含RIZ1 PR结构域融合蛋白的原核表达、提纯与功能分析

目的:表达与提纯R IZ1第1个至第200个氨基酸含PR结构域的活性GST融合蛋白质(GST-PR200融合蛋白)。方法:设计引物以含人R IZ1 cDNA全序列的pR IZ1 RH质粒为模板克隆获得目的基因片段,测序核对后经EcoRⅠ与XhoⅠ双酶切,以正确阅读框架插入相同酶切的pGEX-6P-3中,经转染与IPTG诱导表达筛选到阳性大肠杆菌克隆并提纯该融合蛋白质。分别采用SDS-PAGE蛋白电泳法、质谱分析法及组蛋白甲基化转移酶(HMT)测定法鉴定其性质与功能。结果:获得的纯化融合蛋白质相对分子质量约为47 000,其CPM值明显高于对照组(P<0.01),且与作用时间呈正相关。结论:所构建的融合蛋白原核表达系统能有效表达活性GST-PR200融合蛋白,可供大量提取作进一步研究。