酰基酶1在胰腺组织中的表达及其临床意义

背景:近年针对DNA甲基化和组蛋白乙酰化修饰的表观遗传学研究是探索胰腺癌发生机制的新热点。目的:研究DNA甲基转移酶1(DNMT1)和组蛋白脱乙酰基酶1(HDAC1)在胰腺上皮内瘤变(PanIN)和胰腺癌组织中的表达,探讨其可能的临床意义。方法:以免疫组化SP法检测DNMT1、HDAC1在10例正常胰腺组织、39例证实含有PanIN的胰腺癌旁组织和54例胰腺导管腺癌(PDAC)组织中的表达。结果:DNMT1和HDAC1在胰腺组织中的阳性表达率均随组织异型程度的增加而逐渐增高,即正常胰腺导管(0%)<PanIN-1A(7.2%±1.2%,10.7%±5.0%)<PanIN-1B(24.5%±9.6%,40.1%±8.0%)<PanIN-2(30.0%±11.9%,51.2%±13.4%)<PanIN-3(46.7%±11.2%,73.1%±11.3%)<PDAC(56.7%±27.5%,82.5%±19.4%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:DNMT1和HDAC1表达增强是胰腺癌发生的早期事件,两者共同促进了胰腺癌的进展,可能成为胰腺癌早期诊疗的新靶点。

哮喘大鼠肺T细胞中组蛋白去乙酰基酶1的表达及对组蛋白修饰的影响

目的明确哮喘大鼠肺T淋巴细胞中的组蛋白去乙酰基酶1(HDAC1)蛋白表达水平及组蛋白整体乙酰化和甲基化水平,探讨其在哮喘发病机制中的作用。方法 16只Wistar大鼠随机分为对照组和哮喘组(每组8只),用卵白蛋白(OVA)致敏并激发建立哮喘大鼠模型。通过哮喘临床表现、气道高反应性测定、肺组织HE染色、血清和BALF中细胞因子IL-4、γ干扰素(IFN-γ)及IgEELISA测定,判断哮喘大鼠模型是否成功。分离肺T细胞并进行纯度鉴定。Western blot检测肺T细胞HDAC1蛋白表达水平,组蛋白H3、H4整体乙酰化,以及H3k9整体二甲基化水平。结果与对照组比较,哮喘组HDAC1蛋白表达水平低于对照组(P<0.05),组蛋白H3、H4整体乙酰化水平和H3k9整体二甲基化水平差异均无统计学意义。结论肺T细胞HDAC1可能参与了支气管哮喘的发病环节,组蛋白整体乙酰化和甲基化水平与哮喘发病无明显相关性,HDAC1对组蛋白修饰作用可能是一个基因转录特异性事件。

组蛋白脱乙酰基酶2在大鼠心肌肥大中的作用

目的研究组蛋白脱乙酰基酶2(Histonedeacetylase2,HDAC2)在腹主动脉缩窄所致大鼠压力负荷性心肌肥大模型中的作用,丙戊酸钠对心肌肥大发展和HDAC2表达的影响。方法将雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、心肌肥大组和丙戊酸钠治疗组,动物分别于14d和28d处死。检测心脏系数、心肌组织HE染色及β-肌球蛋白重链(β-myosinheavychain,β-MHC)mRNA表达。应用RT-PCR和免疫组化方法检测HDAC2表达。结果治疗组心脏系数和β-MHCmRNA表达水平较肥大组显著下降;肥大组心肌细胞肥大的病理改变较治疗组显著;14d和28d时(×400)HDAC2蛋白质免疫组化染色阳性细胞核平均数,治疗组与肥大组相比分别下降34.18%和36.24%,P<0.05;在mRNA水平上各组间差异无统计学意义,P>0.05。结论HDAC2参与大鼠心肌肥大的发病过程,丙戊酸钠抑制HDAC2蛋白质表达及心肌肥大的发展。

组蛋白乙酰转移酶及脱乙酰基酶的作用及调节机制

组蛋白乙酰转移酶(HAT)及脱乙酰基酶(HDAC)调节组蛋白和转录因子的乙酰化水平,从而在控制细胞生命活动中发挥着重要作用。该文主要从HAT和HDAC的量、酶活性以及利用度的调节三个方面,详细阐述了HAT和HDAC调控的分子机制,并对未来的研究方向提出新的构想。

组蛋白脱乙酰基酶2在血管紧张素Ⅱ致心肌细胞肥大中的表达

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激心肌细胞,造成心肌细胞肥大过程中组蛋白脱乙酰基酶2(histonedeacetylase2,HDAC2)的表达。方法培养原代心肌细胞,AngⅡ刺激心肌细胞造成肥大,在不同时间取细胞进行反转录聚合酶链反应(RT-PCR),观察HDAC2mRNA表达,免疫组化法检测HDAC2蛋白表达,相差镜和电镜下观察细胞形态变化。结果经AngⅡ刺激后,相差镜下可见心肌细胞面积变大;电镜下见细胞内部结构亦发生明显的改变;HDAC2mRNA水平随着AngⅡ刺激时间延长而增高;HDAC2蛋白表达亦增加。结论AngⅡ致心肌细胞肥大过程中伴有HDAC2表达增加,HDAC2有可能参与心肌细胞的肥大机制。

刺参组蛋白脱乙酰基转移酶基因克隆及其在夏眠期间表达特征的研究

刺参(Apostichopus japonicus)利用夏眠的习性来应对夏季的高温胁迫,长期的代谢减退和基因转录抑制是刺参夏眠调控过程中的关键策略。本研究克隆分析了刺参体内关键组蛋白脱乙酰基转移酶(HDACs)的基因全长及结构特征,测定了该家族成员(HDAC1,HDAC3和HDAC4)在夏眠期间的基因表达模式。研究表明:刺参HDAC3和HDAC4与紫海胆(Strongylocehtrotus purpturatus)相关基因的同源性最高,分属HDACs家族的Ⅰ型和Ⅱ型。定量表达分析表明,刺参不同组织中同属Ⅰ型的HDAC1和HDAC3基因在刺参夏眠不同阶段的表达均无显著差异;而属于Ⅱ型的HDAC4基因在深度夏眠阶段表达量显著上调。研究结果表明,II型HDACs在刺参夏眠基因转录抑制中具有潜在的特殊调节作用。

组蛋白脱乙酰基酶4、纤维蛋白原/白蛋白比值在非小细胞肺癌中的诊断及预后价值

目的探讨组蛋白脱乙酰基酶4(histone deacetylase 4,HDAC4)、纤维蛋白原/白蛋白比值(fibrinogen/albumin ratio,FAR)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者循环中的水平及预后价值,以及二者联合的诊断价值。方法应用酶联免疫吸附法测定117例NSCLC患者(肺癌组),50例肺部良性疾病者(参照组),50例健康体检者(健康对照组)血清HDAC4水平,并检测三组纤维蛋白原、白蛋白、癌胚抗原等水平,比较三组HDAC4、FAR水平的差异性,分析HDAC4、FAR与临床特征之间的关联及两者在NSCLC中的诊断及预后价值。结果FAR、HDAC4在NSCLC患者循环中水平明显高于参照组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,HDAC4、FAR与TNM分期和肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移呈正相关(P<0.05)。HDAC4联合FAR在非小细胞诊断中AUC为0.782,敏感性59%,特异性96%。生存分析表明较高的HDAC4、FAR预示着更短的无进展生存期(progression-free survival,PFS)(log-rank检验,P<0.05)。多因素分析结果显示HDAC4、FAR、远处转移、手术治疗是影响NSCLC患者预后(PFS)的独立危险因素(P<0.05)。结论HDAC4、FAR在NSCLC患者循环中升高,HDAC4联合FAR在肺癌诊断中有较好的临床参考价值,且较高HDAC4、FAR的NSCLC患者预后较差,二者有望作为评价NSCLC患者预后的指标。

组蛋白脱乙酰基酶抑制剂曲古霉素对心肌细胞肥大的影响

目的利用体外培养的大鼠乳鼠心肌细胞,研究曲古霉素(TSA)对血管紧张素II(Ang II)诱导的心肌细胞肥大的影响,并探讨相关机制。方法分离乳鼠心肌细胞进行原代培养,应用血管紧张素Ⅱ制备心肌细胞肥大模型。分别给予不同浓度的TSA预处理心肌细胞,观察TSA对心肌细胞面积、3H亮氨酸掺入率、心房利钠肽(ANP)、脑利钠肽(BNP)的mRNA表达水平的影响。同时通过检测乙酰化组蛋白3的蛋白表达水平,观察AngⅡ和TSA对组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)活性的影响。应用Western blot检测AngⅡ和TSA处理后磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(JNK)表达水平的变化。结果10-6mmol/L AngⅡ作用48 h后,心肌细胞面积增加至对照组的(1.63±0.46)倍(P<0.01),而10-7mmol/L和3×10-7mmol/L TSA预处理可以剂量依赖性的抑制AngⅡ引起的心肌细胞面积增大。TSA干预也阻断了AngⅡ引起的蛋白合成速率增加以及ANP和BNP的蛋白表达水平的增加(均为P<0.05)。AngⅡ刺激心肌细胞使乙酰化组蛋白3的蛋白表达水平降低,TSA可逆转这一效应。同时TSA抑制了AngⅡ介导的磷酸化JNK表达水平的升高。结论 TSA可显著抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大和HDAC活性增加,可能通过抑制JNK的激活而发挥抑制心室肥厚的作用。

Ⅰ类组蛋白脱乙酰基酶分子在外周血单核巨噬细胞中的表达与特应性皮炎发病的相关性

目的探讨I类组蛋白脱乙酰基酶(histone deacetylase,HDAC)分子在外周血单核巨噬细胞中的表达及其与特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)发病相关性和临床意义。方法首先采用流式细胞仪分选出患者及正常人外周血中的单核-巨噬细胞,定量聚合酶链反应(PCR)对I类HDAC家族的四个分子HDAC1、HDAC2、HDAC3和HDAC8进行检测,并对单核巨噬细胞中的白细胞介素(IL)-12和IL-10的表达与HDACs表达进行相关性分析。结果HDAC3在患者外周血单核巨噬细胞中表达低于正常对照组(P=0.026),而HDAC1、HDAC2和HDAC8在AD中的表达与正常对照组相比差异无统计学意义。患者外周血单核巨噬细胞中IL-10的表达与HDAC3呈负相关,IL-12的表达与HDAC3的表达无明显相关性。结论 HDAC3在外周血单核巨噬细胞中的表达降低与特应性皮炎的发生发展呈负相关。提示HDAC3在AD的发病机制上存在重要意义。

组蛋白去乙酰基酶在前列腺癌中的作用及机制研究

目的研究组蛋白去乙酰基酶在前列腺癌中的作用及机制。方法采用LNCaP细胞系建立前列腺癌异种移植体动物模型,分为对照组和HDAC抑制剂组,对照组动物常规饲养,HDAC抑制剂组采用0.4%HDAC抑制剂丙戊酸(VPA)饮用水连续饮用35 d。免疫组化法检测乙酰化组蛋白H3、p21WAF1/CIP1、p27KIP1、细胞周期蛋白D1、雄激素受体(AR)表达。结果与对照组相比,HDAC抑制剂组乙酰化组蛋白H3阳性染色MOD值显著升高[(0.63±0.12)比(0.75±0.11),P<0.05],p21WAF1/CIP1[(0.27±0.06)比(0.79±0.10),P<0.05]和p27KIP1[(0.31±0.08)比(1.09±0.18),P<0.05]阳性染色MOD值显著增加,细胞周期素D1的阳性染色MOD值显著减少[(0.69±0.09)比(0.58±0.08),P<0.05],AR阳性染色MOD值显著降低[(0.62±0.10)比(0.53±0.07),P<0.05]。结论 HDAC参与前列腺癌细胞的细胞周期调控并与AR过表达有关,HDACI可通过诱导癌细胞周期阻滞及下调AR表达水平等机制抑制前列腺癌肿瘤移植体生长。

应用酵母双杂交方法筛选与鉴定组蛋白乙酰基转移酶hTIP60β相互作用蛋白

目的克隆人组蛋白乙酰基转移酶TIP60β基因,应用酵母双杂交技术研究筛选与TIP60β发生相互作用的蛋白。方法运用RT-PCR方法从人脑组织克隆TIP60β cDNA,构建酵母双杂交BD诱饵载体pGBKT7-TIP60β,以其为诱饵从成人肝cDNA文库中筛选与之相互作用的阳性克隆,并对阳性克隆进行序列测定和相关生物学分析。结果诱饵载体pGBKT7-TIP60β经双酶切可释放出1443bp DNA片段,与理论值大小一致,测序比对分析表明序列正确。以其为诱饵经酵母双杂交筛选共获得32个克隆,进一步验证与测序分析,最终确认HDAC7A、DMD2、CREB1、BD73、PHF17、AR等9个克隆基因。结论以TIP60β为诱饵利用酵母双杂交系统获得9个基因编码的蛋白,它们很可能与TIP60β转录活性调节功能有关。

组蛋白脱乙酰基酶6在聚集小体和神经变性疾病中的作用

组蛋白脱乙酰基酶6(HDAC6)是主要存在于胞浆中的微管脱乙酰基酶,在体内参与多种重要的生物学过程。研究表明,错误折叠和聚集的蛋白质组成的聚集小体是神经变性疾病的主要病理特征,聚集小体在早期通过自吞噬作用,对细胞起着保护性作用,而HDAC6能调节聚集小体的形成并且参与自噬性降解。本文综述了近几年HDAC6参与聚集小体以及神经变性疾病发生发展的研究进展,为神经变性疾病的治疗提供新的研究思路,并为新药研发提供更多的理论依据。

基于组蛋白去乙酰基酶2抗炎效应研究针药同治COPD的作用机制

目的:探究组蛋白去乙酰基酶2(HDAC2)抗炎效应在针药同治慢性阻塞性肺疾病(COPD)中的作用。方法:选取SPF级SD雄性大鼠50只,随机均分为对照组、模型组、药物组、针刺组、针药同治组,除对照组外其余4组均采用烟熏+脂多糖(LPS)诱导构建COPD大鼠模型,建模后药物组给予金荞麦提取物灌胃,针刺组给予针刺治疗,针药同治组给予金荞麦水剂灌胃+针刺联合治疗,检测各组大鼠肺部通气功能,HE染色检测肺部病理情况,ELISA法检测外周血及肺泡灌洗液(BALF)炎性因子(IL-8,TNF-α,IL-23)水平,从外周血中分离中性粒细胞进行培养,试剂盒检测细胞HDAC2活性,Western blot检测核转导因子-κΒ(NF-κB)、转录因子激活蛋白1(AP-1)、组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)蛋白表达量。结果:与对照组比较,其余各组肺活量(FVC)、质量FVC、肺动态顺应性(Cdyn)、血清HDAC2表达、细胞HDAC2活性均降低,0.4秒率(FEV_(0.4)/FVC)、呼气阻力(Ri)、吸气阻力(Re)、血清及BALF中IL-8,TNF-α,IL-23表达、细胞NF-κB、AP-1蛋白表达水平均升高,与模型组比较,FVC、质量FVC、Cdyn、血清HDAC2表达、细胞HDAC2活性均升高,FEV_(0.4)/FVC、Ri、Re、血清及BALF中IL-8,TNF-α,IL-23、细胞NF-κB、AP-1蛋白表达水平均降低,与药物组、针刺组比较,针药同治组FVC、质量FVC、Cdyn、血清HDAC2表达、细胞HDAC2活性均升高,FEV_(0.4)/FVC、Ri、Re、血清及BALF中IL-8,TNF-α,IL-23、细胞NF-κB、AP-1蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论:针药同治COPD可明显改善大鼠肺功能和降低炎性因子水平,其机制可能与HDAC2抑制NF-κB/AP-1通路所起到的抗炎作用有关。

组蛋白去乙酰基酶抑制剂对卵巢癌生长的抑制作用

目的探讨组蛋白去乙酰基酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)和丁酸钠(NaB)对卵巢癌细胞株SKOV3的抑制作用。方法分别用ELISA法、流式细胞仪及PTPCR方法测定分析不同浓度TSA和NaB处理的卵巢癌SKOV3细胞的增殖、凋亡、端粒酶活性和人端粒酶RNA(hTERC)及人端粒酶逆转录酶(hTERT)的水平。结果TSA和NaB对SKOV3细胞的增殖均具有抑制作用,并呈剂量依赖性。TSA及NaB诱导SKOV3细胞凋亡,凋亡随药物剂量加大而增强。TSA及NaB不抑制端粒酶活性和hTERC及hTERT。结论TSA及NaB通过诱导SKOV3细胞凋亡,抑制SKOV3细胞生长。