胎膜早破与组蛋白H4乙酰化的关系及对妊娠结局的影响

目的探讨胎膜早破与组蛋白H4乙酰化的关系及对妊娠结局的影响。方法选取我院2018年6月到2019年6月胎膜早破患者60例作为观察组,选取60例同时段无胎膜早破患者为对照组,利用Western Blotting分析组蛋白H4乙酰化蛋白H4K5、H4K8表达强弱,同时利用H4K5、H4K8蛋白表达量目的蛋白的灰度值与内参蛋白H4灰度值的相对比值表示;观察两组产妇分娩方式的差别,产后发生出血、感染等并发症的概率;两组产妇新生儿结局。结果观察组患者组蛋白H4乙酰化表达量远高于比较足,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组产妇自然分娩率(13.33%)明显低于对照组患者(65.00%),而剖宫产、阴道助产及难产发生概率明显低于对照组产妇(P<0.05);观察组产妇产后并发症发生概率(20.00%)明显高于对照组患者(6.67%)(P<0.05);观察组患者新生儿出现早产等并发症概率(76.67%)明显高于比较组新生儿(36.67%),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论组蛋白H4乙酰化高表达可能是胎膜早破的发病机制,胎膜早破导致母婴并发症的增加,探究胎膜早破与组蛋白H4乙酰化之间的相关性,并分析胎膜早破对妊娠结局的影响,为产妇孕前、孕期的检查,预防胎膜早破的发生提供指示指标,提高母婴的安全性。

参芪补肺汤对慢性阻塞性肺疾病肺气虚证大鼠气道平滑肌中乙酰化组蛋白H4、HDAC2和NF-μB p65表达的影响

目的观察参芪补肺汤对慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺气虚证大鼠支气管平滑肌(ASM)中乙酰化组蛋白H4、组蛋白去乙酰化酶-2(HDAC2)和核因子-κB p65(NF-κB p65)表达的影响。方法取SD大鼠40只,随机分为正常组、模型组、参芪补肺汤组、氨茶碱组,每组10只。运用气管内注射脂多糖加烟熏28 d的方法建立COPD肺气虚证大鼠模型。光镜下观察肺组织的病理形态学变化,运用图像分析法测量小气道管壁和ASM的厚度,采用免疫组化和Western blot方法检测大鼠ASM中乙酰化组蛋白H4、HDAC2和NF-κB p65的蛋白表达,实时荧光定量PCR方法检测大鼠ASM组织中HDAC2 m RNA和NF-κB p65 m RNA的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠气道管壁和ASM厚度明显增高(P<0.05);与模型组比较,参芪补肺汤组和氨茶碱组气道管壁和ASM厚度明显降低(P<0.05);参芪补肺汤组与氨茶碱组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,模型组乙酰化组蛋白H4的蛋白表达、NF-κB p65 m RNA和蛋白的表达明显增高(P<0.05);HDAC2m RNA和蛋白的表达均明显降低(P<0.05);与模型组比较,参芪补肺汤组和氨茶碱组乙酰化组蛋白H4的蛋白表达、NF-κB p65 m RNA和蛋白的表达明显增高(P<0.05);HDAC2 m RNA和蛋白的表达明显降低(P<0.05)。参芪补肺汤组与氨茶碱组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论参芪补肺汤可抑制COPD肺气虚证模型大鼠ASM增殖,其机制与其提高HDAC2的表达,使组蛋白H4去乙酰化,从而抑制NF-κB p65的表达有关。

曲古菌素A对胃癌细胞系BGC-823组蛋白H4乙酰化水平及细胞凋亡的作用

[目的]探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古菌素A(TSA)对胃癌细胞系BGC-823中组蛋白H4乙酰化水平及细胞凋亡的影响。[方法]免疫细胞化学法检测TSA干预前后胃癌细胞系BGC-823中乙酰化组蛋白H4的表达,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率。[结果]TSA干预后胃癌细胞系BGC-823中乙酰化组蛋白H4的表达水平明显升高,乙酰化组蛋白H4阳性细胞数从1.38±1.02上升至31.6±1.02,与未干预相比两者表达有显著性差异(P<0.01),流式细胞仪分析显示G2期细胞增多,从0.01%上升至19.17%,细胞凋亡率增加到29.9%。[结论]TSA可促进胃癌细胞系BGC-823中乙酰化组蛋白H4的表达,诱导BGC-823细胞凋亡。

CREB结合蛋白调控组蛋白H4乙酰化修饰参与糖尿病雌鼠诱导胎鼠神经管畸形发生机制的研究

目的探讨CREB结合蛋白(Cbp)调控组蛋白H4赖氨酸位点乙酰化修饰参与DM雌鼠诱发胎鼠神经管缺陷(NTDs)的发生机制。方法体外构建高糖处理小鼠神经干细胞(NE-4C)模型及T1DM雌鼠诱发NTDs模型。建立葡萄糖浓度为5 mmol/L的正常对照组(Con组)和25 mmol/L高糖组(HG组)处理NE-4C细胞,HG组分别以DMSO(HG+DMSO组)、1μmol/L的Cbp/P300抑制剂(C646)(HG+C646+1组)、5μmol/L的C646(HG+C646+5组)、5μmol/L的P300/PCAF抑制剂藤黄酚(HG+Gar+5组)、25μmol/L的藤黄酚(HG+Gar+25组)处理。将NE-4C细胞分为转染对照siRNA组(Con-si组)、转染第1个Cbp的siRNA质粒(si-Cbp-1组)、转染第2个Cbp的siRNA质粒(si-Cbp-2组)、共转染第1及第2个Cbp的siRNA质粒(si-Cbp-1+2组)。雌鼠分为正常对照(NC)组(n=38)和STZ构建的TIDM组(n=54)。采用Western blot、RT-PCR、免疫荧光染色检检测。结果 HG组Cbp的mRNA表达和NE-4C细胞增殖能力较Con组升高(P<0.05或P<0.01)。HG+C646+5组组蛋白H4K5/8/12/16ac蛋白水平低于HG+DMSO、HG+C646+1组(P<0.05或P<0.01)。在4 h时,HG+C646+5组NE-4C细胞增殖能力低于HG组(P<0.05)。与Con-si组比较,si-Cbp-1、si-Cbp-2、si-Cbp-1+2组H4K5/8/12/16ac蛋白、Cbp mRNA水平降低(P<0.05)。与NC组比较,T1DM组Cbp的mRNA、组蛋白H4K5/8/12/16ac修饰水平升高(P<0.01)。结论高糖导致Cbp调控组蛋白H4乙酰化修饰异常和NE-4C细胞增殖可能是诱发NTDs的机制之一,Cbp抑制剂可改善组蛋白H4乙酰化水平和NE-4C细胞增殖。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidin/SAHA体外抑制人卵巢浆液性囊腺癌细胞的实验研究

目的:卵巢恶性肿瘤是妇科三大恶性肿瘤之一,其死亡率居妇科恶性肿瘤第一位。目前手术是治疗卵巢恶性肿瘤的主要方法,且术后常辅以紫杉醇和铂类为主的化疗,但化疗常常由于肿瘤细胞发生耐药而导致化疗失败。因此对于卵巢癌的治疗迫切需要寻找新的突破。方法:是对体外培养人卵巢浆液性囊腺癌上皮细胞,取对数生长期细胞接种于96孔细胞培养板上,每组设6个复孔。采用全定量PCR方法检测p21基因mRNA含量的表达。结果:体外实验证实组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)能够诱导肿瘤细胞周期阻滞于G0/G1期和/或G2/M期,从而抑制肿瘤细胞的增殖率,具有很强的临床应用价值。结论:本次实验探讨不同浓度下的组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidin、SAHA在人卵巢浆液性囊腺癌细胞系的作用和机制,为巢浆液性癌的治疗提供新的思路。

组蛋白乙酰化调控异常与大鼠抑郁行为的关系研究

目的研究组蛋白乙酰化与慢性不可预见刺激(chronic unpredictable stress,CUS)致大鼠抑郁行为的关系。方法30只♂Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为对照组和模型组,采用孤养结合CUS方式连续刺激28 d建立大鼠抑郁症模型;以开场实验和强迫游泳实验评价大鼠抑郁行为;采用实时荧光定量PCR法检测大鼠前脑皮层和海马组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)mRNA表达;采用Western blot法检测大鼠前脑皮层和海马组蛋白H3(histone3,H3)、组蛋白H4(histone 4,H4)、乙酰化组蛋白H3(actylation-histone 3,ac H3)及乙酰化组蛋白H4(actylation-histone4,ac H4)蛋白表达水平。结果与对照组大鼠相比,模型组大鼠开场实验得分明显降低(P<0.01)、强迫游泳实验不动时间明显延长(P<0.01)、前脑皮层和海马HDAC2 mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.01)、组蛋白H3和组蛋白H4蛋白表达均无明显差异、ac H3及ac H4蛋白水平均明显降低(P<0.01)。结论 CUS诱导大鼠产生抑郁样行为改变,其机制可能与脑内HDAC表达增高致组蛋白乙酰化修饰水平降低有关。

参芪补肺汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠支气管平滑肌增殖中乙酰化组蛋白H4和NF-κBp65表达的影响

目的:观察参芪补肺汤对慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺气虚证大鼠支气管平滑肌(ASM)增殖中乙酰化组蛋白H4和NF-κBp65表达的影响。方法:将40只SD大鼠随机分为正常组、中药组、氨茶碱组、模型组,每组各10只。采用气管内滴注脂多糖加烟熏28天的方法建立COPD肺气虚证大鼠模型。光镜下观察肺组织的病理形态学变化,运用图像分析法测量小气道管壁和ASM的厚度,采用免疫组化和蛋白质印迹法(Western blot)检测大鼠ASM中乙酰化组蛋白H4的表达。采用免疫组化、实时荧光定量PCR和Western blot方法检测大鼠ASM中NF-κBp65的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠气道管壁和ASM的厚度明显增厚(P<0.05),乙酰化组蛋白H4的蛋白表达与NF-κBp65mRNA和蛋白的表达明显增高(P<0.05),中药组与氨茶碱组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,中药组和氨茶碱组大鼠小气道管壁和ASMC的厚度均明显降低(P<0.05),乙酰化组蛋白H4的蛋白表达与NF-κBp65mRNA和蛋白的表达均明显降低(P<0.05),中药组与氨茶碱组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:参芪补肺汤可抑制COPD肺气虚证模型大鼠ASM增殖,其机制与通过降低乙酰化组蛋白H4的表达,从而抑制NF-κBp65表达有关。

羔羊卵母细胞组蛋白H4K12乙酰化对其发育能力的影响

为探讨羔羊卵母细胞体外发育能力较低的原因,本实验以4~6周龄道赛特与小尾寒羊杂交羔羊和成年绵羊卵母细胞为实验材料,比较羔羊与成年羊卵母细胞第一极体排出率、孤雌激活后卵裂率、囊胚发育率及生发泡期（GV期）卵母细胞H4K12乙酰化水平的差异。结果表明：羔羊卵母细胞体外成熟后第一极体排出率显著低于成年羊（55.5%vs.70.6%）（P〈0.05）;孤雌激活后卵裂率（61.9%）和囊胚发育率（13.1%）与成年羊（78.2%和35.6%）相比差异显著（P〈0.05）;羔羊GV期卵母细胞H4K12乙酰化水平也显著低于成年羊（P〈0.05）。羔羊GV期卵母细胞H4K12乙酰化水平显著降低,很可能是羔羊卵母细胞体外发育能力降低的重要原因之一。

前列腺癌中巴豆酰化修饰的测定及与肿瘤分期和分级的相关性

目的·初步探讨巴豆酰化修饰是否可以作为前列腺癌诊断的肿瘤标志物及其与前列腺癌分期和分级的相关性。方法·含有不同临床分期、分级的前列腺癌组织芯片73例,正常前列腺组织7例,利用免疫组织化学技术分别检测各样本中巴豆酰化修饰和组蛋白H4乙酰化修饰水平(H-Score评分),并进行组间比较和相关性分析。结果·巴豆酰化修饰水平在前列腺癌组织中较低,与正常前列腺组织比较,差异有统计学意义(P=0.001);而组蛋白H4乙酰化修饰水平组间比较差异无统计学意义(P=0.704)。不同临床分期、分级的前列腺癌组间比较,巴豆酰化修饰和组蛋白H4乙酰化修饰水平差异均无统计学意义(P>0.05)。H4乙酰化修饰与前列腺癌的分期、分级无相关性(P>0.05);巴豆酰化修饰与前列腺癌的分期无相关性(P=0.887),与前列腺癌分级呈正相关(r=0.493,P=0.000)。结论·相比较组蛋白H4乙酰化修饰,巴豆酰化修饰可以作为一种更好的诊断前列腺癌的肿瘤标志物。

一种微小染色质免疫共沉淀方法的建立

染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation assay,ChIP)是目前研究蛋白与DNA相互作用的强有力的技术之一。然而传统的ChIP实验方法的最大缺陷是要求大量的细胞数,这限制了它应用于少量细胞数的样品。在传统ChIP实验的基础上综合国外文献建立了一种能在少量细胞样品中进行的染色质免疫共沉淀实验,称之为微小染色质免疫共沉淀(miniChIP)。并通过对诱导前后的MEL细胞中表达的β珠蛋白基因簇组蛋白H4乙酰化(acH4)的研究,证实了其可靠性和特异性。结果显示:高敏位点HS2和活跃基因β-maj的启动子区域存在一定的组蛋白H4乙酰化水平,DMSO诱导后显著增加,而不活跃基因Ey的启动子区域则检测到极低水平的组蛋白H4乙酰化,且诱导后无明显变化。

基于H4K16ac介导的细胞自噬探讨电针血清对脑缺血后神经元的保护机制

目的从组蛋白H4第16位赖氨酸的乙酰化(H4K16ac)对细胞自噬调控的角度,研究电针血清对脑缺血后神经元的保护机制。方法电针血清的制备:建立改良的大鼠急性局灶性脑缺血再灌注模型,在造模成功后5 min和16 h进行电针干预,针刺人中、百会穴,并接电针治疗仪治疗30 min。第2次电针治疗后7 h取大鼠血清备用。细胞实验:将大鼠大脑皮质神经元细胞分为对照组、模型组、电针组、组蛋白乙酰转移酶MOF(hMOF)抑制剂组与细胞沉默调节蛋白1(Sirt1)抑制剂组,除对照组外,其余各组剥夺氧、糖3 h后再复氧、复糖24 h,并于复氧、复糖的同时给予2%电针血清、15 g/L的hMOF siRNA及8 g/L的Sirt1 siRNA处理。CCK-8检测细胞处理48 h后细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞处理48 h后细胞凋亡情况;Western blot检测细胞中hMOF、Sirt1、组蛋白H4第16位赖氨酸的乙酰化(H4K16ac)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、自噬相关蛋白Beclin1表达;qPCR检测hMOF、Sirt1、Beclin1 mRNA表达;染色质免疫沉淀技术(ChIP)检测各组神经元细胞的H4K16ac在自噬靶基因Beclin1启动子区的结合程度。结果与模型组相比,电针干预可使细胞增殖活性提高(P<0.05),细胞凋亡率下降(P<0.05)。与模型组比较,电针组和hMOF抑制组剂均可降低hMOF和H4K16ac蛋白的表达(P<0.05),升高Sirt1、LC3-II和Beclin1的表达(P<0.05);而与Sirt1抑制剂组差异无统计学意义(P>0.05)。qPCR结果显示,与模型组比较,电针组和hMOF抑制组剂均可抑制hMOF mRNA表达(P<0.05),而Sirt1和Beclin1 mRNA表达上调(P<0.05)。且与模型组相比,电针组在自噬靶基因Beclin1启动子区域中H4K16ac的富集量增加(P<0.05)。结论电针血清对糖-氧剥夺再灌注损伤神经元细胞具有保护作用,其抗脑缺血再灌注损伤的作用可能是电针通过调节组蛋白H4K16ac的表达进而调控细胞自噬,从而减轻脑缺血再灌注损伤,发挥对神经细胞的保护作用。