组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D在前列腺癌中的研究进展

代谢重编程和表观遗传在前列腺癌(Prostate Cancer,PCa)的发生发展中十分重要。组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D(KMT2D)是一种重要的表观遗传因子,它可以通过甲基化组蛋白H3赖氨酸4(H3K4)促进全基因组的可及性和转录。外显子组测序表明,KMT2D是许多类型癌症中最常见的突变基因之一。KMT2D在不同类型癌症中的作用不同,既可作为抑癌基因也可作为癌基因,KMT2D在中国PCa患者中高突变和过表达。对KMT2D在PCa中作用的相关研究进行回顾,可以熟悉KMT2D在PCa中的调控过程,对PCa的精准靶向治疗和获得更好的疾病预后具有重要意义。

组蛋白甲基化转移酶2在糖尿病肾病小鼠肾组织中的表达变化及其意义

目的检测组蛋白甲基化转移酶2(SET and MYND domain containing 2,SMYD2)在糖尿病小鼠肾组织中的表达变化,分析其与上皮细胞⁃间充质细胞转化(epithelial⁃mesenchymal transformation,EMT)的相关性,为临床上治疗糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)提供新的方向。方法24只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照(NC)组、DM12周组、DM24周组和DM28周组,每组6只。采用腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)复制DM小鼠模型,处死小鼠后收集血清和肾组织,全自动生化分析仪测血糖(BG)、血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN);利用HE和Masson染色进行肾脏病理分析;应用Western blot方法检测α⁃平滑肌肌动蛋白(α⁃SMA)、波形蛋白(Vimentin)、SMYD2、转化生长因子⁃β1(TGF⁃β1)和E⁃钙黏素(E⁃cadherin)的表达。结果与NC组相比,DM组小鼠BG、Scr和BUN水平均明显增加(P<0.05),24周组和28周组肾组织出现明显的病理改变和纤维增生,α⁃SMA、Vimentin、SMYD2和TGF⁃β1蛋白表达增加(P<0.05),E⁃cadherin蛋白表达减少(P<0.05),其中SMYD2与E⁃cadherin的表达呈负相关,与α⁃SMA,Vimentin和TGF⁃β1的表达呈正相关。结论SMYD2在DM小鼠肾组织中表达上调,推测其可能和TGF⁃β1表达上调共同参与EMT的发生,进而参与调控DN的发生发展。

组蛋白甲基化转移酶2与顺铂致慢性肾脏病炎症反应的相关性研究

目的探讨组蛋白甲基化转移酶2(SMYD2)与顺铂致慢性肾脏病(CKD)炎症反应的相关性,为临床防治顺铂致CKD提供新方向。方法将16只小鼠分为对照组和顺铂组,每组8只。顺铂组小鼠给予10 mg/kg顺铂腹腔注射,对照组给予相同体积顺铂溶媒,1次/周,连续注射3周,第4周处死小鼠后收集血清和肾组织。全自动生化分析仪检测血尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr);HE和Masson染色观察肾组织病理学改变;Western blot检测肾组织SMYD2、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏素蛋白(E-cadherin)、纤维粘连蛋白(Fibronectin)、胶原蛋白3(Collagen-Ⅲ)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、p-STAT3、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的表达。结果与对照组相比,顺铂组小鼠BUN和Scr水平均明显升高(P<0.05),肾组织中部分肾小球出现系膜细胞增生,肾小管发生颗粒变性和空泡样变,肾间质纤维增生明显,SMYD2、α-SMA、Vimentin、Fibronectin、Collagen-Ⅲ、STAT3、p-STAT3、TNF-α、IL-6蛋白表达升高,E-cadherin蛋白表达下降(P<0.05);SMYD2与E-cadherin表达呈负相关,与α-SMA、Vimentin、Fibronectin、Collagen-Ⅲ、STAT3、p-STAT3、TNF-α、IL-6表达呈正相关(P<0.05)。结论SMYD2在顺铂致CKD小鼠肾组织中表达上调,推测其可能与STAT3信号通路共同介导炎症反应参与顺铂致CKD的发生发展。

组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D调控H9c2细胞中HIF-1α/VEGF通路(英文)

组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D(histone-lysine N-methyltransferase 2D,KMT2D)作为主要的组蛋白3第4位赖氨酸(H3K4)甲基转移酶,在调控胚胎发育、组织分化、代谢和肿瘤抑制方面发挥重要作用。在小鼠体内,敲除Kmt2d会导致严重的心脏发育缺陷最终造成胚胎期死亡。低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)作为调节细胞应对低氧的关键转录因子,能够调控多种下游基因转录。有相关研究揭示,表观遗传调控者能够调节HIF-1α的稳定性和活性。同样,作为表观遗传调控者的组蛋白甲基转移酶KMT2D是否参与低氧条件下HIF-1α对下游基因的调控,目前仍未知。在本研究中,观察在Kmt2d正常或缺乏的情况下,心肌细胞H9c2对低氧环境的应答反应。结果显示,与常氧条件相比,低氧状态下HIF-1α、组蛋白乙酰化酶P300、KMT2D及其介导的H3K4一甲基化(H3K4 mono-methylation,H3K4me1)的蛋白质水平增加(P<0.05);HIF-1α下游基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,Vegf)的mRNA表达水平明显上调(P<0.01)。染色质免疫共沉淀实验(chromatin immunoprecipitation assay,ChIP-qPCR)检测结果显示,H3K4me1和组蛋白3第27位赖氨酸乙酰化(histone 3 lysine 27 acetylation,H3K27ac)在Vegf基因启动子区域的结合丰度明显增加(P<0.05)。低氧条件下沉默Kmt2d之后,H3K4me1蛋白水平和Vegf的mRNA表达下降(P<0.05)。本研究表明,低氧条件下KMT2D参与调控HIF-1α和下游基因Vegf的表达。

蛋白质赖氨酸甲基转移酶在甲状腺癌中的研究进展

蛋白质赖氨酸甲基转移酶(protein lysine methyltransferase,PKMT)能催化组蛋白尾部和非组蛋白靶标上的赖氨酸残基甲基化。这类重要的翻译后修饰,可影响染色质的结构和紧密程度,进而影响基因表达。越来越多证据表明,PKMT的遗传改变会影响PKMT在组织中的正常表达从而发挥致癌或抑癌功能。在多种实体瘤中发现PKMT的表达与肿瘤病人的预后有关。本综述总结Zeste增强子同源物2(enhancer of zeste homologue 2,EZH2)、组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶2(histone-lysine N-methyltransferase 2,KMT2)家族和含有SET结构域及MYND结构域蛋白(SET and MYND domain-containing protein,SMYD)家族三类主要PKMT的功能及其在甲状腺癌中的作用。

TUG1通过调控EZH2促进胃癌细胞侵袭转移的机制研究

目的:探讨牛磺酸上调基因1(TUG1)在胃癌细胞侵袭转移中的作用及其调控机制。方法:TCGA数据库分析TUG1在胃癌组织中的表达且与患者预后的关系;qRT-PCR检测胃癌组织和细胞中TUG1表达;细胞转染构建TUG1过表达后敲减细胞系;Transwell实验观察TUG1过表达和敲减对胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的影响;Western Blot检测TUG1过表达和敲减对胃癌SGC-7901细胞中EZH2/STAT3信号通路活性的影响。结果:TUG1在胃癌组织和细胞中表达上调(P<0.01),与患者的预后呈负相关(P<0.01),而与其病理分期和淋巴转移呈正相关(P<0.05)。Transwell实验结果显示,上调TUG1表达促进胃癌细胞的迁移和侵袭(P<0.01)。Western Blot结果显示,上调TUG1表达可促进EZH2表达,并激活STAT3信号通路(P<0.01)。结论:TUG1通过激活EZH2/STAT3信号通路促进胃癌细胞的侵袭转移。

组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D在胃癌中的表达及临床意义

目的检测胃癌组织中赖氨酸组蛋白甲基转移酶2D(KMT2D)的表达水平并探究其临床意义。方法对100例胃癌患者癌组织及其相应的癌旁组织中的KMT2D进行免疫组织化学染色,分析其蛋白表达水平与患者临床病理特征和预后的关系。结果100例胃癌组织中的KMT2D高表达率[78%(78/100)]显著高于癌旁组织的高表达率[12%(12/100)]。胃癌组织中的KMT2D高表达与浸润深度(χ^(2)=36.515,P<0.01)、淋巴结转移状态(χ^(2)=52.329,P<0.01)、TNM分期(χ^(2)=78.952,P<0.01)、肿瘤瘤体大小(χ^(2)=10.905,P<0.010)、淋巴管侵犯状态(χ^(2)=22.355,P<0.01)、静脉侵犯状态(χ^(2)=4.100,P<0.05)显著相关,而与患者的性别、年龄、肿瘤远处转移、肿瘤分化程度、肿瘤部位无明显相关(P>0.05)。此外Kaplan-Meier生存分析显示KMT2D高表达组的胃癌患者中位生存时间为15个月,低于KMT2D低及正常表达组的患者,两者差异有统计学意义(Log-rank=11.146,P<0.05)。Cox单因素回归分析表明年龄[风险比(HR)=0.544,P<0.05]、肿瘤浸润深度(HR=2.054,P<0.05)、淋巴结转移(HR=1.964,P<0.05)、远处转移(HR=2.663,P<0.05)、TNM分期(HR=2.344,P<0.05)、KMT2D表达水平(HR=2.420,P<0.05)都是胃癌患者的不良预后影响因素,但是Cox多因素回归分析发现以上因素都不是胃癌的独立预后因素(P>0.05)。结论KMT2D在胃癌组织中高表达,作为癌基因促进胃癌的进展并与胃癌的预后显著相关。

miR-647、miR-122、KMT2D表达与前列腺癌临床病理特征及预后的相关性分析

目的探讨前列腺癌组织中微小RNA-647(miR-647)、微小RNA-122(miR-122)、组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D(KMT2D)与其临床病理特征及预后的相关性。方法选取100例前列腺癌患者作为研究对象,均于术中采集肿瘤组织及癌旁正常组织标本送检,统计肿瘤组织及癌旁正常组织内miR-647、miR-122、KMT2D表达水平差异;分析miR-647、miR-122、KMT2D表达与肿瘤分期、肿瘤直径、淋巴结转移、微血管侵犯等的关系;并随访2年,比较复发转移与未复发转移患者miR-647、miR-122、KMT2D表达间差异。结果肿瘤组织内miR-647表达水平为(0.62±0.13),低于癌旁正常组织的(1.02±0.19),miR-122、KMT2D表达水平为(6.45±1.24)、(1.45±0.23),低于对照组的(1.23±0.22)、(0.89±0.12)(P<0.05);肿瘤分期Ⅲ期、肿瘤直径≥3 cm、有淋巴结转移及有微血管侵犯患者miR-647表达水平低于肿瘤分期Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤直径<3 cm、无淋巴结转移及无微血管侵犯患者,miR-122、KMT2D表达水平高于肿瘤分期Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤直径<3 cm、无淋巴结转移及无微血管侵犯患者(P<0.05);100例患者术后随访2年,共出现24例复发转移,复发转移率为24.00%(24/100);复发转移患者miR-647表达水平为(0.51±0.11),低于未复发转移患者的(0.73±0.15),miR-122、KMT2D表达水平为(8.42±1.39)、(1.89±0.32),高于未复发转移患者的(4.68±1.02)、(1.12±0.15)(P<0.05)。结论前列腺癌组织内miR-647、miR-122、KMT2D存在不同程度表达,均与肿瘤分期、肿瘤直径及淋巴结转移等关系密切,且可明显影响患者预后,还需临床高度重视。

EZH2调控卵巢癌细胞生物学行为的机制研究

目的探讨组蛋白甲基化转移酶Zeste同源物增强子2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)调控卵巢癌(ovarian cancer,OC)生物学行为的机制,为寻找OC治疗的新靶点提供实验支持。方法采用EZH2小干扰RNA(small interfered RNA,siRNA)在不同OC细胞系中敲减EZH2,并使用qRT-PCR、Western blot分析干扰siEZH2 mRNA和蛋白质的效率。进一步采用CCK-8法、细胞划痕试验、Transwell试验以及流式细胞术检测干扰EZH2后对OC细胞增殖、迁移及侵袭能力和凋亡水平等生物学行为的影响。采用Western blot分析干扰EZH2后,早期生长反应因子1(early growth response 1,EGR1)和H3K27me3蛋白的表达水平,并分析EZH2调控OC细胞生物学行为的机制。结果转染siEZH2后,OC细胞系中EZH2 mRNA的表达水平显著低于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且A2780细胞中EZH2蛋白的表达水平亦明显下调(P<0.05)。Western blot检测结果表明,EGR1以及H3K27me3蛋白水平出现了不同程度地降低。转染siEZH2-1后,转染组A2780细胞的增殖能力显著低于阴性对照组(P<0.05);细胞划痕试验和Transwell试验结果显示,转染siEZH2-1后细胞的迁移和侵袭能力显著减弱(P<0.05);流式细胞术结果显示,转染siEZH2-1后细胞凋亡水平显著增强(P<0.05)。结论EZH2在OC细胞系中高表达,并促进A2780细胞的增殖、迁移、侵袭和抗凋亡。但EZH2并非通过其H3K27me3转移酶功能调控EGR1的表达而调控影响OC的生物学行为。

磁共振联合血清KMT2D检测在膀胱癌诊断中的临床意义

目的分析磁共振联合血清组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D(KMT2D)检测对膀胱癌的诊断价值。方法以本院154例膀胱癌患者作为膀胱癌组(BC组),根据临床金标准分为肌层浸润性膀胱癌94例(MIBC组)和非肌层浸润性膀胱癌60例(NMIBC组)。对照组为同期100例健康体检者。比较各组血清KMT2D表达水平差异,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清KMT2D对MIBC膀胱癌诊断价值。磁共振、血清KMT2D及二者联合诊断与临床“金标准”的一致性采用Kappa检验。结果BC组血清KMT2D表达水平低于对照组,MIBC组KMT2D表达水平低于NMIBC组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清KMT2D诊断MIBC膀胱癌的截断值为0.68,曲线下面积为0.855。磁共振检查诊断MIBC膀胱癌与临床“金标准”检查一致性较好(Kappa=0.744,P<0.05)。磁共振检查联合血清KMT2D诊断MIBC膀胱癌与临床“金标准”结果相比的Kappa值为0.932(P<0.05)。磁共振检查联合血清KMT2D诊断MIBC膀胱癌的灵敏度、准确率及特异度优于单独诊断。结论磁共振联合血清KMT2D检测对MIBC膀胱癌诊断价值较高,有助于术前明确膀胱癌浸润程度。

SMYD2介导高糖诱导小鼠肾成纤维细胞活化的机制研究

目的 探讨组蛋白赖氨酸甲基转移酶2(SMYD2)介导体外高糖环境下小鼠肾成纤维细胞(NRK-49F)活化的可能机制。方法 复制糖尿病(DM)小鼠模型,经全自动生化分析仪检测各组小鼠血糖(BG)、血肌酐(Scr)水平,经苏木精-伊红、Masson染色观察小鼠肾组织病理改变,经Western blotting检测各组小鼠肾组织纤维连接蛋白(Fibronectin)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、组蛋白H3赖氨酸4三甲基化(H3K4me3)、SMYD2、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)及磷酸化NF-κB p65(NF-κB p-p65)蛋白表达,经免疫荧光检测各组小鼠肾组织α-SMA及SMYD2表达。复制体外DM细胞模型,使用正常糖(含5.5mmol/L葡萄糖)或高糖(含30.0 mmol/L葡萄糖)处理NRK-49F细胞,经Western blotting检测SMYD2、α-SMA及细胞外基质(ECM)成分蛋白表达;经CCK-8法检测SMYD2特异性抑制剂AZ505的细胞毒性;在AZ505处理/不处理的条件下,经Western blotting检测SMYD2、α-SMA、H3K4me3、Fibronectin、CollagenⅠ、NF-κB p65、NF-κB p-p65蛋白表达,经免疫荧光检测α-SMA、SMYD2及NF-κB p-p65在细胞中的表达及空间定位情况。结果 DM组血清BG、Scr水平高于NC组(P <0.05)。DM组肾组织α-SMA、Fibronectin、CollagenⅠ、SMYD2、H3K4me3、NF-κB p-p65蛋白相对表达量高于NC组(P <0.05),两组NF-κB p65蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。HG刺激不同时间点NRK-49F细胞α-SMA、Collagen I、Fibronectin、SMYD2蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(P <0.05)。40μmol/L组、60μmol/L组NRK-49F细胞存活率较0μmol/L组低(P <0.05)。HG组NRK-49F细胞Fibronectin、CollagenⅠ、SMYD2蛋白相对表达量较NG组高(P <0.05),HG+AZ505(20μmol/L)组较HG组低(P <0.05)。HG组NRK-49F细胞Fibronectin、CollagenⅠ、α-SMA、H3K4me3、SMYD2蛋白相对表达量较NG组高(P <0.05),HG+AZ505组较HG组低(P <0.05)。HG组NRK-49F细胞NF-κB p-p65蛋白相对表达量较NG组高(P <0.05),HG+AZ505组较HG组低(P <0.05),各组小鼠NRK-49F细胞NF-κB p65蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论SMYD2可介导高糖诱导的NRK-49F细胞活化,其机制可能与激活NF-κB细胞信号通路有关。

基于生信分析探讨KMT2家族调节肝癌微环境免疫细胞浸润特性研究

目的探讨组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶2(KMT2)家族在肝癌微环境免疫细胞浸润中的作用。方法利用多种数据库探究KMT2家族在肝癌中的表达水平、预后价值及与微环境免疫细胞浸润的相关性。结果KMT2家族在肝癌组织中的表达水平显著上调,并与患者不良预后相关。KMT2家族与肿瘤微环境(TME)免疫细胞浸润水平及几乎所有免疫检查点(ICP)基因密切相关。结论KMT2家族在肝癌中的表达水平显著上调,且在TME免疫细胞浸润中发挥重要作用,具有成为肝癌免疫治疗候选靶点的潜在价值。

KMT2C在胃癌中的表达特征和功能分析

目的:探讨组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶2C[lysine(k)-specific methyltransferase 2C,KMT2C]在胃癌中的表达、作用及临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测KMT2C在150例胃癌组织及相应的正常组织中的表达水平。χ^(2)检验、Kaplan-Meier生存曲线以及Cox回归模型分析KMT2C表达与胃癌患者临床病理特征及预后的相关性。CCK-8实验、集落形成实验、伤口愈合实验和Transwell迁移侵袭实验检测敲低KMT2C对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果:KMT2C mRNA在98例胃癌组织中的表达高于癌旁正常组织。相关性分析结果显示,KMT2C mRNA表达与TNM分期(P=0.032)和T分期(P=0.044)显著相关。多因素Cox回归分析结果显示,KMT2C mRNA表达水平(HR=1.693,95%CI:1.034~2.774,P=0.037)以及TNM分期(HR=1.903,95%CI:1.127~3.212,P=0.016)是影响胃癌预后的独立危险因素。KMT2C高表达患者的总生存期显著低于低表达患者(P<0.05)。此外,敲低KMT2C表达可以抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖、迁移和侵袭能力。结论:KMT2C作为促癌基因在胃癌中高表达并与不良预后相关。KMT2C可能作为胃癌治疗的潜在靶点。

中枢神经系统原发性弥漫大B细胞淋巴瘤中EZH2蛋白的表达和意义

目的 探讨组蛋白甲基转移酶EZH2在中枢神经系统原发性弥漫大B细胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma,DL-BCL）中的表达及意义。方法 采用免疫组化法检测33例中枢神经系统原发性DLBCL中EZH2的表达,分析其与临床病理学特征之间的关系。结果 33例中枢神经系统原发性DLBCL中20例为中心母细胞型,4例为免疫母细胞型,6例为中间型细胞组成,3例为间变亚型。免疫表型上,25例为非生发中心B细胞样型（non-germinal centre B-cell-like,non-GCB）型,8例为生发中心B细胞样型（germinal centre B-cell-like,GCB）型。全部病例均过表达EZH2蛋白,但不同形态学和免疫表型的DLBCL中EZH2蛋白表达无差异,28例80%~100%肿瘤细胞呈EZH2蛋白强阳性,5例50%~79%肿瘤细胞呈EZH2蛋白中等程度~强阳性。24例患者获得随访,中位生存时间为12.5个月,其中Non-GCB型和GCB型患者的中位生存时间分别为11个月和25个月,EZH2蛋白表达与患者预后无相关性。结论 EZH2在中枢神经系统原发性DLBCL中过表达,提示将来可能用EZH2抑制剂治疗这种高度恶性DLBCL。

KMT2D在前列腺癌患者中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的探讨组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D(KMT2D)在前列腺癌患者中的表达,以及其与临床病理特征和预后的关系。方法选取2015年7月—2017年7月山西省大同市第五人民医院泌尿外科行前列腺癌根治术治疗的患者126例为观察组,并根据随访3年预后情况分为预后良好亚组(n=88)、预后不良亚组(n=38),另外选择同期医院健康体检志愿者120例作为健康对照组。收集受试者临床资料,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测受试者血清KMT2D表达水平,Cox回归分析影响前列腺癌患者预后的因素,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清KMT2D对前列腺癌不良预后的预测价值。结果观察组血清KMT2D水平高于健康对照组(t/P=8.504/<0.001);预后不良亚组血清KMT2D水平高于预后良好亚组(t/P=6.601/<0.001);Gleason评分>7分、有微血管侵犯、TNMⅢ期、有淋巴结转移的前列腺癌患者血清KMT2D相对表达量分别高于Gleason评分≤7分、无微血管侵犯、TNMⅠ~Ⅱ期、无淋巴结转移的患者,差异均有统计学意义(t/P=3.958/<0.001、2.292/0.024、3.022/0.003、5.982/<0.001);KMT2D低表达患者3年生存率显著高于KMT2D高表达患者(χ^(2)/P=10.112/0.001);Cox回归分析结果显示,KMT2D高表达、Gleason评分>7分、TNM分期为Ⅲ期、有淋巴结转移是前列腺癌患者预后不良的危险因素[OR(95%CI)=1.245(1.019~1.521)、1.063(1.010~1.119)、1.152(1.053~1.261)、1.474(1.127~1.928)]。ROC曲线分析显示,血清KMT2D预测前列腺癌患者预后不良的曲线下面积(AUC)为0.814,敏感度为0.680,特异度为0.908,约登指数为0.588。结论KMT2D在前列腺癌患者血清中呈高表达,对于患者预后不良具有较好的预测价值,且是预后不良的危险因素。

LncRNA-MIAT通过抑制miR-519d-3p激活EZH2促进甲状腺癌的恶性行为

目的:探讨长链非编码RNA MIAT(LncRNA-MIAT)对甲状腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的调控作用与分子机制。方法:用癌症基因组图谱(TCGA)和甲状腺癌(THCA)mRNA-seq数据分析LncRNA-MIAT和组蛋白甲基化转移酶2(EZH2)在甲状腺癌中的表达。用人正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1和人甲状腺癌细胞系FTC-133作为靶细胞。qPCR法检测LncRNA-MIAT、miR-519d-3p、EZH2 mRNA的表达水平差异。RNA荧光原位杂交(FISH)检测LncRNA-MIAT在FTC-133细胞中的定位,Western blot检测EZH2蛋白的表达。荧光素酶报告基因检测LncRNA-MIAT和miR-519d-3p以及miR-519d-3p与EZH2的直接作用。将FTC-133细胞分为6组[空白对照组(control组)、空载体组(Empty vector组)、过表达LncRNA-MIAT组(LncRNA-MIAT组)、miR-519d-3p的抑制剂组(miR-519d-3p inhibitor组)、EZH2的抑制剂EPZ-6438处理组(EPZ-6438组)、miR-519d-3p抑制剂联合过表达LncRNA-MIAT组(LncRNA-MIAT+miR-519d-3p inhibitor组)]。用Edu试剂盒和平板克隆法检测细胞增殖。用流式细胞术检测细胞凋亡。用Transwell细胞迁移和侵袭实验检测细胞的行为。结果:LncRNA-MIAT和EZH2在甲状腺癌组织和细胞中的表达均上调,二者具有正相关性(r=0.466,P<0.05),miR-519d-3p在FTC-133细胞中表达下调(P<0.05)。经过双荧光素酶报告基因实验检测发现miR-519d-3p的靶基因是EZH2,且LncRNA-MIAT靶向抑制miR-519d-3p激活EZH2。与Empty vector组相比,LncRNA-MIAT组和miR-519d-3p inhibitor组的Edu阳性细胞百分比、细胞克隆数、细胞侵袭和迁移数均显著上调(P<0.05),细胞凋亡率均减少(P<0.05)。EZH2的抑制剂EPZ-6438则减少Edu阳性细胞百分比、细胞克隆数、细胞侵袭和迁移数(P<0.05),增加细胞凋亡率(P<0.05)。分别与LncRNA-MIAT组或miR-519d-3p inhibitor组比,LncRNA-MIAT+miR-519d-3p inhibitor组的Edu阳性细胞百分比、细胞克隆数、细胞侵袭和迁移数均显著上调(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:甲状腺癌细胞中LncRNA-MIAT通过抑制miR-519d-3p激活EZH2促进甲状腺癌的恶性行为。

组蛋白三甲基化转移酶SETD2对肺腺癌上皮—间充质转化的影响

[目的]研究组蛋白三甲基化转移酶SETD2与肺腺癌的临床相关性及其在肺腺癌组织中的表达,探讨SETD2对肺腺癌细胞株A549和H1975增殖、迁移、侵袭能力及上皮—间充质转化(EMT)过程的影响。[方法]结合癌症基因组图谱数据库(TCGA),分析SETD2的表达水平与肺腺癌患者总生存期(OS)的相关性。分别应用Real-time PCR和Western blot方法检测SETD2mRNA和蛋白在人肺腺癌组织芯片(包含12对肺腺癌组织标本)中的表达情况。构建慢病毒载体过表达Lv-SETD2-A549、Lv-SETD2-H1975稳转细胞株,沉默Si-SETD2-A549、Si-SETD2-H1975稳转细胞株及阴性对照组LvNC、Si-NC稳转细胞株。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法、细胞划痕和Transwell小室实验,分别检测过表达和沉默SETD2对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。采用Western blot方法比较4组细胞株中EMT相关蛋白上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及正常对照组(GADPH)的表达水平差异;应用免疫荧光法检测4组间E-cadherin、Vimentin的表达水平。[结果](1)SETD2表达与肺腺癌患者OS成正相关(P=0.014)。(2)SETD2mRNA和蛋白在肺腺癌组织中表达明显下降,且与临床分期明显相关(P=0.001)。(3)与Lv-NC组相比,A549和H1975在SETD2过表达组中SETD2mRNA和蛋白显著升高,细胞相对增殖活性(A549-0h:0.18±0.02,A549-24h:0.22±0.04,A549-48h:0.35±0.06,A549-72h:0.55±0.05;H1975-0h:0.21±0.02,H1975-24h:0.31±0.04,H1975-48h:0.43±0.03,H1975-72h:0.71±0.09),细胞穿膜数(A549:54.00±11.23;H1975:57.13±10.28)均显著下降,迁移间距(A549:0.65±0.09;H1975:0.51±0.10)降低;这些指标,在SETD2沉默组中恰恰相反。(4)与阴性对照组相比,过表达SETD2可上调A549、H1975细胞株中E-cadherin的蛋白表达水平,而下调N-cadherin、Vimentin的蛋白表达水平;这些指标在SETD2沉默组中则相反;免疫荧光实验结果显示过表达SETD2的A549和H1975组E-cadherin的红色荧光强度较Lv-NC组增强,而Vimentin的绿色荧光较Lv-NC组明显减弱。[结论]SETD2在肺腺癌组织中表达下降,SETD2低表达组患者OS较高表达明显下降。上调SETD2表达水平能够有效抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,且逆转其发生EMT,抑制SETD2的表达则可诱导上述过程;SETD2可能发挥抑癌作用。

组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶2在乳腺浸润性小叶癌中的表达

目的探讨浸润性小叶癌(ILC)临床病理特性和组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶2(EZH2)表达之间的关系。方法54位ILC患者,从中选择49例进行EZH2的免疫组织化学检测。结果ILC以癌细胞散在呈线性或非线性生长为特点。在多灶性、月经状况、体重指数、肿瘤分级、淋巴结转移、雌激素受体和雄激素受体等大多数肿瘤特性中的差异无统计学意义。相反,核分级的差异有统计学意义,并且EZH2的表达与高核分级明显相关。80%核分级3级的病例EZH2评分为4分,86%核分级1级的病例EZH2评分为1分和2分。小管形成得分3分,有丝分裂得分1分,所以根据核分级评估,组织学分级1级的有7例,2级的有42例。 结论EZH2的表达与高核分级显著相关。大多数组织学分级2级的ILCs核分级为2级或者3级。将经典型ILC与变异型区分开来,并且将EZH2的表达和核分级都纳入诺丁汉分级系统,这种分级有助于评价预后。

甲状腺乳头状癌组织中SETDB2、Gal-3、PLEKHS1的表达情况及其对患者预后的预测价值

目的分析SET结构域分叉组蛋白赖氨酸甲基转移酶2(SETDB2)、半乳糖凝集素3(Gal-3)、pleckstrin同源结构域S1(PLEKHS1)在甲状腺乳头状癌组织中的表达情况,以及三者对患者预后的预测价值。方法(1)选择118例甲状腺乳头状癌患者作为研究组,45例甲状腺良性结节患者作为对照组。采用免疫组化法检测甲状腺乳头状癌组织和甲状腺良性结节组织中SETDB2、Gal-3、PLEKHS1蛋白表达情况。比较研究组与对照组之间,以及不同特征甲状腺乳头状癌患者之间病灶组织中SETDB2、Gal-3、PLEKHS1蛋白的阳性表达率。(2)随访1年,记录甲状腺乳头状癌患者的生存情况。分析SETDB2、Gal-3、PLEKHS1蛋白阳性表达和阴性表达患者的生存率;比较预后良好和预后不良患者SETDB2、Gal-3、PLEKHS1蛋白的阳性表达率。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析SETDB2、Gal-3、PLEKHS1对甲状腺乳头状癌患者预后的预测价值。结果(1)与对照组相比,研究组病灶组织中SETDB2蛋白阳性表达率较低,Gal-3、PLEKHS1蛋白阳性表达率较高(P<0.05)。在甲状腺乳头状癌患者中,Ⅲ~Ⅳ期、浸润深度≥1/2、组织中低分化、淋巴结转移、肿瘤直径>1 cm的患者病灶组织中SETDB2蛋白阳性表达率更低,Gal-3、PLEKHS1蛋白阳性表达率更高(P<0.05)。(2)在甲状腺乳头状癌患者中,SETDB2蛋白阳性表达患者生存率高于SETDB2蛋白阴性表达患者,Gal-3、PLEKHS1蛋白阳性表达患者生存率低于Gal-3、PLEKHS1蛋白阴性表达患者(P<0.05);预后良好患者的SETDB2蛋白阳性表达率高于预后不良患者,Gal-3、PLEKHS1蛋白阳性表达率低于预后不良患者(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,SETDB2、Gal-3、PLEKHS1蛋白总评分预测甲状腺乳头状癌患者预后不良的曲线下面积分别为0.826、0.841、0.859。结论在甲状腺乳头状癌中,SETDB2呈低表达,而Gal-3、PLEKHS1呈高表达,三者均与患者的病情严重程度相关,且对预后具有一定的预测价值。

组蛋白甲基化转移酶SETD2在肺腺癌中作用研究进展

表观遗传调控在肿瘤的发生、发展和治疗中起重要作用。组蛋白甲基化转移酶SETD2是表观遗传调节中的一个重要基因。SETD2与细胞生物合成有关,其突变或功能丧失可导致下游信号通路激活促进癌症发生。SETD2被证实在肾透明细胞癌、白血病、脑胶质瘤及肺腺癌肿瘤组织中发生突变。本文就SETD2在肺腺癌中作用的研究进展作一综述。