MicroRNA-377和组蛋白甲基转移酶SMYD3在肝细胞癌中的表达及两者的相关性

目的:探讨microRNA-377(miR-377)与组蛋白甲基转移酶SMYD3在肝癌中的表达规律及与肝癌的相关性.方法:利用实时定量PCR分别检测不同肝组织及肝细胞系中miR-377表达水平,应用实时定量PCR和Western blot分别检测不同肝组织及肝细胞系中SMYD3 mRNA和蛋白水平的表达情况.通过转染miR-377模拟物上调其在肝癌细胞株HepG2中表达后,应用实时定量PCR、Western blot分别检测转染前后HepG2中SMYD3 mRNA和蛋白表达的变化.结果:MiR-377 mRNA在人肝癌旁组织和肝癌组织中的表达较正常肝脏明显降低(0.331±0.059,0.139±0.064 vs 0.874±0.178,均P<0.05);在HepG2中的表达较L-02明显降低(0.145±0.021vs0.868±0.194,P<0.05).SMYD3 mRNA和蛋白质在人肝癌旁组织和肝癌组织中的表达较正常肝脏明显升高(mRNA:3.836±0.137,5.836±0.965vs1.235±0.332;蛋白:0.381±0.020,0.484±0.030vs0.252±0.015;均P<0.05).SMYD3 mRNA和蛋白质在肝癌细胞系HepG2中的表达较正常肝细胞系L-02明显升高(mRNA:0.845±0.047vs0.348±0.134;蛋白:0.575±0.008vs0.259±0.007,均P<0.05).转染miRNA-377模拟物上调HepG2中miR-377表达后转染组SMYD3 mRNA和蛋白表达较空白组和阴性对照组均明显下降(mRNA:0.125±0.010 vs 0.857±0.163,0.779±0.167;蛋白:0.092±0.026 vs 0.347±0.040,0.383±0.054,均P<0.05).结论:miRNA-377在肝癌中表达明显下调,其靶基因SMYD3表达上调;表达下调的miRNA-377丧失对SMYD3表达的抑制可能是肝癌发生的重要机制.

组蛋白去甲基转移酶Jmjd3通过表观修饰调控先兆子痫辅助性T细胞1/2失衡的作用及机制探究

目的观察组蛋白去甲基转移酶Jmjd3在先兆子痫患者中的表达水平,探讨其介导的表观修饰调控先兆子痫患者的Th1/Th2失衡的可能作用机制。方法收集2018年1月至2019年6月河南省人民医院产科23例初产妇先兆子痫住院患者作为研究组,选取同期在该院接受分娩的19名正常孕妇作为对照组。采用逆转录即时荧光定量PCR(RT-PCR)检测先兆子痫患者和正常孕妇外周血单个核细胞(peripheral blood monocyte cells,PBMC)中组蛋白去甲基转移酶Jmjd3 mRNA水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组孕妇外周血清γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素(IL)-4的含量;RT-PCR检测先兆子痫和对照组小鼠脾脏中Jmjd3、Tbx21和Cxcr3的mRNA水平;免疫磁珠法分选出对照组和先兆子痫小鼠脾脏初始CD4^+T细胞,Western blot检测其H3K27me1和H3K27me3水平;染色质免疫共沉淀(ChIP)分析先兆子痫小鼠脾脏中H3K27me3去甲基化修饰水平。结果与正常孕妇相比较,先兆子痫患者PBMC中Jmjd3 mRNA水平明显升高,血清中IFN-γ水平显著升高,IL-4水平明显降低(P<0.01);与正常对照组小鼠相比较,先兆子痫小鼠脾脏Jmjd3 mRNA水平明显升高,且在先兆子痫小鼠中,Tbx21和Cxcr3的表达均明显升高(P<0.01);先兆子痫小鼠初始CD4^+T细胞H3K27me3水平明显降低(P<0.05),H3K27me1则没有变化;ChIP分析表明,与对照组小鼠相比较,先兆子痫组小鼠CD4^+T细胞H3K27me3在Ifng启动子区的募集明显降低,而在Il4启动子区的募集明显升高(P<0.01)。结论不论是在先兆子痫患者还是小鼠中,组蛋白去甲基转移酶Jmjd3相对表达水平明显上调,进而诱导Ifng启动子区的H3K27me3发生去甲基化修饰,促进初始CD4^+T细胞向Th1细胞分化发育,导致Th1/Th2失衡,这可能是促进先兆子痫发生发展的重要原因之一。

组蛋白共价修饰——组蛋白H3第4赖氨酸甲基化

染色体组蛋白的共价修饰在调节染色体结构,控制基因的转录等方面发挥重要的作用。组蛋白H3第4赖氨酸的甲基化作为共价修饰的方式之一,可以调控基因的转录激活。随着对组蛋白甲基化转移酶及相关作用蛋白研究的深入,人们对组蛋白H3第4赖氨酸的甲基化的功能也有了更深的了解。目前研究发现它与癌症也有很密切的关系。

LncRNA SNHG25在直肠癌细胞中的表达及其调节miR-330-3p/SMYD3轴对直肠癌细胞迁移及侵袭的影响

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因25(SNHG25)对直肠癌(RC)细胞迁移、侵袭的影响及微小RNA(miR)-330-3p/组蛋白甲基化转移酶3(SMYD3)轴在此过程中所发挥的作用。方法使用Real-Time PCR检测SNHG25在不同细胞系的表达及其沉默效率,Transwell实验检测下调SNHG25对RC细胞迁移和侵袭的影响。再次培养细胞,并依实验目的分为NC组(不作任何处理)、miR-330-3p mimics组(转染miR-330-3p模拟物)、miR-330-3p inhibitor组(转染miR-330-3p抑制物)、sh-SNHG25-1+miR-330-3p inhibitor组(转染sh-SNHG25-1+miR-330-3p抑制物)、SMYD3组(转染pcDNA-SMYD3)、si-SMYD3(转染si-SMYD3)、SMYD3+miR-330-3p mimics(转染pcDNA-SMYD3+miR-330-3p模拟物),Real-Time PCR检测各组细胞中miR-330-3p与SMYD3 mRNA表达;Transwell实验检测各组RC细胞迁移、侵袭能力。结果与人正常肠黏膜上皮细胞系(FHC)细胞比较,RC细胞(SW837、SW1463及HR8348)中SNHG25的表达增高,且在HR8348细胞中表达明显高于其他RC细胞系(3.12±0.17、1.96±0.15、4.87±0.22比1.00±0.03,P<0.05),选择HR8348细胞进行后续实验。与sh-NC比较,sh-SNHG25-1/2/3组细胞中SNHG25表达均被下调,且sh-SNHG25-1下调效率最高(1.02±0.01比0.21±0.02、0.52±0.03、0.36±0.04,P<0.05);sh-SNHG25-1组细胞中RC细胞迁移数量和侵袭数量均减少(205.13±21.23比120.34±11.98和89.92±8.15比30.27±3.59,P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,SNHG25与miR-330-3p、miR-330-3p与SMYD3均存在负向调控关系。与NC组比较,miR-330-3p mimics组细胞中miR-330-3p表达增加(1.03±0.01比1.67±0.15,P<0.05),迁移细胞数量和侵袭细胞数量减少(210.08±12.96比131.36±10.45和77.45±8.69比21.74±2.04,P<0.05);miR-330-3p inhibitor组细胞中miR-330-3p表达降低(1.03±0.01比0.43±0.05,P<0.05),迁移细胞数量和侵袭细胞数量增多(210.08±12.96比246.95±16.34和77.45±8.69比122.03±9.51,P<0.05);与miR-330-3p inhibitor比较,sh-SNHG25-1+miR-330-3p inhibitor组细胞中miR-330-3p表达增高(0.43±0.05比0.76±0.04,P<0.05),细胞侵袭和迁移数量减少(246.95±16.34比167.54±11.79和122.03±9.51比52.88±5.07,P<0.05)。与NC组相比,SMYD3组细胞中SMYD3 mRNA表达增高(1.02±0.03比2.34±0.19,P<0.05),细胞的迁移和侵袭数量增多(215.26±15.38比351.04±20.96和86.33±9.65比129.87±11.52,P<0.05);si-SMYD3组细胞中SMYD3 mRNA表达降低(1.02±0.03比0.31±0.04,P<0.05),细胞的迁移和侵袭数量减少(215.26±15.38比128.54±15.47和86.33±9.65比28.92±4.91,P<0.05)。与SMYD3组相比,SMYD3+miR-330-3p mimics组细胞中SMYD3 mRNA表达降低(2.34±0.19比0.72±0.07,P<0.05),细胞的迁移和侵袭数量减少(351.04±20.96比168.08±13.44和129.87±11.52比63.01±5.18,P<0.05)。结论下调SNHG25表达可能通过调控miR-330-3p/SMYD3轴抑制RC细胞侵袭及迁移。

上皮性卵巢癌患者SMYD3蛋白表达与化疗耐药、预后的相关性分析

目的分析上皮性卵巢癌(EOC)患者组蛋白甲基化转移酶3 SMYD3表达水平及其与化疗耐药、预后的关系。方法收集2015年11月至2017年11月经中国医科大学附属盛京医院确诊并进行手术的98份EOC组织标本与相应的98份癌旁组织标本(距肿瘤边缘4 cm处)。采用免疫组织化学染色法检测SMYD3表达水平,采用Spearman等级相关分析SMYD3与化疗耐药的相关性,Cox回归分析探讨EOC患者预后的影响因素。结果EOC组织中SMYD3高表达率明显高于癌旁组织(68.37%vs 28.57%,P<0.01);SMYD3高表达与FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、铂反应有关(P<0.05);SMYD3表达高低与化疗耐药呈正相关(r=0.662,P<0.01)。随访时间3~36个月,中位生存期26个月,其中SMYD3高表达、低表达者中位生存期分别为20、34个月,两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。单因素分析示,FIGOⅢ+Ⅳ期、肿瘤低分化、淋巴结转移、SMYD3高表达、化疗耐药EOC患者的生存时间均显著缩短(P<0.05,P<0.01);多因素Cox回归分析示,肿瘤低分化、淋巴结转移、FIGOⅢ+Ⅳ期、SMYD3高表达、化疗耐药均是影响EOC预后的独立危险因素(P<0.05)。结论SMYD3表达在EOC组织中明显高于癌旁组织,且SMYD3表达与化疗耐药呈正相关,高表达患者更容易出现复发,预后较差,SMYD3有望作为EOC诊治的生物标志物。

一种基因表达调控的表观遗传学机制研究

表观遗传学使人们可以从生物学机制层面对环境影响表型的途径进行研究。通过定量分析的方法,研究了基因MLL1对可诱导转录因子NF-kappaB下游基因的调控作用,探索组蛋白H3K4甲基化酶参与基因表达的机制。结果表明,MLL1的调控主要是通过对NF-kappaB靶基因启动子进行H3K4甲基化来实现的,表观遗传学已经成为参与调节基因转录和细胞身份的关键因素。

SMYD3在肝癌中的研究进展

组蛋白甲基转移酶SMYD3是一种具有组蛋白甲基化功能的蛋白,在转录调控中具有重要作用.研究发现SMYD3可抑制癌细胞凋亡、促进细胞增殖、侵袭及转移.越来越多的数据显示SMYD3在肝癌中高度表达,而在正常组织中表达较低甚至检测不到.SMYD3水平与肿瘤预后显著相关,另外在SMYD3基因沉默实验中发现肿瘤细胞生长受到明显抑制.可见,SMYD3与肝癌的发生、发展及预后密切相关,提示人们可以通过抑制SMYD3表达来阻碍肿瘤细胞生长、迁移并改善肿瘤预后,为未来的抗癌治疗提供新的目标与方向.

直肠癌组织中SMYD3的表达及临床意义

目的研究直肠癌组织中组蛋白甲基化转移酶3(SMYD3)的表达水平及临床意义。方法采用免疫组织化学方法和免疫蛋白印迹法(Western blot)分别检测64例直肠癌组织及对应的癌旁组织中SMYD3的表达。分析SMYD3表达与直肠癌临床病理特征及预后的关系。结果直肠癌组织中SMYD3的表达率为60.94%,高于癌旁组织的表达率14.06%,差异有统计学意义(χ^2=30.00、P<0.05)。直肠癌组织中SMYD3的表达与患者年龄、性别、组织分化程度无关(均P>0.05),与TNM分期、浸润深度及淋巴结转移相关(均P<0.05)。SMYD3阳性表达者的预后较阴性表达者差(P<0.05)。SMYD3蛋白在直肠癌组织中表达量(1.26±0.31)明显高于对应的癌旁组织(0.55±0.22)(t=11.95、P<0.05)。结论SMYD3的表达升高与直肠癌的发生发展有关,其表达水平可作为直肠癌恶性程度判定及预后评估的指标。本研究结果表明,SMYD3参与直肠癌的发生发展,本研究结果可为SMYD3作为直肠癌靶向治疗的新靶点及预后预测因子提供基础。

微小RNA-153在砷致肝细胞凋亡过程中的表达变化及其调控作用

目的探讨砷诱导内质网应激致肝细胞凋亡过程中微小RNA-153(miR-153)表达变化及调控组蛋白H3第4位赖氨酸(H3K4)甲基转移酶(SET7/9)和组蛋白H3K4一甲基化(H3K4me1)水平变化的机制。方法体外培养人正常肝细胞(L-02细胞),根据不同处理方式分为对照、砷处理、砷+阴性转染、砷+miR-153上调和砷+miR-153下调组,其中砷+阴性转染、砷+miR-153上调和砷+miR-153下调组转染质粒与转染试剂均按照3μg∶8μl进行转染。24 h后,砷处理、砷+阴性转染、砷+miR-153上调和砷+miR-153下调组再以100μmol/L亚砷酸钠(NaAsO2)作为终浓度处理24 h;对照组加入与NaAsO2等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)处理24 h。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组细胞miR-153表达水平;流式细胞术检测各组细胞凋亡和周期情况;实时无标记细胞动态分析(RTCA)仪检测细胞增殖情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞内质网标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、SET7/9及H3K4me1蛋白表达水平。结果各组细胞miR-153表达水平比较,差异有统计学意义(F=10.73,P<0.05)。与对照组[(41.10±6.08)%]比较,砷处理组miR-153表达水平[(4.35±0.20)%]明显降低(P<0.05);与砷+阴性转染组[(10.00±2.40)%]比较,砷+miR-153上调组miR-153表达水平[(157.70±42.70)%]明显升高(P<0.05),砷+miR-153下调组miR-153表达水平[(4.20±0.28)%]明显降低(P<0.05)。各组细胞总凋亡率、G1期细胞比例比较,差异有统计学意义(F=29.69、104.32,P均<0.05)。与对照组比较,砷处理、砷+miR-153上调、砷+miR-153下调组细胞总凋亡率、G1期细胞比例明显升高(P均<0.05);与砷+阴性转染组比较,砷+miR-153上调组细胞总凋亡率、G1期细胞比例明显下降(P均<0.05),砷+miR-153下调组细胞总凋亡率、G1期细胞比例明显升高(P均<0.05)。各组细胞增殖率比较差异有统计学意义(F=799.35,P<0.05)。与对照组比较,砷处理、砷+miR-153上调、砷+miR-153下调组细胞增殖率明显下降(P均<0.05);与砷+阴性转染组比较,砷+miR-153上调组细胞增殖率升高(P<0.05),砷+miR-153下调组细胞增殖率下降(P<0.05)。各组细胞SET7/9、GRP78和H3K4me1蛋白表达水平比较,差异有统计学意义(F=78.52、52.13、54.32,P均<0.05)。与对照组比较,砷处理组SET7/9、GRP78和H3K4me1蛋白表达水平明显升高(P均<0.05);与砷+阴性转染组比较,砷+miR-153上调组SET7/9、GRP78和H3K4me1蛋白表达水平明显下降(P均<0.05),砷+miR-153下调组SET7/9、GRP78和H3K4me1蛋白表达水平明显升高(P均<0.05)。结论miR-153在砷诱导内质网应激致肝细胞凋亡过程中具有重要作用,其表达和调控与SET7/9和H3K4me1水平变化有关。