口腔白斑癌变DNA损伤修复相关基因的芯片检测及表达验证

目的·研究口腔白斑(oral leukoplakia,OL)患者病损发生发展中的DNA损伤修复基因表达谱,并验证关键基因共济失调毛细血管扩张症突变基因(ataxia-telangiectasia mutated,ATM)和组蛋白2A变异体家族成员X(histone variant H2A family member X,H2AX)的mRNA和蛋白表达。方法·利用Affymetrix HTA 2.0芯片对口腔正常黏膜(n=3)、低危白斑(n=4)、高危白斑(n=4)、早期鳞状细胞癌(鳞癌,n=6)进行转录组学的高通量检测,利用基因本体数据库(Gene Ontology,GO)富集分析筛选出生物学功能为DNA损伤修复的相关基因[差异倍数(fold change,FC)对数的绝对值(|log_(2)FC|)≥2.0且P<0.05],利用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)和蛋白质印迹法分别对人正常口腔黏膜角化细胞(HOK)、白斑细胞系(Leuk1)和鳞癌细胞系(HN13)中的关键基因ATM和H2AX进行mRNA和蛋白表达验证。结果·DNA损伤修复基因在白斑发生发展中存在异常表达,从正常黏膜发展到低危白斑有7个|log_(2)FC|≥2.0的基因,从低危白斑发展到高危白斑有7个|log_(2)FC|≥2.0的基因,从高危白斑发展到鳞癌有52个|log_(2)FC|≥2.0的基因。qPCR对关键基因验证结果显示,ATM和H2AX基因在HOK细胞、Leuk1细胞和HN13细胞中的表达量均呈阶梯式升高(P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示,磷酸化H2AX(γ-H2AX)蛋白在HOK细胞、Leuk1细胞和HN13细胞中亦逐步上调(P<0.05)。ATM蛋白在Leuk1细胞中的表达比在HOK细胞中表达明显增强(P<0.05),但在HN13细胞中的表达明显降低(P<0.05)。结论·DNA损伤修复基因ATM和H2AX参与OL的发生发展。

血清miR-24-3p、H2AFX与肝癌患者临床病理特征及术后复发的关系研究

目的探讨血清微RNA(miR)-24-3p、H2A组蛋白家族成员X(H2AFX)与肝癌患者临床病理特征及术后复发的关系。方法选取2018年3月至2022年3月南通大学附属肿瘤医院收治的108例肝癌初诊患者为研究对象(肝癌组), 另选取同期于本院就诊的86例肝脏良性病变患者作为良性病变组, 行体检的64例健康者为对照组。采用荧光定量PCR法检测并分析各组受试者血清miR-24-3p、H2AFX水平, 对复发和未复发肝癌患者血清miR-24-3p、H2AFX水平进行比较, 对不同血清miR-24-3p、H2AFX水平肝癌患者临床病理特征进行比较, logistic回归分析肝癌患者术后复发的影响因素。结果至随访结束, 108例肝癌患者46例复发。对照组、良性病变组、肝癌组血清miR-24-3p水平分别为1.01±0.23、0.79±0.21、0.55±0.13, 差异有统计学意义(F=125.86, P<0.001), 良性病变组、肝癌组患者血清miR-24-3p水平均低于对照组(均P<0.05), 肝癌组患者血清miR-24-3p水平低于良性病变组(P<0.05);3组血清H2AFX水平分别为1.02±0.25、1.27±0.31、1.59±0.37, 差异有统计学意义(F=65.40, P<0.001), 良性病变组、肝癌组患者血清H2AFX水平均高于对照组(均P<0.05), 肝癌组患者血清H2AFX水平高于良性病变组(P<0.05)。miR-24-3p、H2AFX高水平与低水平肝癌患者TNM分期(χ^(2)=7.85, P=0.005;χ^(2)=6.32, P=0.012)、分化程度(χ^(2)=11.59, P=0.001;χ^(2)=9.92, P=0.002)差异均有统计学意义。与未复发肝癌患者相比, 复发患者血清miR-24-3p水平明显降低(0.44±0.12比0.64±0.14), H2AFX水平明显升高(1.87±0.42比1.38±0.33), 差异均有统计学意义(t=7.79, P<0.001;t=6.79, P<0.001)。单因素分析显示, TNM分期(OR=1.57, 95%CI为1.05~2.35, P=0.029)、分化程度(OR=2.20, 95%CI为1.20~4.02, P=0.011)、miR-24-3p水平(OR=0.66, 95%CI为0.45~0.95, P=0.026)、H2AFX水平(OR=1.73, 95%CI为1.14~2.60, P=0.009)均是肝癌患者术后复发的影响因素;多因素分析显示, TNM分期(OR=2.10, 95%CI为1.14~3.86, P=0.017)、分化程度(OR=1.58, 95%CI为1.12~2.23, P=0.009)、miR-24-3p水平(OR=0.76, 95%CI为0.63~0.92, P=0.005)、H2AFX水平(OR=1.90, 95%CI为1.20~2.99, P=0.006)均是肝癌患者术后复发的独立影响因素。结论不同血清miR-24-3p、H2AFX水平的肝癌患者肿瘤TNM分期、分化程度差异均有统计学意义, 血清miR-24-3p、H2AFX水平是肝癌患者术后复发的影响因素。