组蛋白H2A去泛素化酶MYSM1缺陷小鼠造血干细胞增殖加快且凋亡增加

目的研究组蛋白H2A去泛素化酶MYSM1缺陷(MYSM1-/-)小鼠骨髓造血干细胞(HSC)的静息状态、增殖与凋亡情况。方法分离MYSM1-/-小鼠和野生对照(MYSM1+/+)小鼠的骨髓细胞,利用免疫磁珠和流式细胞仪分选获得表面标志为lin-Sca-1+c-kit+的HSC。采用腹腔注射溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)的方法检测HSC增殖与细胞周期、采用Hoechst 33342-派若宁(pyronin)Y双染色法检测静息态HSC的比例、采用异硫氰酸荧光素标记膜联素Ⅴ/7-氨基放线菌素D(annexinⅤ-FITC/7-AAD)双染色法检测HSC凋亡。比较MYSM1-/-小鼠和MYSM1+/+对照小鼠HSC数目、细胞周期、细胞增殖和细胞凋亡的变化情况。结果 MYSM1-/-小鼠的骨髓细胞、HSC总数与野生型小鼠相比明显降低;HSC的S期比例增加、增殖加快、静息期细胞减少但功能有缺陷的MYSM1-/-HSC凋亡率显著上升。结论 MYSM1对维持HSC的静息状态有非常重要的作用,其缺陷可引起静息态的HSC大量进入S期,异常增殖的HSC凋亡增加并最终引起HSC和骨髓细胞总数减少。

组蛋白H2A去泛素化酶MYSM1抑制骨髓来源树突状细胞的抗原提呈功能及炎性细胞因子的分泌

目的研究组蛋白H2A去泛素化酶Myb样SWIRM和MPN结构域1(MYSM1)对骨髓来源树突状细胞(BMDC)吞噬、抗原提呈、炎性细胞因子mRNA水平的影响。方法分离小鼠的骨髓细胞,在体外联合粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)诱导骨髓细胞分化为DC,利用小干涉RNA(siRNA)下调MYSM1的表达,采用免疫荧光微球实验检测BMDC的吞噬功能、流式细胞术检测BMDC的抗原提呈功能、实时定量PCR检测BMDC的IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达变化,探讨MYSM1下调后DC在固有免疫应答中的作用。结果下调MYSM1的表达后,BMDC的吞噬功能无显著变化,抗原提呈功能增强,IL-6、TNF-α的表达增强。结论 MYSM1在固有免疫应答中可以抑制BMDC的抗原提呈功能及炎性细胞因子分泌能力。

组蛋白H2B单泛素化在原发性结肠腺癌中的表达及意义

目的探讨组蛋白H2B单泛素化(histone H2B monoubiquitination,u H2B)在原发性结肠腺癌中的表达及其与临床病理参数的关系。方法采用免疫组化ABC法检测116例原发性结肠腺癌及15例正常结肠黏膜组织中u H2B的表达,并复习相关文献。结果 u H2B在低分化原发性结肠腺癌中的阳性率(19.4%,6/31)显著低于高+中分化腺癌(49.4%,42/85)及正常结肠黏膜组织(86.7%,13/15),差异有统计学意义(P<0.05)。u H2B与肿瘤分化程度、Dukes分期、TNM分期及淋巴结转移相关(P<0.05),与患者性别、年龄无关(P>0.05)。结论 u H2B作为一种抑癌因子可能与原发性结肠腺癌的恶化过程密切相关。其可能会成为原发性结肠腺癌早期检测、治疗及预后评估的新分子生物学标志并应用于临床,而其在结肠腺癌中的具体作用机制仍有待进一步研究。

维甲酸诱导神经管畸形小鼠组蛋白H2BK120ub1泛素化修饰及相关基因表达变化

目的 利用维甲酸(RA)诱导C57BL/6J小鼠神经管畸形(NTDs),探讨RA对NTDs鼠胚脑、脊髓组织组蛋白H2BK120单泛素化修饰水平及神经管发育基因表达水平变化。方法 孕鼠随机对照(Con)组和RA构建的NTDs组。实验组孕鼠7.5 d灌胃RA 25 mg/kg;对照组孕鼠灌胃相同体积的香油。孕10.5 d通过体视显微镜观察胎鼠畸形及神经管发育。采用Elisa方法检测NTDs小鼠胚脑、脊组织维生素A、维甲酸浓度的变化,采用Western blot检测NTDs小鼠胚脑、髓组织H2BK120ub1蛋白的表达量变化;采用RT-PCR检测NTDs小鼠胚脑、脊组织神经管发育基因Pax6、Nestin表达变化;采用ChIP-qPCR检测NTDs小鼠胚脑、脊组织神经管发育基因Pax6、Nestin与H2BK120ub1结合变化。结果 RA组诱导NTDs胚鼠脑、脊髓组织:维甲酸及维生素A浓度相较于对照组明显增高(P<0.05);H2BK120ub1蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05);神经管发育基因Pax6、Nestin表达水平明显高于对照组(P<0.05);神经管发育基因Pax6、Nestin与H2BK120ub1结合显著增强(P<0.05)。结论 神经管发育基因Pax6、Nestin和H2BK120单泛素化在胚胎中的异常表达与维甲酸致神经管畸形存在相关性。

组蛋白H2B泛素化修饰研究进展

组蛋白翻译后修饰包括乙酰化、磷酸化、甲基化、泛素化和糖基化等。其中,组蛋白泛素化可能与基因的转录调控、异染色质的基因沉默、DNA修复等有关。笔者介绍了组蛋白H2B的泛素化机制及其意义。

罗勒多糖对缺氧条件下肝癌细胞组蛋白H3K9me2甲基化及G9a、JMJD1A表达的影响

目的:研究罗勒多糖对缺氧条件下肝癌细胞MHCC97H和MHCC97L低氧诱导因子1α(HIF-1α)组蛋白甲基转移酶G9a、去甲基化酶JMJD1A的表达及组蛋白H3K9me2甲基化水平的影响,探讨罗勒多糖对肝癌细胞表观遗传学的调节作用。方法:采用二氯化钴(Co Cl2)模拟细胞缺氧,建立肝癌细胞MHCC97H和MHCC97L体外缺氧模型,通过不同浓度罗勒多糖干预24 h,实时荧光定量PCR法检测各组肝癌细胞中HIF-1α、G9a和JMJD1A mRNA表达水平,Western-blot法检测各组肝癌细胞中HIF-1α、G9a、JMJD1A蛋白表达情况及组蛋白H3K9me2甲基化水平。结果:罗勒多糖能下调MHCC97H细胞缺氧条件下HIF-1α、G9a、JMJD1A mRNA和蛋白的表达和组蛋白H3K9me2甲基化水平以及MHCC97L细胞缺氧条件下HIF-1αmRNA和蛋白的表达和组蛋白H3K9me2甲基化水平(P<0.05)。结论:罗勒多糖对缺氧条件下不同转移潜能肝癌细胞MHCC97H和MHCC97L组蛋白H3K9me2甲基化水平均有有调节作用,其中对高转移潜能肝癌细胞MHCC97H组蛋白H3K9me2甲基化的调节与组蛋白甲基转移酶G9a和去甲基化酶JMJD1A有关,而对低转移潜能肝癌细胞MHCC97L组蛋白H3K9me2甲基化的调节可能是通过其他通路发挥作用。

27位氨基酸三甲基化的组蛋白3(H3K27me3)及其修饰酶在小鼠不同组织中分布

目的研究出生后7日龄和2月龄小鼠各组织器官中27位氨基酸三甲基化的组蛋白3(H3K27me3)的水平及其修饰酶Zeste基因增强子同源物2(EZH2)、赖氨酸特异性脱甲基酶6B(Kdm6B/JMJD3)和赖氨酸特异性脱甲基酶6A(Kdm6A/UTX)的表达。方法免疫组织化学染色法检测7日龄和2月龄小鼠脑、涎腺、背部脂肪、胸腺、肺、心脏、胃、肠、肝、睾丸、皮肤组织中H3K27me3、EZH2、JMJD3和UTX表达,实时定量PCR验证,统计分析H3K27me3水平与EZH2、JMJD3和UTX表达之间的关系。结果 H3K27me3在7日龄和2月龄小鼠被检测组织中均持续存在;EZH2在7日龄和2月龄小鼠脑、心肌、肝及皮肤中表达,但仅在2月龄小鼠涎腺、肠、睾丸、肺、脂肪组织、胸腺中持续表达;JMJD3在7日龄小鼠脑、皮肤、涎腺、心肌、肠、睾丸、肺、脂肪组织、胃中表达,但在2月龄小鼠的肺、脂肪组织、胃中不再表达;UTX在7日龄小鼠的脑、皮肤、涎腺、心肌、睾丸、肺及脂肪组织中表达,但仅在2月龄小鼠睾丸中表达;大部分免疫组织化学染色阳性的H3K27甲基调节酶相应的mRNA呈中等或较高水平表达。结论 H3K27me3在小鼠不同时期各组织中均持续存在;EZH2多存在于2月龄小鼠脑、皮肤、涎腺、心肌、肠、睾丸、肺、脂肪组织、肝、胸腺;JMJD3、UTX多存在于7日龄小鼠脑、皮肤、涎腺、心肌、睾丸、肺、脂肪组织;H3K27me3分布与EZH2的表达之间无明显一致关系,与JMJD3或UTX不存在明显反向分布关系,EZH2与JMJD3或UTX的表达分布也不存在反向关系。提示EZH2、JMJD3和UTX在小鼠出生后多种组织中可能起重要作用;在体内H3K27me3水平及其修饰酶可能受多因素控制,以完成复杂的生理功能。

组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D调控H9c2细胞中HIF-1α/VEGF通路(英文)

组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D(histone-lysine N-methyltransferase 2D,KMT2D)作为主要的组蛋白3第4位赖氨酸(H3K4)甲基转移酶,在调控胚胎发育、组织分化、代谢和肿瘤抑制方面发挥重要作用。在小鼠体内,敲除Kmt2d会导致严重的心脏发育缺陷最终造成胚胎期死亡。低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)作为调节细胞应对低氧的关键转录因子,能够调控多种下游基因转录。有相关研究揭示,表观遗传调控者能够调节HIF-1α的稳定性和活性。同样,作为表观遗传调控者的组蛋白甲基转移酶KMT2D是否参与低氧条件下HIF-1α对下游基因的调控,目前仍未知。在本研究中,观察在Kmt2d正常或缺乏的情况下,心肌细胞H9c2对低氧环境的应答反应。结果显示,与常氧条件相比,低氧状态下HIF-1α、组蛋白乙酰化酶P300、KMT2D及其介导的H3K4一甲基化(H3K4 mono-methylation,H3K4me1)的蛋白质水平增加(P<0.05);HIF-1α下游基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,Vegf)的mRNA表达水平明显上调(P<0.01)。染色质免疫共沉淀实验(chromatin immunoprecipitation assay,ChIP-qPCR)检测结果显示,H3K4me1和组蛋白3第27位赖氨酸乙酰化(histone 3 lysine 27 acetylation,H3K27ac)在Vegf基因启动子区域的结合丰度明显增加(P<0.05)。低氧条件下沉默Kmt2d之后,H3K4me1蛋白水平和Vegf的mRNA表达下降(P<0.05)。本研究表明,低氧条件下KMT2D参与调控HIF-1α和下游基因Vegf的表达。

组蛋白甲基化抑制剂UNC0638对水牛转基因细胞外源基因表达的影响

本研究旨在探讨不同浓度的组蛋白甲基化抑制剂UNC0638对转基因水牛成纤维细胞外源基因表达水平的影响,为外源基因表达机制研究及提高转基因水牛生产效率提供理论依据。试验首先使用不同浓度的UNC0638(0(对照组)、0.5、1.5、2.5、5.0μmol·L^(-1))处理水牛胎儿成纤维细胞(BFFs)8d,绘制细胞生长曲线,并在UNC0638(0(对照组)、0.5、1.5、2.5μmol·L^(-1))处理BFFs 48h后,检测细胞核型,同时利用细胞免疫荧光技术分析组蛋白H3K9me2甲基化水平,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测UNC0638对水牛转基因细胞外源基因表达效率的影响。结果表明:1)BFFs经不同浓度UNC0638处理后,生长曲线与对照组相似,均呈"S"形分布,0.5、1.5、2.5μmol·L^(-1 )UNC0638处理组与对照组相比细胞增殖效率没有发生显著变化,5.0μmol·L^(-1)UNC0638抑制BFFs增殖;2)各处理组细胞核型正常率与对照组间差异不显著;3)此外,UNC0638处理组的细胞组蛋白H3K9me2甲基化水平显著低于对照组(P<0.05);4)UNC0638(0、0.5、1.5、2.5μmol·L^(-1))处理水牛转基因胎儿成纤维细胞24h,2.5μmol·L^(-1)组细胞eGFP的相对表达量显著高于对照组(P<0.05);处理48h,0.5、1.5、2.5μmol·L^(-1)组eGFP的表达量与对照组相比显著提高(P<0.05)。综上表明,UNC0638可有效降低水牛成纤维细胞组蛋白H3K9me2甲基化水平并提高水牛转基因细胞外源基因的表达效率。

组蛋白H2B单泛素化参与植物生长发育和逆境响应的研究进展

组蛋白H2B单泛素化(histone H2B monoubiquitination,H2Bub1)是组蛋白的一种重要的修饰形式,主要通过调节靶基因的转录来参与调控植物的生长发育过程以及逆境胁迫响应。本文综述H2Bub1的修饰过程,其在调控植物的种子休眠、叶和根的生长、生物钟、开花时间和花药发育中的作用以及在植物抵抗病原菌的防卫反应和盐胁迫、干旱胁迫的逆境响应中的功能,并对H2Bub1的功能研究进行了讨论和展望。

赖氨酰氧化酶样蛋白2在Col4α3/Alport小鼠中导致肾纤维化

赖氨酰氧化酶样蛋白2(lysyl oxidase like-2,LOXL2)是一种胺氧化酶,在细胞内和细胞外均具有重要功能。在细胞外,LOXL2促进胶原蛋白和弹性蛋白交联;而在细胞内,已报道LOXL2可修饰组蛋白H3,稳定SNAIL,并降低细胞极性。尽管LOXL2促进肝和肺纤维化,但目前我们对其在肾纤维化中的作用知之甚少。Cosgrove等探讨了LOXL2是否影响COL4A3^-/-Alport小鼠的肾脏疾病。他们用选择性LOXL2小分子抑制剂或溶剂处理这些小鼠,并评估肾小球硬化和纤维化、白蛋白尿、血尿素氮、寿命、促纤维化基因表达和肾小球基底膜的超微结构;还观察了肾小球基底膜中层粘连蛋白α2的沉积和肾小球毛细血管的系膜丝足侵入(mesangial filopodial invasion)。

NSD2及H3K36甲基化在小鼠胚胎干细胞向神经细胞分化中的表达

目的在体外建立小鼠胚胎干细胞(m ESCs)向神经细胞(NCs)方向分化体系,观察组蛋白甲基化转移酶NSD2及其相关的组蛋白修饰H3K36二甲基化(H3K36me2)、H3K36三甲基化(H3K36me3)在NCs发育过程中的表达变化。方法用维甲酸(RA)诱导m ESCs向NCs方向分化,通过观察细胞形态和RT-q PCR检测分子标志物来验证m ESCs诱导分化效果,用Western Blot方法检测NSD2以及其相关的组蛋白甲基化修饰在诱导分化过程中的蛋白水平变化。结果与m ESCs状态相比,在m ESCs向NCs方向分化的过程中,NSD2蛋白表现出先升高后下降的变化,差异具有统计学意义(均P<0.05),而其相关的组蛋白甲基化标记H3K36me2和H3K36me3蛋白表达总体变化不大,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ESCs向NCs分化过程中NSD蛋白表达量的改变与相关组蛋白修饰变化趋势不完全一致,组蛋白甲基化修饰总量的变化比较小,这可能是因为同时受到其他甲基化转移酶与去甲基化酶综合作用的结果。

组蛋白赖氨酸甲基转移酶2B的研究进展

组蛋白赖氨酸甲基转移酶2B(histone lysine-K specific methyltransferase 2B,KMT2B),也称为混合谱系白血病2(mixed lineage leukemia 2,MLL2)蛋白,属于哺乳动物组蛋白H3赖氨酸4(histone H3 lysine-K 4,H3K4)特异性的甲氨基转移酶家族,在广泛的细胞过程中发挥关键作用。KMT2B蛋白本身及其介导转录的某些特定基因启动子、强化子或附近顺式调节位点上的H3K4甲基化(H3K4me)的修饰,均能引起表观遗传修饰异常的改变,从而通过调控基因的转录与表达进而影响生长、发育。随着国内外近年来对KMT2B蛋白研究进一步的深入,发现KMT2B与早期生长迟缓、胚胎死亡、自主运动的控制和儿童肌张力障碍的发病机制有关。此外,MLL家族的MLL2在肝细胞癌、白血病、结肠直肠癌和神经胶质瘤等肿瘤里高表达,表现出有促肿瘤功能。在这篇综述中,我们讨论了KMT2B基因、KMT2B蛋白特征和生物学功能,还强调了基因调控、组织发育、先天性疾病和肿瘤疾病的影响,以期为相关疾病预防和诊治提供新的思路。

小鼠MYSM1基因稳定敲除的间充质干细胞系C3H10T 1/2的建立及其体外免疫调节作用

目的:本研究旨在构建小鼠组蛋白H2A去泛素化酶MYSM1基因敲除的间充质干细胞系(mesenchymal stem cells,MSC),并初步探讨MYSM1基因敲除后MSC免疫学特性的变化。方法:通过CRISPR-Cas9技术对小鼠间充质干细胞系(C3H10T 1/2)MYSM1基因进行特异性基因敲除,再采用流式细胞术、定量PCR和蛋白印迹(Western blot)技术检测基因敲除情况。为检测MYSM1敲除对MSC免疫调节能力的影响,将MYSM1基因敲除的MSC上清加入脾脏淋巴细胞培养体系中,在镜下观察其对淋巴细胞增殖的调节作用,并进一步采用定量PCR检测淋巴细胞内炎性因子白介素4,干扰素γ、白介素17A和Foxp3的表达情况。结果:流式细胞术、定量PCR及Western blot的鉴定结果表明,CRISPR-Cas9技术稳定敲除了MSC细胞系内MYSM1基因。敲除了MYSM1基因之后的MSC上清显著抑制刀豆蛋白A诱导的淋巴细胞增殖及炎性因子分泌(P<0.05)。结论:本研究成功地构建了小鼠MYSM1稳定敲除的间充质干细胞系,同时发现MYSM1敲除后MSC体外免疫抑制作用增强,此相关发现为深入研究MYSM1基因的功能,探索基因修饰MSC对免疫相关性疾病的治疗奠定了基础。

组蛋白H2B单泛素化参与DNA损伤修复的调控机制

作为一种重要的组蛋白修饰形式,H2B的单泛素化(uH2B)广泛地参与DNA复制、基因的表达与转录、DNA损伤修复及异染色质维持等生物学事件.在裂殖酵母中,H2B的单泛素化发生在其羧基端的119位赖氨酸(K119),并依赖于Rhp6/Bre1泛素连接酶复合体.研究表明,uH2B通过破坏H2A/H2B二聚体的结构促进mRNA在转录过程中的延伸,同时促进H3K4的三甲基化激活基因的表达及参与DNA损伤修复.本研究发现,Rhp6能够对核糖核苷酸还原酶抑制基因(Spd1)位点进行活跃的染色质修饰,促进H2B的单泛素化并抑制基因表达,从而促进dNTP的合成并调控DNA复制及损伤修复.重要的是,本研究发现,该过程不依赖于H3K4而决定于H3K9的三甲基化.同时uH2B直接在DNA双链断裂位点富集,通过改变染色质的结构参与DNA损伤修复,该过程中可能存在其他更为复杂的分子机制.

EZH2和H3K27me3的表达对食管癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的:通过转染Zeste同源物增强子2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)过表达或者敲低载体,探讨EZH2和Lys27位点三甲基化组蛋白H3(histone H3 methylated Lys27,H3K27me3)对食管麟状细胞癌(esophageal squamous cell cancer,ESCC)细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:应用实时荧光定量PCR、Western blotting法检测ESCC细胞株KYSE30、KYSE170、TE1、Eca109中EZH2 mRNA水平,以及ESCC细胞过表达或者敲低EZH2对H3K27me3表达水平的影响。用划痕实验及Transwell侵袭实验分析过表达或者敲低EZH2后ESCC细胞的迁移侵袭能力。用实时荧光定量PCR法分析ESCC细胞过表达及敲低EZH2对MMPs mRNA水平的影响。结果:食管癌Eca109及TE1细胞中EZH2和H3K27me3 mRNA和蛋白水平明显高于KYSE30及KYSE170细胞(P<0.05)。过表达EZH2的食管癌KYSE30及KYSE170细胞H3K27me3蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),敲低EZH2后Eca109及TE1细胞H3K27me3蛋白的表达水平明显降低(P<0.05)。过表达EZH2后,KYSE30及KYSE170细胞的穿膜数目明显增多[(281.33±4.10)、(241.67±4.04)vs(132.00±4.00)、(105.33±3.51)个,均P<0.05]、迁移距离明显增大[(63.6±1.2)、(62.5±2.5)vs(23.0±2.3)、(21.2±1.0)μm,P<0.05]。敲低EZH2后Eca109及TE1细胞的穿膜数目显著减少(均P<0.05),转染sh EZH2后Eca109及TE1细胞迁移的距离明显减小(均P<0.05)。结论:EZH2可增加靶基因启动子上组蛋白H3第27位赖氨酸的三甲基化,并增强ESCC细胞的迁移和侵袭能力。

Suv39 H2在胆管癌组织中的转录表达及临床意义

目的探讨Suv39H2与胆管癌发生的关系及其临床意义。方法用RT-PCR检测35例胆管癌组织及28例正常胆管组织Suv39H2mRNA表达,并与肿瘤分化程度、有无转移作对比研究。结果胆管癌中Suv39H2mRNA阳性表达率为71.43%(25/35),正常胆管组织中阳性表达率为32.14%(9/28),差异有统计学意义(P<0.01)。胆管癌中Suv39H2mRNA阳性表达与分化程度、有无转移无关,差异无统计学意义(P>0.05)。结论Suv39H2参与胆管癌发生早期阶段。

uH2B在原发性结肠腺癌中的表达及其与临床病理参数的关系

目的探讨原发性结肠腺癌组织中组蛋白H2B单素泛化(uH2B)的表达水平及与患者临床病理参数的关系。方法选取2013年1月—2016年1月本院胃肠外科手术切除的83例结肠腺癌组织标本、癌旁组织,既往收集的20例正常结肠组织,采用免疫组化染色观察各组组织标本中uH2B蛋白的表达程度,并分析与原发性结肠腺癌患者临床病理参数的关系。结果结肠癌组织标本中uH2B蛋白的阳性表达率46.99%,低于癌旁组织的83.13%、正常结肠黏膜组织的90.00%,差异均具有统计学意义(P<0.05);癌旁组织和正常结肠黏膜组织中uH2B蛋白的阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05);结肠癌组织标本中uH2B蛋白的阳性表达率与肿瘤的TNM分期、分化程度、淋巴结转移相关(P<0.05),与患者的年龄、性别、肿瘤浸润深度、肿瘤最大径的关系不显著(P>0.05)。结论结肠癌组织标本中uH2B蛋白表达率降低,并且与患者的肿瘤的TNM分期、分化程度、淋巴结转移具有相关性。

组蛋白H2A/H2B泛素化参与基因转录调控及肿瘤发生发展

组蛋白H2A和H2B泛素化由一系列酶类催化介导,在基因转录调控当中存在重要的作用。H2A泛素化及相关酶类可能主要通过调节RNA聚合酶Ⅱ的延伸参与基因转录抑制,H2B泛素化及相关酶类对基因转录调控既存在抑制作用又具有促进作用,而且其在肿瘤发生发展中具有重要的调节作用。

氨苄西林通过调控泛素样含PHD和环指域蛋白2及组蛋白H3赖氨酸残基甲基化水平的抗结肠癌作用研究

目的探索氨苄西林通过调控泛素样含PHD和环指域蛋白2(UHRF2)和组蛋白H3赖氨酸残基(H3K9)甲基化水平的抗结肠癌作用机制。方法将SW480、HT29细胞均分为对照组和实验组。实验组给予含1μg·mL^(-1)氨苄西林的RPMI培养基进行培养;对照组给予不含氨苄西林的RPMI培养基进行培养。用蛋白质印迹法检测UHRF2和H3K9甲基化水平,用CCK-8实验法检测细胞的增殖能力,用划痕实验法检测细胞的迁移能力,用Transwell实验法检测细胞的侵袭能力。结果在SW480细胞中,实验组和对照组的UHRF2蛋白相对表达水平分别为102.36±10.12和698.67±36.92,H3K9二甲基化(H3K9me2)蛋白相对表达水平分别为406.59±20.97和721.52±36.20,H3K9三甲基化(H3K9me3)蛋白相对表达水平分别为219.78±25.88和821.97±50.61,细胞凋亡率分别为(45.28±6.35)%和(26.18±3.25)%,细胞划痕愈合率分别为(9.47±3.54)%和(26.29±4.29)%,侵袭细胞数分别为(29.23±3.78)和(39.52±4.15)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在HT29细胞中,实验组和对照组的UHRF2蛋白相对表达水平分别为160.85±29.74和551.79±39.76,H3K9me2蛋白相对表达水平分别为385.26±46.98和601.30±29.86,H3K9me3蛋白相对表达水平分别为496.85±36.22和725.91±53.62,细胞凋亡率分别为(50.35±7.43)%和(29.45±5.65)%,细胞划痕愈合率分别为(6.54±4.16)%和(21.14±5.74)%,侵袭细胞数分别为(32.22±3.62)和(41.63±5.59)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论氨苄西林可能通过下调UHRF2蛋白水平及H3K9甲基化水平,从而抑制结肠癌细胞的生长。