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对果蝇S期细胞内组蛋白基因的原位定量分析
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作者 马海飞 田中省二 四宫知行 《实验生物学报》 CSCD 1995年第1期17-21,共5页
利用微型计算机控制的荧光显微镜、荧光强度检测仪和图像记录装置并结合荧光原位杂交法对果蝇细胞核内组蛋白基因的复制时期进行了研究,从而建立了一套细胞内直接定量分析的方法。根据果蝇胚胎原代培养细胞核的DAPI染色强度确定处于S期... 利用微型计算机控制的荧光显微镜、荧光强度检测仪和图像记录装置并结合荧光原位杂交法对果蝇细胞核内组蛋白基因的复制时期进行了研究,从而建立了一套细胞内直接定量分析的方法。根据果蝇胚胎原代培养细胞核的DAPI染色强度确定处于S期的细胞。用杂交信号的荧光强度与细胞核荧光强度的相关关系来反映组蛋白基因的复制时期。结果表明果蝇组蛋白基因的复制是在DNA合成早期进行的。这套方法至少可直接在细胞上对每套基因组100以上拷贝数的熏复DNA序列进行有效的定量分析。 展开更多
关键词 果蝇 组蛋白基因 细胞 S期 定量分析 DNA
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黑腹果蝇种组组蛋白基因间内含子区的分子进化 被引量:2
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作者 王家太 杨勇 曾庆韬 《湖北大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2006年第1期72-74,90,共4页
通过分析黑腹果蝇种组(Drosophila melanogasterspecies group)9个种亚组代表种和D.pseudoobscura的组蛋白基因H2A和H2B的内含子的碱基组成、替换速率、转换/颠换比、二级结构和系统发育关系等发现:整个序列长度变异范围在201 bp(ficusp... 通过分析黑腹果蝇种组(Drosophila melanogasterspecies group)9个种亚组代表种和D.pseudoobscura的组蛋白基因H2A和H2B的内含子的碱基组成、替换速率、转换/颠换比、二级结构和系统发育关系等发现:整个序列长度变异范围在201 bp(ficusphila)到232 bp(takahashii)之间,替换速率为0.82,转换明显高于颠换,内含子和外显子结合区不遵循“GT-AG”和“AT-AC”模式,而是“TT-AG”模式,二级结构与系统分化关系具有相关性.我们认为组蛋白基因H2A和H2B的内含子是先起源的,在进化过程中由于承受的选择压力不同而发生了变异. 展开更多
关键词 黑腹果蝇种组 组蛋白基因 内含子 分子进化
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番茄组蛋白修饰基因家族鉴定及表达分析
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作者 刘思嘉 许多 +3 位作者 刘佳伟 程龙 章月琴 杨荣超 《广东农业科学》 CAS 2024年第4期101-114,共14页
【目的】植物组蛋白的功能修饰包括乙酰化修饰和甲基化修饰,在植物生长发育及逆境响应的过程中发挥着重要作用。番茄组蛋白修饰(Histone modification,HM)基因家族的生物学功能及分子机制尚不清楚,该文旨在进一步明确番茄HM基因的生物... 【目的】植物组蛋白的功能修饰包括乙酰化修饰和甲基化修饰,在植物生长发育及逆境响应的过程中发挥着重要作用。番茄组蛋白修饰(Histone modification,HM)基因家族的生物学功能及分子机制尚不清楚,该文旨在进一步明确番茄HM基因的生物学功能,为其分子机制研究及番茄遗传改良奠定基础。【方法】基于番茄基因组数据库鉴定番茄HM成员,利用生物信息学的方法系统分析其HM基因家族成员的系统进化、基因结构、染色体定位,通过在线转录组数据分析番茄HM基因家族时空表达模式。【结果】共鉴定到148个番茄HM基因,其中32个编码组蛋白乙酰转移酶(Histone acetyltransferase,HAT),11个编码组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylase,HDAC),50个编码组蛋白甲基转移酶(Histone methyltransferase,HMT),55个编码组蛋白去甲基化酶(Histone demethylase,HDM)。148个基因不均匀地分布在12条染色体上,其中3号染色体上分布最多、有21个基因,12号染色体上分布最少、有4个基因。基因结构特征分析表明,番茄HM基因之间外显子的差异较大,最多可达34个、最少仅有1个。蛋白质结构域分析结果显示,Solyc07g064130、Solyc11g005670、Solyc10g006480仅含有Ubl结构域,Solyc07g062100、Solyc10g077110和Solyc03g083310仅含有Zn-finger结构域,另有10个成员含有Bromo结构域、48个成员含有SET结构域,其他成员还包含PLN02529、PRMT5等结构域。此外,番茄HM与拟南芥和水稻中的同源蛋白关系均较远,且与水稻相比,番茄HM序列与拟南芥同源蛋白序列亲缘关系较近。根据聚类分析,将番茄HM分成HAT、HDAC、HMT、HDM 4个家族。组织表达分析表明,HAT家族在发芽后30 d的花(F30)、开花后10 d的果实(10 DPA)、花(fr)、根(rr)、未成熟的果实(Plgfr)中高表达;HDAC家族在发芽后30 d的花(F30)和未成熟果实(Plgfr)中高表达;HMT家族在发芽后30 d的花(F30)、在全株50%的花开放时的花(F45)、花蕾(br)、3 cm果实(3fr)、未成熟5 cm果实(PB+5fr)中高表达;HDM家族在发芽后30 d的花(F30)、在全株50%的花开放时的花(F45)、花蕾(br)、花(fr)、根(rr)、3 cm果实(3fr)、未成熟5 cm果实(PB+5fr)中高表达。【结论】不同番茄HM的基因结构差异较大,包含多种功能结构域。番茄HM与拟南芥、水稻HM的同源关系较远,且在植物不同生长发育阶段及不同器官组织中均有一定的表达,表明该类基因可能参与番茄多种生长发育过程。 展开更多
关键词 番茄 组蛋白修饰基因家族 基因结构 蛋白结构 系统进化 表达模式
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植物组蛋白和核糖体RNA的基因结构
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作者 林标扬 白永延 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1989年第1期42-45,共4页
本文介绍了植物组蛋白和核糖体RNA基因的结构。植物组蛋白基因的5′端有TATA盒,CAAT盒和GATCC的保守顺序。此外它还有一个植物组蛋白基因特有的保守顺序5′-CGCGGATC-3′,这个顺序可能与组蛋白基因的特殊调节有关。它的3′端也有特殊的... 本文介绍了植物组蛋白和核糖体RNA基因的结构。植物组蛋白基因的5′端有TATA盒,CAAT盒和GATCC的保守顺序。此外它还有一个植物组蛋白基因特有的保守顺序5′-CGCGGATC-3′,这个顺序可能与组蛋白基因的特殊调节有关。它的3′端也有特殊的保守顺序5′(T)n(G)m——TG——AT3′。组蛋白基因在密码子的选择上有很大的偏爱,95%的密码子以C或G结尾。植物rDNA的结构可分为编码区,非编码区和间隙区,与其他生物的rDNA比较,它们都有几个大于40bp的同源区。间隙区由不同的亚单位构成,不同亚单位有同源顺序,亚单位对DNA的转录调节有重要作用。文中还讨论了甲基化对基因表达的影响及5S DNA的结构特点。 展开更多
关键词 组蛋白基因 RDNA 5S DNA
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巢蛋白和性别决定基因高迁移率组蛋白阳性细胞在成年大鼠穹隆下器的表达 被引量:1
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作者 唐蔚东 叶建亚 +5 位作者 李彩格 马常升 郝庆卯 秦永 李力 王立涛 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期202-204,220,共4页
目的:观察巢蛋白与性别决定基因高迁移率组蛋白(SOX2)在穹隆下器的阳性细胞表达情况.方法:Wistar大鼠经心灌注后,采用免疫组织化学和免疫组织化学荧光显色观察巢蛋白、SOX2在穹隆下器中的表达情况.结果:巢蛋白阳性细胞呈絮状或丝状... 目的:观察巢蛋白与性别决定基因高迁移率组蛋白(SOX2)在穹隆下器的阳性细胞表达情况.方法:Wistar大鼠经心灌注后,采用免疫组织化学和免疫组织化学荧光显色观察巢蛋白、SOX2在穹隆下器中的表达情况.结果:巢蛋白阳性细胞呈絮状或丝状,有数目不等的分支,在室管膜下区域密集分布,室管膜、背侧区及两侧大血管周围分布较少,中央区域罕有分布.SOX2阳性细胞胞核多呈圆形或椭圆形,在穹隆下器室管膜、室管膜下及背侧区密集分布,中央区分布较少.SOX2和巢蛋白荧光双标染色,可见少量SOX2和巢蛋白双阳性表达细胞.结论:穹隆下器内SOX2及巢蛋白阳性细胞密集表达,并存在少量SOX2和巢蛋白双阳性表达细胞,说明穹隆下器可能存在神经干细胞/祖细胞. 展开更多
关键词 穹隆下器 神经干细胞 蛋白 性别决定基因高迁移率组蛋白
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巢蛋白及性别决定基因高迁移率组蛋白在SAMP8小鼠穹隆下器的表达及意义 被引量:1
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作者 叶建亚 李聪慧 +3 位作者 唐蔚东 马常升 郝庆卯 秦永 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期176-180,共5页
目的观察巢蛋白(Nestin)与性别决定基因高迁移率组蛋白(SOX2)在快速老化小鼠SAMP8穹隆下器(SFO)中的表达。方法成年8月龄SAMP8小鼠设为实验组,采用免疫组织化学和免疫组织化学荧光染色的方法观察Nestin及SOX2在穹隆下器中的表达,同时设... 目的观察巢蛋白(Nestin)与性别决定基因高迁移率组蛋白(SOX2)在快速老化小鼠SAMP8穹隆下器(SFO)中的表达。方法成年8月龄SAMP8小鼠设为实验组,采用免疫组织化学和免疫组织化学荧光染色的方法观察Nestin及SOX2在穹隆下器中的表达,同时设正常老化小鼠SAMR1对照。结果 Nestin免疫组织化学染色发现,对照组免疫阳性细胞呈突起分布,放射丝状表达;实验组免疫阳性细胞染色深,丝状结构粗大,在血管周围密集分布,阳性细胞百分比(49.17±7.60)%较对照组阳性细胞百分比(16.33±4.41)%明显增多,差异有统计学意义(P<0.01)。SOX2免疫组织化学染色,对照组免疫阳性细胞散在分布,染色深浅不一;实验组大部分阳性细胞染色较深,在血管周围密集分布;阳性表达细胞百分比(62.17±20.27)%较对照组阳性表达细胞百分比(36.00±16.20)%明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。荧光双标染色,对照组SOX2散在分布,其间可见Nestin阳性表达,室管膜下区可见少量SOX2/Nestin双表达细胞。实验组阳性表达强烈,SOX2/Nestin双表达细胞增多。结论 Nestin及SOX2在快速老化小鼠SAMP8穹隆下器的表达明显增强,表明阿尔茨海默病(AD)在一定时期可能引起穹隆下器神经干细胞/祖细胞的增殖或分化增强,进而可能影响穹隆下器的神经生发功能。 展开更多
关键词 穹隆下器 神经干细胞 祖细胞 蛋白 性别决定基因高迁移率组蛋白 神经生发 免疫组织化学 免疫荧光 小鼠
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巢蛋白和性别决定基因高迁移率组蛋白在快速老化小鼠最后区的表达
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作者 叶建亚 唐蔚东 +4 位作者 秦永 郝庆卯 李聪慧 李力 马常升 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期317-321,共5页
目的:观察巢蛋白(nestin)与性别决定基因高迁移率组蛋白(SOX2)阳性表达细胞在快速老化小鼠最后区的分布.方法:成年SAMP8小鼠,8月龄,采用免疫组织化学和免疫荧光显色的方法观察巢蛋白与SOX2在最后区的表达,同时设正常老化小鼠SAMR1作为对... 目的:观察巢蛋白(nestin)与性别决定基因高迁移率组蛋白(SOX2)阳性表达细胞在快速老化小鼠最后区的分布.方法:成年SAMP8小鼠,8月龄,采用免疫组织化学和免疫荧光显色的方法观察巢蛋白与SOX2在最后区的表达,同时设正常老化小鼠SAMR1作为对照.结果:巢蛋白免疫组织化学显色,SAMR1小鼠阳性细胞呈絮状或丝状表达,在背侧区分布稀疏;SAMP8小鼠免疫阳性细胞染色深,丝状结构粗大,在背侧区和外侧区分布密集,阳性细胞数目较SAMR1小鼠明显增多,差异具有统计学意义.SOX2免疫组织化学显色,SAMR1小鼠免疫阳性细胞染色深浅不一,散在分布;SAMP8小鼠大部分阳性细胞染色较深,在最后区的背侧区和外侧区分布密集,阳性细胞数目较SAMR1小鼠明显增多,差异具有统计学意义.荧光双标显色,SAMR1小鼠SOX2阳性细胞散在分布,其间可见巢蛋白阳性表达,内侧区可见少量SO X2/nestin双表达细胞.SAMP8小鼠阳性表达强烈,SOX2/nestin双表达细胞增多.结论:巢蛋白及SOX2在快速老化小鼠SAMP8最后区的表达明显增强,这表明阿尔茨海默病在一定时期时可能会影响最后区的神经生发功能,导致神经干细胞/祖细胞的增殖或分化增强. 展开更多
关键词 最后区 蛋白 性别决定基因高迁移率组蛋白 神经生发 快速老化小鼠
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菲律宾蛤仔重复序列28S rRNA及组蛋白H3基因的染色体定位 被引量:2
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作者 卢素敏 包振民 +5 位作者 张玲玲 孟庆磊 胡景杰 胡晓丽 刘慧 方建光 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期974-978,共5页
克隆了菲律宾蛤仔的28S rRNA基因(rDNA)及组蛋白H3基因,并应用FISH技术研究了它们在菲律宾蛤仔染色体上的定位情况.28S rDNA定位于一对中部着丝粒染色体的端部,在蛤仔的染色体上有一个位点;组蛋白基因定位于一对亚中部着丝粒染色体长... 克隆了菲律宾蛤仔的28S rRNA基因(rDNA)及组蛋白H3基因,并应用FISH技术研究了它们在菲律宾蛤仔染色体上的定位情况.28S rDNA定位于一对中部着丝粒染色体的端部,在蛤仔的染色体上有一个位点;组蛋白基因定位于一对亚中部着丝粒染色体长臂的端部,在蛤仔的染色体上也有一个位点.28S rDNA基因和组蛋白基因的特异性定位准确地区分了菲律宾蛤仔的两对染色体,这两对染色体可以作为菲律宾蛤仔的染色体标记,为蛤仔统一核型的建立打下良好的基础, 也有利于对贝类细胞遗传学进行研究,同时还可辅助育苗产业的发展. 展开更多
关键词 荧光原位杂交(FISH) 28S RDNA 组蛋白H3基因 菲律宾蛤仔
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角类肥蛛Larinioides cornuta组蛋白H3基因保守序列克隆与分析
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作者 张琼 杨勇 +1 位作者 曾庆韬 刘凤想 《蛛形学报》 2005年第2期95-99,共5页
本文利用常规的PCR技术,克隆、测序园蛛科Araneidae角类肥蛛Larinioides cornuta组蛋白基因H3。将其H3基因与皿蛛科Linyphiidae11个种的组蛋白H3基因的序列,在1级结构、2级结构、蛋白质水平进行了比较,分析发现:组蛋白基因H3的序列A、T... 本文利用常规的PCR技术,克隆、测序园蛛科Araneidae角类肥蛛Larinioides cornuta组蛋白基因H3。将其H3基因与皿蛛科Linyphiidae11个种的组蛋白H3基因的序列,在1级结构、2级结构、蛋白质水平进行了比较,分析发现:组蛋白基因H3的序列A、T、C、G碱基的百分含量比较平均,分别为24.9%、23.2%、25.7%、26.3%;简约信息位点数74,多数分布在第3位点;平均替换率为0.15。平均转换/颠换比(R)为1.8,大于0.5;G-C,C-T间的替换是该区域进化的另一个显著特征;DNA1级结构高度保守的区段都不分布在2级结构“茎”区,不存在补偿性突变,2级结构的“环”(loop)区差异也很大;在氨基酸水平上所有成员非常保守。 展开更多
关键词 角类肥蛛 组蛋白H3基因 进化
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组蛋白甲基化修饰效应分子的研究进展 被引量:19
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作者 宋博研 朱卫国 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期285-292,共8页
作为一种重要的表观遗传学调控机制,组蛋白甲基化修饰在多种生命过程中发挥了重要的作用。细胞内有多种组蛋白甲基化酶和去甲基化酶共同调节组蛋白的修饰状态,在组蛋白甲基化状态确定后,多种效应分子特异的读取修饰信息,从而参与基因转... 作为一种重要的表观遗传学调控机制,组蛋白甲基化修饰在多种生命过程中发挥了重要的作用。细胞内有多种组蛋白甲基化酶和去甲基化酶共同调节组蛋白的修饰状态,在组蛋白甲基化状态确定后,多种效应分子特异的读取修饰信息,从而参与基因转录调控过程。文章从组蛋白甲基化效应分子的作用机制方面综述了这一领域的研究进展。 展开更多
关键词 表观遗传学 组蛋白修饰 组蛋白甲基化修饰效应蛋白:基因转录调控
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hil-1基因通过饮食限制通路调节秀丽隐杆线虫寿命
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作者 成慧 方菲 +4 位作者 石嘉豪 杨桦 张梦杰 杨平 费俭 《实验动物与比较医学》 CAS 2023年第3期271-281,共11页
目的揭示H1连接子组蛋白基因(H1 linker histone gene,hil-1)的生理学功能,以及其调控线虫寿命的分子机制。方法以秀丽隐杆线虫为模式生物,采用RNA干扰菌喂食、hil-1(gk229)突变体回交纯化以及过表达质粒显微注射技术来敲降、敲除以及... 目的揭示H1连接子组蛋白基因(H1 linker histone gene,hil-1)的生理学功能,以及其调控线虫寿命的分子机制。方法以秀丽隐杆线虫为模式生物,采用RNA干扰菌喂食、hil-1(gk229)突变体回交纯化以及过表达质粒显微注射技术来敲降、敲除以及过表达hil-1基因,然后观察线虫存活寿命及产卵情况,通过热耐受实验、百草枯应激实验和重金属Cr6+应激实验评价hil-1(gk229)突变体的抗逆性,利用实时荧光定量PCR实验以及构建双突变体线虫进一步确定hil-1调控寿命所关联的信号通路和作用靶点。结果与野生型N2线虫相比,RNA干扰后的线虫寿命以及hil-1(gk229)突变体线虫寿命明显缩短(P<0.001),而hil-1全身性过表达后线虫寿命延长(P<0.05)。与野生型N2线虫相比,hil-1(gk229)突变体线虫对热压力和氧化压力的耐受性明显降低(P<0.001,P<0.05),而对重金属的耐受能力无差异(P>0.05)。并且,相比于野生型N2线虫,hil-1(gk229)突变体线虫的发育周期缩短(P<0.001),产卵提前(P<0.001),但产卵总量没有显著变化(P>0.05)。给eat-2(ad465)突变体线虫喂食hil-1 RNA干扰菌后,hil-1表达下调不影响eat-2(ad465)突变体线虫的寿命(P>0.05)。相较于野生型N2线虫,hil-1(gk229)突变体线虫中daf-16表达水平明显下调(P<0.001),其下游基因mtl-1和ctl-1表达也下调(P<0.05,P<0.001)。与daf-2(e1370)突变体相比,daf-2(e1370),hil-1(gk229)双突变体线虫的寿命无明显变化(P>0.05),而与daf-16(mu 86)突变体相比,daf-16(mu86),hil-1(gk229)双突变线虫的寿命明显缩短(P<0.001)。与对照组相比,在表皮和肠道中RNA干扰hil-1基因表达后线虫寿命明显缩短(P<0.001)。结论hil-1基因缺失明显缩短线虫寿命,同时使线虫对热压力和氧化压力的耐受性降低。hil-1基因可能通过饮食限制信号通路调控秀丽隐杆线虫的寿命,且该作用主要在表皮和肠道。 展开更多
关键词 秀丽隐杆线虫 H1连接子组蛋白基因 衰老 寿命 饮食限制通路
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西施舌3个群体H2A基因和nad6-nad1片段序列比较研究 被引量:1
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作者 朱明 申欣 +3 位作者 朱笑琳 屠海淼 杨婕 孟学平 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期26-32,共7页
西施舌(Coelomactra antiquata)浮游幼虫EST序列拼接获得组蛋白H2A ORF及其两翼的非编码区,在ORF两翼设计引物Can-H2AF和Can-H2AR,扩增H2A基因片段;从nad6 3′端和nad1 5′端设计引物,扩增两基因区域DNA序列,测序并进行核苷酸序列差... 西施舌(Coelomactra antiquata)浮游幼虫EST序列拼接获得组蛋白H2A ORF及其两翼的非编码区,在ORF两翼设计引物Can-H2AF和Can-H2AR,扩增H2A基因片段;从nad6 3′端和nad1 5′端设计引物,扩增两基因区域DNA序列,测序并进行核苷酸序列差异分析,研究漳州西施舌分化水平。结果:共获得西施舌3个群体H2A基因606bp或616bp基因区DNA片段23条,检测到9种基因型(Gen)。西施舌漳州群体H2A基因AT含量(51.51%)高于日照、北海群体AT含量(50.58%);序列比对分析显示,简约信息位点占4.05%。基于H2A基因的漳州群体与日照/北海混合群体间遗传距离平均为0.044,漳州群体,混合群体内遗传距离分别为0.003和0.004,群体间与群体内遗传距离之比为11-14.7;AMOVA分析结果显示,漳州群体和混合群体间发生了极显著遗传分化(FST=0.937,P〈0.01)。从nad6-nad1片段中共检出7种单倍型(Hap),漳州群体与日照群体无共享单倍型,基于nad6-nad1的漳州群体与日照群体间遗传距离为0.199-0.202,群体间与群体内遗传距离之比50-66,两个群体间nad1多肽链一级结构存在极大差异,有9个位点的氨基酸不同,日照西施舌缺失6个氨基酸。线粒体DNA显示西施舌漳州与日照群体发生了明显的遗传分化。 展开更多
关键词 西施舌(Coelomactra antiquata) 组蛋白H2A基因 nad6-nad1区域 遗传分化
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基因HAT1在小麦生理型雄性不育系中的表达分析 被引量:1
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作者 车会学 巴青松 +4 位作者 张改生 陈征 宋齐鲁 刘红占 桑青 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期869-874,共6页
组蛋白乙酰转移酶(HAT)在生物生殖发育中对染色体的结构修饰和基因的表达调控发挥着重要作用。为探讨组蛋白乙酰化与小麦生理型雄性不育的关系,利用实时荧光定量技术,分析了化学杀雄剂SQ-1诱导的生理型雄性不育小麦花药各发育时期组蛋... 组蛋白乙酰转移酶(HAT)在生物生殖发育中对染色体的结构修饰和基因的表达调控发挥着重要作用。为探讨组蛋白乙酰化与小麦生理型雄性不育的关系,利用实时荧光定量技术,分析了化学杀雄剂SQ-1诱导的生理型雄性不育小麦花药各发育时期组蛋白乙酰转移酶基因HAT1的表达水平。结果表明,与同期可育花药相比,生理型雄性不育小麦花药的HAT1基因表达水平在单核期显著升高,二核期变化趋势基本相同,三核期显著降低。DNA Ladder显示,不育花药在单核期出现明显的DNA片段化,比正常花药提前凋亡。这表明SQ-1诱导的小麦生理型雄性不育可能与HAT1基因表达异常和花药细胞提前凋亡有关。 展开更多
关键词 小麦 生理雄性不育 组蛋白乙酰转移酶基因(HAT1) DNA损伤修复 细胞凋亡
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HDAC4基因甲基化对h MSCs向汗腺样细胞诱导转分化的影响 被引量:2
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作者 赵换军 丁路 +2 位作者 付潇潇 王慧英 张翠萍 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期360-363,共4页
目的:探讨在诱导人骨髓间充质干细胞(h MSCs)转分化为汗腺样细胞过程中,组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)甲基化的改变及其对诱导转分化过程的影响。方法:选取人骨髓间充质干细胞系体外培养、扩增后,取第三代h MSCs与热休克处理的汗腺细胞进行T... 目的:探讨在诱导人骨髓间充质干细胞(h MSCs)转分化为汗腺样细胞过程中,组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)甲基化的改变及其对诱导转分化过程的影响。方法:选取人骨髓间充质干细胞系体外培养、扩增后,取第三代h MSCs与热休克处理的汗腺细胞进行Transwell+诱导因子的共培养。收集诱导后实验组的汗腺样细胞和同期对照组的h MSCs,采用甲基化特异性PCR(MSP)和飞行质谱(Mass Array)法检测HDAC4基因启动子区Cp G岛甲基化状态的变化,随后采用甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR,10μmol/L)处理实验组h MSCs,对照组为同期培养的h MSCs,RT-PCR测定两组细胞HDAC4基因和癌胚抗原(CEA)基因的m RNA表达量。结果:诱导前h MSCs中HDAC4基因整体甲基化水平较高,探针cg2463009处Cp G位点甲基化程度为0.901,诱导转分化后汗腺样细胞中HDAC4基因整体甲基化水平下降37%,甲基化程度为0.531;探针cg14823429处Cp G位点甲基化程度由诱导前的0.687下降到0.386。5-aza-CdR处理48 h后,实验组HDAC4基因m RNA表达水平上调,与诱导转分化相关的CEA m RNA同期表达量也增强,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HDAC4基因的甲基化参与了h MSCs转分化为汗腺样细胞过程的调控。 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 汗腺样细胞 组蛋白去乙酰化酶4基因 DNA甲基化
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敲除hdac8基因对斑马鱼低温耐受能力的影响
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作者 史雪灵 罗军涛 +2 位作者 罗贝贝 韩兵社 张俊芳 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期964-971,共8页
为探究敲除组蛋白去乙酰化酶8基因(histone deacetylase 8,hdac8)对斑马鱼(Danio rerio)低温耐受能力的影响,采用组织学、生理和生化等方法,研究了低温(8℃)短期胁迫下hdac8基因敲除(hdac8^(-/-))斑马鱼和野生型(WT)斑马鱼的组织损伤、... 为探究敲除组蛋白去乙酰化酶8基因(histone deacetylase 8,hdac8)对斑马鱼(Danio rerio)低温耐受能力的影响,采用组织学、生理和生化等方法,研究了低温(8℃)短期胁迫下hdac8基因敲除(hdac8^(-/-))斑马鱼和野生型(WT)斑马鱼的组织损伤、氧化应激相关指标及其凋亡相关基因表达的变化。结果表明:低温胁迫下,hdac8^(-/-)斑马鱼的半数致死时间(LT50)明显缩短,hdac8^(-/-)斑马鱼的LT50为14.5 h,WT斑马鱼的LT50为21.5 h;HE染色显示,低温胁迫下,hdac8^(-/-)斑马鱼鳃丝、肝脏和骨骼肌相较于WT斑马鱼损伤更加严重;28℃下,WT和hdac8^(-/-)斑马鱼的活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平无显著性变化(P>0.05),而hdac8^(-/-)斑马鱼的ATP水平则显著降低(P<0.05);低温胁迫下,hdac8^(-/-)斑马鱼的ROS和MDA水平显著高于WT斑马鱼(P<0.05),而ATP水平则显著低于WT斑马鱼(P<0.05);RT-qPCR显示,28℃下,hdac8^(-/-)斑马鱼caspase3基因表达显著上调(P<0.05),其他抗氧化与凋亡相关基因无显著性变化(P>0.05);低温胁迫下,WT和hdac8^(-/-)斑马鱼sod、cat、caspase3、caspase9和bax基因表达水平显著上调(P<0.05),且hdac8^(-/-)斑马鱼的这5种基因表达水平均显著高于WT斑马鱼(P<0.05)。研究表明,敲除hdac8基因显著降低了斑马鱼的低温耐受能力,并促进了低温氧化应激损伤和细胞凋亡。 展开更多
关键词 斑马鱼 组蛋白去乙酰化酶8基因 低温耐受 氧化损伤 细胞凋亡
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小分子干扰RNA沉默组蛋白去乙酰化酶1基因对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响 被引量:7
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作者 王璐 简玉洛 +3 位作者 李钢 赵丽 孟宝玺 马富廉 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期483-486,共4页
目的观察沉默组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)基因对人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法人皮肤鳞状细胞癌细胞株(A431)分为3组:空白对照组(不予任何处理)、阴性对照小干扰RNA(siRNA)组(予以30nmol/L阴性siRNA)... 目的观察沉默组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)基因对人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法人皮肤鳞状细胞癌细胞株(A431)分为3组:空白对照组(不予任何处理)、阴性对照小干扰RNA(siRNA)组(予以30nmol/L阴性siRNA)、siRNA组(予以30nmol/LHDAC1siRNA)。siRNA转染48h后,用反转录-聚合酶链反应(RT—PCR)法和Western blot分别检测3组细胞HDAC1、p21和细胞周期蛋白(Cyclin)E的表达;噻唑蓝(MTF)法检测阴性对照组和siRNA组细胞增殖;流式细胞术检测3组细胞周期和凋亡变化。结果转染HDAC1siRNA48h后A451中HDAC1mRNA表达量为0.22±0.04,显著低于空白对照组(1.01±0.05)和阴性对照siRNA组(1.03±0.05),差异有统计学意义(P〈0.05);Westernb lot显示HDAC1和CyclinE表达减少(P〈0.05),而p21表达增加(P〈0.05);MTr法检测显示细胞增长抑制率增加呈时间依赖性,差异有统计学意义(P〈0.05);流式细胞术检测结果显示细胞阻滞于G2/M期(P〈0.05),细胞凋亡增加(P〈0.05)。结论HDAC1siRNA能抑制A4S1HDAC1的表达、抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 组蛋白去乙酰化酶1基因 皮肤鳞状细胞癌 RNA干扰 增殖
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成年大鼠最后区神经干细胞的检测及鉴定 被引量:8
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作者 李力 马常升 +4 位作者 李岳 郝庆卯 曹翠丽 张智琴 王立涛 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期19-24,共6页
目的观察性别决定基因高迁移率组蛋白(SOX2)和巢蛋白(Nestin)阳性表达细胞及溴脱氧尿密啶核苷(BrdU)阳性标记细胞在最后区的分布。方法成年雄性SD大鼠12只,6~8周龄,随机分为两组,每组6只。一组大鼠按照50mg/kg(0.3ml)腹腔注射BrdU,连... 目的观察性别决定基因高迁移率组蛋白(SOX2)和巢蛋白(Nestin)阳性表达细胞及溴脱氧尿密啶核苷(BrdU)阳性标记细胞在最后区的分布。方法成年雄性SD大鼠12只,6~8周龄,随机分为两组,每组6只。一组大鼠按照50mg/kg(0.3ml)腹腔注射BrdU,连续3d给药,每天2次;另一组注射等量生理盐水。4d后灌注大鼠,行免疫组织化学及免疫荧光检测。结果免疫组织化学染色显示,SOX2阳性表达细胞在最后区的腹侧部呈明显的V字形分布,背侧部呈带状分布,中央部散在分布。Nestin阳性表达细胞在最后区的腹侧部呈明显的V字形强阳性分布,中央部呈弱阳性表达。在最后区可见少量阳性BrdU标记细胞。SOX2/BrdU荧光双标染色显示,SOX2阳性表达细胞较密集分布,可见少量SOX2/BrdU双阳性细胞。SOX2/Nestin荧光双标染色显示,SOX2阳性表达细胞较密集分布,可见少量SOX2/Nestin双阳性表达细胞。结论最后区SOX2及Nestin阳性细胞密集表达,呈明显的区域分布;在最后区内存在少量BrdU阳性标记细胞及SOX2/BrdU和SOX2/Nestin双阳性细胞;最后区可能存在神经干细胞/祖细胞。 展开更多
关键词 神经干细胞 最后区 性别决定基因高迁移率组蛋白 蛋白 免疫组织化学 免疫荧光 大鼠
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Screening an Na^+/H^+ Antiporter Gene from the Halophiles Colonizing in the Dagong Ancient Brine Well of Zigong City,China 被引量:3
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作者 梁华忠 刘森 +3 位作者 李可 张大凤 车振明 向文良 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第4期711-715,共5页
[Objective] This study aimed to screen an Na+/H+ antiporter gene from the halophiles colonizing in the Dagong Ancient Brine Well in Zigong City, China, and then analyze the gene structure and properties of the prote... [Objective] This study aimed to screen an Na+/H+ antiporter gene from the halophiles colonizing in the Dagong Ancient Brine Well in Zigong City, China, and then analyze the gene structure and properties of the protein encoded by this gene. [Method] Metagenomic DNA libraries of halophiles from the Dagong Ancient Brine Well were used for screening genes with Na+/H+ antiporter activity in antiporter-defi- cient E. coil KNabc strain by functional complementation. Then the start codon, stop codon, ORF, -35 region, -10 region and SD sequence of Na~/H+ antiporter gene, as well as the molecular weight, isoelectric point, hydrophobic region, transmembrane domain, phyletic evolution and salt resistance of protein encoded by the gene were investigated. [Result] A new Na+/H+ antiporter gene m-nha was obtained, which ,ren- dered the antiporter-negative mutant E. coil KNabc cells with both the resistance to Na+ and the ability to grow under alkaline conditions. [Conclusion] The structure and amino acid sequence of M-Nha was different from the previously reported Na+/H~ antiporters, and the m-nha gene disclosed from the Dagong Ancient Brine Well was identified as a novel Na+/H+ antiporter gene. This study was significant not only in helping us understand the salt tolerance of halophiles in ancient brine wells and develop and utilize the genes resource, but also in exploring new salt-tolerant genes. 展开更多
关键词 Na+/H+ antiporter gene Metagenomic library HALOPHILES Dagong Ancient Brine Well
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上调miR-138-5p对舌鳞状细胞癌细胞增殖及上皮间质转化的影响 被引量:1
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作者 杨晋 张娟 +3 位作者 高杰 马素伟 王焱 靳昊 《广东药科大学学报》 CAS 2022年第5期90-96,共7页
目的探讨miR-138-5p对舌鳞状细胞癌(TSCC)Tca-8113细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法qRT-PCR检测永生化的舌上皮细胞株Hacta和舌鳞癌细胞Tca-8113中miR-138-5p和EZH2 mRNA表达水平;生物信息学预测和双荧光素酶验证miR-138... 目的探讨miR-138-5p对舌鳞状细胞癌(TSCC)Tca-8113细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法qRT-PCR检测永生化的舌上皮细胞株Hacta和舌鳞癌细胞Tca-8113中miR-138-5p和EZH2 mRNA表达水平;生物信息学预测和双荧光素酶验证miR-138-5p和EZH2的靶向关系;将Tca-8113细胞随机分为Tca-8113组、miR-138-5p NC组、miR-138-5p mimics组、si-NC组、si-EZH2组、miR-138-5p mimics+pcDNA NC组、miR-138-5p mimics+pcDNA EZH2组。CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测细胞EMT相关蛋白β-联蛋白(β-catenin)、上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达水平。结果与Hacta细胞相比,Tca-8113细胞miR-138-5p表达水平显著降低,EZH2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05);miR-138-5p和EZH2存在靶向关系。与Tca-8113和miR-138-5p NC组相比,miR-138-5p mimics组miR-138-5p表达水平、细胞凋亡率及β-catenin和E-cadherin表达水平显著升高,EZH2 mRNA和蛋白表达水平、细胞增殖活性、迁移侵袭能力及N-cadherin和vimentin表达水平显著降低(P<0.05)。干扰EZH2可抑制Tca-8113细胞增殖和EMT进程(P<0.05)。过表达EZH2可逆转上调miR-138-5p对Tca-8113细胞凋亡、迁移、侵袭和EMT进程的影响(P<0.05)。结论上调miR-138-5p可通过靶向抑制EZH2表达,降低TSCC细胞Tca-8113增殖、迁移侵袭及EMT,促进其凋亡。 展开更多
关键词 miR-138-5p 组蛋白甲基化转移酶基因 舌鳞状细胞癌 增殖 凋亡 上皮间质转化
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Plant Proteomics in the Post-genomic Era 被引量:12
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作者 郭奕明 沈世华 +1 位作者 荆玉祥 匡廷云 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2002年第6期631-641,共11页
Proteomics is one of the most active research fields in the post-genomic era. Here we briefly introduce the scientific background of the origination of proteomics and its content, research method. The new developments... Proteomics is one of the most active research fields in the post-genomic era. Here we briefly introduce the scientific background of the origination of proteomics and its content, research method. The new developments of proteomics at the levels of individual plants, tissues, organs and organells, as well as its applications in the area of plant genetic diversity, mutant characterization, and plant physiology, etc are reviewed. At last, the challenge and prospect of proteomics are discussed. 展开更多
关键词 genome post-genome PROTEOME plant proteomics matrix-assisted laser-desorption/ionizationtime-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF/MS) two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2D-PAGE)
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