组蛋白去甲基化酶KDM5A调控H3K4me3参与神经管畸形发生的分子机制

神经管畸形(NTDs)的病因与防治是出生缺陷领域研究的重点,叶酸可以预防神经管畸形但其机制不明。本文借助低叶酸细胞模型和低叶酸NTDs小鼠模型通过染色质免疫共沉淀、Cut&Tag等技术,探讨了组蛋白去甲基化酶lysine demethylase 5A(KDM5A)及其调控的下游组蛋白H3K4me3修饰在叶酸缺乏导致的NTDs发生中的潜在分子机制。结果显示,低叶酸的细胞模型中,qRT-PCR、Western印迹结果显示,KDM5A分子表达明显下降(P<0.05)。作为组蛋白H3K4me3调控的上游关键酶,进一步通过染色质免疫共沉淀ChIP、ChIP-qPCR实验证实,叶酸缺乏下组蛋白H3K4me3在神经发育基因Axin 2和Atoh 1基因启动子区富集增加(P<0.05)。通过构建KDM5A基因敲除细胞模型,借助Cut&Tag试验证实,KDM5A基因敲除后H3K4me3主要富集在神经发育基因上。最后在低叶酸导致的NTDs小鼠模型的脑组织中,RT-qPCR、Western印迹以及ChIP-qPCR实验显示,E9.5 d的NTDs胎鼠脑组织中KDM5A表达下降(P<0.05),Axin2、Atoh1表达升高(P<0.05),Axin2、Atoh 1基因启动子区的H3K4me3富集增多(P<0.05)。综上所述,KDM5A蛋白在叶酸缺乏导致的NTDs中发挥重要作用,其可通过调控下游H3K4me3进而调控神经发育靶基因Axin2、Atoh 1异常表达,介导NTDs的发生。本研究从叶酸缺乏介导KDM5A调控组蛋白修饰来探讨NTDs的发病机制,为降低出生缺陷,促进生殖健康提供依据。

组蛋白去甲基化酶5B在喉癌中的表达及体外对Hep-2细胞增殖的影响

目的明确组蛋白去甲基化酶5B(lysine-specific demethylase 5B,KDM5B)在喉癌中的表达情况,探讨其对喉癌Hep-2细胞增殖的影响及相关机制。方法收集121例喉癌患者手术切除组织标本和60例癌旁组织标本,对KDM5B表达量进行免疫组化分析,了解KDM5B表达与各临床因素间的关系。设计重组KDM5B-shRNA干扰表达质粒,并转染入Hep-2细胞内。研究分为空白组、NC-shRNA组和KDM5B-shRNA组。qRT-PCR检测KDM5B mRNA表达水平,CCK-8法观察细胞增殖能力的变化,平板克隆形成实验观察单克隆集落的形成,流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡情况,Western-blot检测KDM5B、H3K4me3、p21、p27、CyclinD1、CDK4等蛋白的表达情况。结果KDM5B在喉癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P=0.000),与病理类型(P=0.007)、临床分期(P=0.002)和淋巴结转移(P=0.000)均有关。KDM5B-shRNA组细胞内KDM5B mRNA水平明显低于空白组和NC-shRNA组(P<0.01)。随着转染时间的持续延长,KDM5B-shRNA组细胞的吸光度值与空白组和NC-shRNA组相比均有较大差异(P=0.000),且KDM5B-shRNA组细胞的单克隆集落数明显减少(P=0.000)。KDM5B蛋白表达被抑制后,CyclinD1和CDK4蛋白表达随转染时间延长均逐渐减少,而H3K4me3、p21和p27蛋白表达量则均逐渐升高。与空白组和NC-shRNA组相比,KDM5B-shRNA组细胞的G1期分布明显升高,而S期和G2期分布比例均明显降低,细胞凋亡率也明显升高(P均=0.000)。结论KDM5B参与喉癌增殖的调控,可作为一个潜在治疗喉癌的靶点。

乳腺浸润性导管癌中上皮剪接调节蛋白与组蛋白赖氨酸去甲基化酶5A表达的临床意义

目的探究乳腺浸润性导管癌及癌旁组织中上皮剪接调节蛋白(ESRP1)与组蛋白赖氨酸去甲基化酶5A(KDM5A)的表达及临床意义。方法选取2018年4月至2021年4月于包头市肿瘤医院经手术治疗及病理学检查确诊为乳腺浸润性导管癌患者的组织标本(n=162)及癌旁组织标本(n=38)。采用实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测乳腺浸润性导管癌及癌旁组织中ESRP1与KDM5AmRNA的表达水平,采用免疫组化(IHC)法检测乳腺浸润性导管癌及癌旁组织中ESRP1与KDM5A蛋白的表达水平。比较乳腺浸润性导管癌及癌旁组织中ESRP1、KDM5AmRNA相对表达量及ESRP1、KDM5A蛋白阳性表达率,分析ESRP1与KDM5A蛋白表达的相关性及乳腺浸润性导管癌患者ESRP1、KDM5A蛋白表达与临床病理特征的关系。结果乳腺浸润性导管癌组织中ESRP1mRNA相对表达量高于癌旁组织,KDM5AmRNA相对表达量低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺浸润性导管癌组织中ESRP1蛋白阳性表达率均高于癌旁组织,KDM5A蛋白阳性表达率均低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺浸润性导管癌中ESRP1蛋白表达与KDM5A蛋白表达呈负相关(r=-0.34,P<0.05)。ESRP1、KDM5A蛋白表达与淋巴结转移情况、分子亚型、临床分期、组织学分级有关(P<0.05),与年龄、肿瘤直径、脉管侵犯、神经侵犯无关。结论ESRP1在乳腺浸润性导管癌中呈高表达,KDM5A呈低表达,二者与乳腺浸润性导管癌的关系密切,可参与乳腺癌的发生发展,联合检测有利于及早诊疗乳腺浸润性导管癌,为个体化治疗提供新思路,有望成为乳腺浸润性导管癌分子治疗的新靶点。

组蛋白赖氨酸去甲基化酶5A在中枢神经系统疾病中的作用

组蛋白甲基化修饰是表观遗传的重要机制之一,最近研究发现组蛋白赖氨酸去甲基化酶5A(KDM5A)在个体发育、组织分化和肿瘤发生发展等过程中发挥重要的调控作用。成年动物大部分脑区已经失去神经发育功能,但是最新单细胞测序技术和精神疾病的动物模型研究揭示动物脑内KDM5A表达改变与神经疾病发生相关,提示KDM5A是探究脑疾病潜在的靶分子。本文从KDM5A分子结构、表达调控通路等方面总结最新进展,从而为后续其他中枢神经系统疾病研究提供参考。

维生素C促进根尖牙乳头间充质干细胞组蛋白去甲基化酶KDM2B和KDM5C表达的研究

目的:研究维生素C是否具有调节根尖牙乳头间充质干细胞组蛋白去甲基化酶相关基因表达的功能。方法:利用不同剂量的维生素C刺激人根尖牙乳头间充质干细胞;采用qRT-PCR(real time reverse transcriptionpolymerase chain reaction,实时定量RT-PCR)在mRNA水平检测组蛋白去甲基化酶相关基因的表达。结果:qRT-PCR结果显示组蛋白去甲基化酶KDM2B(Lysine(K)-specific demethylase 2B)和KDM5C(Lysine(K)-specific demethylase 5C)在10μmol/L维生素C刺激后2、4和8h表达明显升高,其表达升高程度与维生素C的作用具有时依赖性;qRT-PCR结果显示与未刺激组相比,5、10和20μmol/L维生素C在作用8h后都能促进KDM2B和KDM5C的表达,其表达升高程度与维生素C的作用具有剂量依赖性的关系。结论:在根尖牙乳头间充质干细胞中维生素C可以促进组蛋白去甲基化酶KDM2B和KDM5C的表达。

赖氨酸去甲基化酶5C对肾癌转移的作用研究

目的·研究失活的蛋白赖氨酸去甲基化酶5C(lysine demethylase 5C,KDM5C)对肾透明细胞癌迁移、侵袭的作用,分析它调控的基因,探索其失活后促癌的机制。方法·使用慢病毒构建KDM5C稳定敲除的人肾透明细胞癌786-O、Caki-1细胞株,通过Transwell小室观察肾癌细胞KDM5C敲除后迁移、侵袭的变化,蛋白质印迹法检测上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白表达的变化;用786-O Control-sg、KDM5C-sg 2组细胞RNA测序数据和癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)公共数据库做差异基因分析、功能通路富集分析,进一步探索KDM5C缺失后的促癌机制。根据EMT基因集筛选出测序数据中上调的EMT相关基因,并通过生存分析、单因素COX分析对基因进行初步筛选,最后通过LASSO回归分析、风险森林模型进一步筛选与KDM5C敲除后表型高度相关的基因。结果·KDM5C敲除后786-O和Caki-1细胞较对照组细胞表现出较为明显的迁移和侵袭表型(P=0.000)。TCGA数据库分析表明肾癌患者KDM5C突变会导致患者的预后情况变差(P=0.042)。RNA测序分析表明KDM5C敲除后可能通过影响黏附相关分子、上调上皮-间充质转化相关基因。通过蛋白质印迹法检测到2组细胞在敲除KDM5C后β-catenin、Vimentin、Snail蛋白表达水平均发生上调。最后将生存分析、单因素COX分析中得到的10个上调EMT基因进行LASSO回归分析、风险森林模型预测,结果表明KDM5C可能对PLAUR基因具有调控作用。结论·KDM5C在肾癌中突变可通过增强肿瘤迁移和侵袭促进肾癌的发生发展。

组蛋白去甲基化酶KDM5C在炎症性肠病中的作用研究

目的探讨组蛋白去甲基化酶KDM5C在炎症性肠病(IBD)发展过程中的作用及机制。方法利用生物信息学技术分析KDM5C在IBD患者和正常人肠黏膜中的差异表达情况。收集2019年11月至2020年9月期间在武汉大学中南医院接受手术治疗的8例溃疡性结肠炎(UC)患者、10例克罗恩病(CD)患者的结肠黏膜组织标本,另选择7例结肠息肉患者的结肠黏膜组织标本作为正常对照。采用实时荧光定量PCR(real-time qPCR)法检测各组结肠黏膜组织中KDM5C mRNA的相对表达量。采用2.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导慢性小鼠结肠炎模型,将SPF级C57BL/6野生型(WT)小鼠随机分为对照组1(WT小鼠)和实验组1(WT小鼠+2.5%DSS)。采用3%DSS诱导急性小鼠结肠炎模型,将SPF级C57BL/6 WT小鼠和KDM5C基因敲除(KDM5C^(-/-))小鼠分为对照组2、实验组2(WT小鼠+3%DSS)及实验组3(KDM5C^(-/-)小鼠+3%DSS)。每天记录各组小鼠的体质量变化、活动情况和粪便性状,并评估疾病活动指数(DAI)。造模后处死小鼠并测量结肠长度,H-E染色观察各组结肠组织的病理变化、real-time qPCR法检测各组结肠组织中TNF-α、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-6、IL-1β的mRNA相对表达量。结果与对照组1相比,实验组1结肠组织中KDM5C mRNA相对表达量明显下降(P<0.05)。与对照组2相比,实验组2结肠组织中TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-1β的mRNA相对表达量明显升高(P<0.05),实验组3结肠组织中上述炎性因子的mRNA相对表达量进一步升高。H-E染色显示,与实验组2相比,实验组3的结肠黏膜损伤更严重。结论KDM5C基因敲除可促进炎性因子表达并加重DSS诱导的急性小鼠结肠炎,提示KDM5C发挥了抗炎作用,表观遗传可能通过调控炎性因子的表达而参与结肠炎的发生、发展。

组蛋白甲基化酶SUV39H1过表达对C2C12细胞成骨分化的影响

目的 组蛋白甲基化修饰作为组蛋白密码的重要组成部分在表观遗传学研究中占有重要地位。本文旨在探讨组蛋白甲基化酶SUV39H1过表达对骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)诱导的C2C12细胞成骨分化的影响。方法 利用SUV39H1慢病毒感染C2C12细胞构建SUV39H1过表达稳转株。然后利用100 ng/mL的BMP2成骨诱导液对SUV39H1过表达稳转株成骨诱导7 d,随后进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色和茜素红染色检测成骨分化和矿化相关指标,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、细胞免疫荧光、Western blot检测成骨相关蛋白表达。结果 ALP和茜素红染色显示,与过表达GFP对照组比较,SUV39H1过表达会抑制C2C12细胞早期和晚期成骨分化和矿化程度,qRT-PCR显示,与过表达GFP对照组比较,SUV39H1过表达会降低Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)、ALP、骨桥蛋白(osteopontin, OPN)、骨钙素(osteocalcin, OCN)基因的表达(P<0.05)。Western blot和免疫荧光结果显示,与过表达GFP对照组比较,SUV39H1过表达会抑制Runx2和ALP成骨蛋白的表达,同时会提高组蛋白H3第9位点赖氨酸三甲基化(histone H3 lysine 9 trimethylation, H3K9me3)蛋白表达水平(P<0.05)。结论 SUV39H1过表达会抑制C2C12细胞的成骨分化水平。

赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶4C在食管癌中的研究进展

食管癌是最具侵袭性的恶性肿瘤之一,具有高转移潜能、强异质性和晚期治疗的耐药性等特点。赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶4C(KDM4C)是组蛋白去甲基化酶家族成员之一,在多种肿瘤细胞中均表现为基因扩增和高表达,且在肿瘤进展中起重要作用,广泛参与肿瘤细胞的发生、发展、侵袭及转移等过程。本文主要对KDM4C在食管癌发生、发展中的作用及其靶向抑制剂的研究进展作一综述,以期为临床食管癌的早期诊断及靶向治疗药物的研发提供新思路。

基于HDAC5/MEF2C通路探讨柴金解郁安神方调节失眠并发抑郁大鼠海马神经元突触可塑性的机制

目的基于组蛋白去乙酰酶5(histone deacetylase 5,HDAC5)/肌细胞增强因子2C(myocyte enhancer factor 2C,MEF2C)通路,探讨柴金解郁安神方调节失眠并发抑郁模型大鼠抑郁样行为及海马神经元突触可塑性的机制。方法通过对氯苯丙氨酸(PCPA)注射联合慢性温和不可预知应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)建立失眠并发抑郁大鼠模型,实验分为空白组、模型组、柴金解郁安神方高、中、低剂量组、阳性药组。通过糖水偏好实验、旷场实验和水迷宫实验评估大鼠的抑郁情况;酶联免疫吸附检测(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)血清中5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、多巴胺(dopamine,DA)的水平;HE染色和Nissl染色观察海马神经元病理损伤;高尔基染色(golgi staining)观察海马神经元树突棘损伤情况;免疫印迹法(Western blot)、免疫组化和免疫荧光法检测大鼠海马HDAC5、MEF2C、突触后致密物(postsynaptic density-95,PSD-95)和突触素(synaptophysin 1,SYN1)的表达情况。结果与模型组相比,柴金解郁安神方可以提高模型大鼠的糖水偏好率,减少旷场实验中的不动时间,增加总活动路程,缩短定位航行实验的逃避潜伏期,延长空间探索实验中平台所在象限的停留时间;此外,柴金解郁安神方还能改善海马神经元及树突棘的损伤,增加海马神经元的树突分支长度和树突棘密度;恢复失眠并发抑郁模型大鼠血清中5-HT、DA的水平;下调HDAC5蛋白,上调MEF2C、PSD-95、SYN1蛋白的表达。结论柴金解郁安神方可能通过降低HDAC5蛋白的表达,从而解除对转录因子MEF2C的抑制,促进PSD-95、SNY1蛋白的表达,发挥对海马神经元及突触的保护作用,从而缓解模型大鼠抑郁样行为。

RNA m^5C甲基化的研究进展

RNA 5-甲基胞嘧啶(m^5C)甲基化修饰是主要的RNA转录后修饰之一。这种修饰存在于几乎所有类型RNA中,受甲基转移酶、去甲基转移酶及结合蛋白的调控,具有调节核mRNA输出及RNA可变剪切、增加RNA稳定性、调节蛋白质翻译及RNA-蛋白质互相作用、维持RNA正常结构等作用。其水平异常与肿瘤、神经系统缺陷、心血管系统疾病和异常分化等疾病密切相关。为全面了解RNA m^5C的研究现状,本文将从RNA m^5C的分布特点、调控机制、生物学作用及其与疾病的关系等方面进行综述。

KDM5C通过Hippo-YAP1通路调控人宫颈癌发生的初步机制

目的探讨组蛋白去甲基化酶5C(KDM5C)通过Hippo-YAP1通路调控人宫颈癌发生的分子机制。方法采用稳转过表达KDM5C蛋白的CaSki细胞系,应用转录组测序(RNA-Seq)技术进行全转录组测序分析差异表达基因,并对差异基因进行GO分析、KEGG分析和蛋白互作网络分析。随后用siRNA敲低KDM5C基因,并通过RT-qPCR和Western blotting等反向验证关键受调控基因Yes相关蛋白1(YAP1)的表达变化。对过表达KDM5C蛋白的CaSki细胞系通过染色质免疫共沉淀测序(ChIP-Seq)技术和ChIP-qPCR方法分析KDM5C蛋白对YAP1基因启动子区间甲基化状态的影响。结果RNA-Seq分析显示,过表达KDM5C蛋白导致356个mRNA表达明显上调和335个mRNA表达明显下调(P<0.05);GO富集分析显示,KDM5C蛋白主要参与机体各种生物发育过程;KEGG富集分析显示,KDM5C蛋白主要参与黏着斑连接、甾类激素生物合成、Hippo-YAP1信号通路、FoxO信号通路、凋亡和感染等过程。RT-qPCR分析结果显示,敲低基因KDM5C可上调YAP1基因的表达;Western blotting结果也显示,降低KDM5C蛋白的表达可同时上调YAP1和磷酸化YAP1的表达水平(P<0.05)。ChIP-Seq分析显示,过表达KDM5C蛋白可明显升高YAP1基因启动子区间的H3K4me1水平、并降低H3K4me3水平(P<0.05),ChIP-qPCR分析也验证了这种表达变化(P<0.05)。结论KDM5C蛋白可调控宫颈肿瘤细胞YAP1基因启动子的组蛋白H3K4me1/me3甲基化水平,进而影响YAP1基因的转录。YAP1蛋白作为Hippo-YAP1通路的核心因子,其表达改变直接影响细胞的黏附、增殖和凋亡等过程,进而参与宫颈癌的发生发展。

赖氨酸去甲基化酶5C抑制剂CPI-455减轻β-淀粉样蛋白致海马神经元损伤的作用和机制

目的 研究赖氨酸去甲基化酶5C(KDM5C)抑制剂CPI-455对β-淀粉样蛋白肽(Aβ)诱导的海马神经元损伤的保护作用和机制。方法 原代培养大鼠海马神经元,使用10μmol/L和50μmol/L的Aβ_(25-35)制备神经元损伤模型;随后加入5μmol/L的CPI-455处理48 h, CCK-8检测海马神经元细胞存活率;免疫荧光染色检测神经元中组蛋白第三亚基四号赖氨酸的三甲基化(H3K4me3)丰度和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达;Western blot检测神经元中BDNF蛋白量变化;染色质免疫沉淀(ChIP)检测bdnf基因启动子区H3K4me3丰度和KDM5C结合量。结果 5μmol/L的CPI-455处理可增加细胞核内H3K4me3丰度;Aβ_(25-35)明显降低海马神经元细胞的存活率,CPI-455能够减轻10μmol/L Aβ_(25-35)所致神经元损伤,而对50μmol/L Aβ_(25-35)所致损伤无明显效果;CPI-455可增强细胞内BDNF的表达,上调bdnf基因启动子区H3K4me3丰度。结论 CPI-455通过上调海马神经元中BDNF的表达而减轻Aβ诱导的细胞损伤。

前列腺癌中KDM5C过表达可作为前列腺特异性抗原复发的预后指标

目前,表观基因调控能够触发前列腺癌的转移和引发雄激素非依赖性前列腺癌。组蛋白赖氨酸脱甲基酶（KDMs）是一种可以去除抑制和激活组蛋白标记的表观酶。KDM5家族成员能够去除组蛋白H3赖氨酸4的二甲基化（一种激活标记）,致使它们成为下调肿瘤抑制的潜在成员,这表明它们的活性能够抑制癌基因。我们在两个独立的根治性前列腺癌切除术组（共822例前列腺肿瘤），采用免疫组化系统性分析KDM5C的表达模式。KDM5C标记细胞核阳性，与降低前列腺特异性抗原的无复发生存率显著相关。

含JmjC结构域的组蛋白去甲基化酶和调控细胞G1／S期转换的基因之间的关系在癌症发病机制中的作用

含有JumonjiC结构域的组蛋白去甲基化酶（JHDM）可调控多种基因的转录，影响细胞周期进程，参与癌症发生。本文就JHDM和调控细胞由DNA合成前期向DNA合成期转换的基因的关系作一综述。

组蛋白去甲基化酶KDM5A在人牙髓细胞及成牙本质细胞分化中的表达

目的探讨组蛋白赖氨酸去甲基化酶KDM5A在人牙髓细胞（hDPC）中的表达模式及成牙本质分化诱导对其表达量的影响。方法体外培养hDPC,实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot检测第1代至第8代（P1-P8代）hDPC中KDM5A mRNA和蛋白的表达量;免疫荧光检测KDM5A在hDPC中的分布;对P3代细胞进行成牙本质分化诱导,于第7天和第14天分别检测KDM5A mRNA和蛋白的表达水平。结果体外传代培养hDPC中可检测到KDM5A的表达,KDM5A mRNA和蛋白量均呈先增加后减少的趋势;hDPC细胞质及细胞核中均表达KDM5A;成牙本质向分化诱导7和14 d,KDM5A mRNA和蛋白量高于未诱导组细胞,诱导14 d表达量高于诱导7 d（P〈0.05）。结论 hDPC表达KDM5A,矿化诱导可提高KDM5A的表达。

组蛋白去甲基化酶5的结构、功能及其抑制剂研究进展

组蛋白去甲基化酶5(KDM5)属于JMJD(jumonji domain containing)蛋白家族,KDM5包含JmjC、PHD、ARID等特征结构域,能够特异性去除组蛋白3第4位赖氨酸(H3K4)上甲基化修饰,被认为是潜在的抗肿瘤药物作用靶标。目前已有较多的KDM5抑制剂被报道,其中多个小分子抑制剂如CPI-455、EPT103182等已经进入临床前研究阶段。通过对KDM5的结构、生物学功能及代表性抑制剂展开综述,为新型KDM5抑制剂的结构设计以及优化提供参考。

乳腺癌靶标蛋白KDM5B的表达及纯化

组蛋白修饰是表观遗传重要的调控机制之一,在基因表达调控、异染色质形成等生命过程中起着重要作用。组蛋白去甲基化酶lysine demethylation 5B(KDM5B)是参与组蛋白修饰的一种重要蛋白质,Jumonji C(Jmj C)是其催化结构域,且与乳腺癌密切相关。现以kdm5b基因为模板,通过PCR分别扩增Jumonji N(Jmj N)、Jmj C结构域片段,用5×GS linker连接,插入到原核表达载体pGEX-6p-1,转化至Rosetta(DE3)感受态细胞并表达,重组蛋白经亲和柱GSTrap、分子筛superdexG75和阴离子交换柱Resource Q纯化后,再进行圆二色谱和体外酶活实验。SDS-PAGE、圆二色谱和MALDI-TOF质谱分析结果表明,成功获得纯度较高的重组蛋白,且具有去甲基化的活性。以上结果为进一步基于Jmj C结构域进行小分子抑制剂筛选奠定了基础。

十字形结构域蛋白2C在肿瘤中的研究进展

赖氨酸甲基化是调控染色体结构的组蛋白后修饰中的一种。在肿瘤的形成过程中可观察到其修饰状态的改变,这可能是组蛋白赖氨酸甲基转移酶或去甲基化酶作用的结果。十字形结构域蛋白2C(JMJD2C)是组蛋白去甲基化酶(JMJD2)家族的重要成员之一,包含有一个具有催化组蛋白赖氨酸去甲基化作用的Jmj C结构域,同时其还具有诱导基因型改变、调控基因表达及介导蛋白质间相互作用等重要功能。近年研究显示,JMJD2C基因在食管癌、前列腺癌和乳腺癌等多种恶性肿瘤中高表达,剔除JMJD2C基因等,可以减慢多种肿瘤细胞的生长。因此,JMJD2C为一潜在致癌基因,并可能成为肿瘤治疗新的靶点。

健脾解毒方调节组蛋白去甲基化酶JMJD2C抑制结直肠癌转移

目的:探讨健脾解毒方调节组蛋白去甲基化酶JMJD2C发挥抗结直肠癌转移的作用机制。方法:(1)取24只裸鼠,尾静脉注射结直肠癌HCT116细胞,复制结直肠癌肺转移模型。造模7 d后,将裸鼠平分为4组,分别灌胃给予不同剂量(0、250、500、1 000 mg/kg)的健脾解毒方水煎液。药物干预28 d后,分离肺转移灶组织,免疫组化检测JMJD2C蛋白表达。(2)分别以HCT116和LoVo细胞为研究对象,给予不同浓度(0、50、100、200μg/ml)健脾解毒方醇提液。药物干预48 h后,PCR检测JMJD2C mRNA表达,Western blot检测JMJD2C蛋白表达,免疫荧光检测JMJD2C的蛋白表达和细胞定位。结果:(1)健脾解毒方能够显著下调裸鼠结直肠癌肺转移灶中JMJD2C蛋白表达,且抑制作用呈剂量依赖性。(2)健脾解毒方能够显著下调两种结直肠癌细胞中JMJD2C的mRNA和蛋白表达,且100、200μg/ml作用更显著。(3)健脾解毒方能够抑制JMJD2C蛋白在结直肠癌细胞胞核内的累积,且100、200μg/ml作用更显著。结论:健脾解毒方能够抑制结直肠癌转移,作用机制可能与下调JMJD2C表达及其在细胞核的累积相关。