胃癌组蛋白H3第4位赖氨酸的三甲基化修饰相关长链非编码RNA预后模型的构建与验证

目的 探索胃癌组蛋白H3第4位赖氨酸的三甲基化(trimethylation of lysine 4 on histone H3,H3K4me3)修饰相关长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)特征,构建相关预后模型并预测胃癌免疫治疗疗效。方法 从癌症基因组图谱数据库下载胃癌相关转录组测序数据和对应的患者临床资料,通过构建H3K4me3相关调节因子基因与LncRNA的共表达网络识别H3K4me3修饰相关LncRNA,并将癌症基因组图谱数据库中370例符合筛选标准的胃癌患者样本(整体组)按1:1随机抽样划分为训练组(n=185)和验证组(n=185)。随后基于单因素Cox回归、Lasoo回归分析构建H3K4me3相关LncRNA预后风险评分模型并进行内部验证。Kaplan-Meier生存分析和受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)被用于验证模型的预测性能。通过单因素和多因素Cox回归分析评估风险评分等临床指标的预后预测价值。结合风险评分、年龄和肿瘤TNM分期构建预测胃癌患者总生存率的列线图模型,ROC曲线与校准图被用于评估列线图的预测准确性。借助共识聚类识别异质性聚类亚群并进行免疫治疗疗效预测。结果 基于共表达网络关系识别了14个具有预后价值的H3K4me3相关LncRNA并构建了相关风险模型及评价体系。根据训练组预后风险评分模型获得的中位风险评分将训练组、验证组和整体组胃癌患者划分为高、低风险,Kaplan-Meier生存曲线显示低风险患者的总体生存情况要优于高风险患者(P<0.05)。此外,该模型在训练组中预测胃癌患者1、3、5年总生存率的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.708、0.730、0.770,在验证组中分别为0.690、0.648、0.713,而在整体组中分别为0.697、0.670、0.724。多因素Cox回归分析显示基于H3K4me3相关LncRNA构建的风险评分模型是预测胃癌患者预后的独立因素(P<0.001)。构建的列线图预测胃癌患者1、2、3年总生存率的AUC分别为0.727、0.780、0.717,且其校准曲线与理想曲线相接近。基于共识聚类算法进一步识别了2种具有异质性免疫特征的H3K4me3-LncRNA亚群,其中亚组Ⅱ具有更高的免疫细胞浸润水平和更强的免疫应答潜力,并对5-氟尿嘧啶、奥沙利铂等显示出更高的药物敏感性,而亚组Ⅰ则可能对磷脂酰肌醇3-激酶特异性抑制剂具有更高的敏感性。结论 本研究构建了一个H3K4me3-LncRNA风险评分模型以预测胃癌患者的预后,并揭示了其异质性微观特征及在预测免疫治疗疗效方面的潜在价值。

精子发生过程中组蛋白H4乙酰化修饰

精子发生过程中,核心组蛋白N末端区域的某些赖氨酸残基会发生可逆乙酰化。真核细胞中最保守的核心组蛋白H4的乙酰化只限制在四个赖氨酸上(残基5、8、12和16)。研究精子发生过程中乙酰化组蛋白H4,阐述其在组蛋白沉积、基因转录及组蛋白取代等事件中的分子机制,可为进一步研究精子发生的调控机制提供理论依据。

CREB结合蛋白调控组蛋白H4乙酰化修饰参与糖尿病雌鼠诱导胎鼠神经管畸形发生机制的研究

目的探讨CREB结合蛋白(Cbp)调控组蛋白H4赖氨酸位点乙酰化修饰参与DM雌鼠诱发胎鼠神经管缺陷(NTDs)的发生机制。方法体外构建高糖处理小鼠神经干细胞(NE-4C)模型及T1DM雌鼠诱发NTDs模型。建立葡萄糖浓度为5 mmol/L的正常对照组(Con组)和25 mmol/L高糖组(HG组)处理NE-4C细胞,HG组分别以DMSO(HG+DMSO组)、1μmol/L的Cbp/P300抑制剂(C646)(HG+C646+1组)、5μmol/L的C646(HG+C646+5组)、5μmol/L的P300/PCAF抑制剂藤黄酚(HG+Gar+5组)、25μmol/L的藤黄酚(HG+Gar+25组)处理。将NE-4C细胞分为转染对照siRNA组(Con-si组)、转染第1个Cbp的siRNA质粒(si-Cbp-1组)、转染第2个Cbp的siRNA质粒(si-Cbp-2组)、共转染第1及第2个Cbp的siRNA质粒(si-Cbp-1+2组)。雌鼠分为正常对照(NC)组(n=38)和STZ构建的TIDM组(n=54)。采用Western blot、RT-PCR、免疫荧光染色检检测。结果 HG组Cbp的mRNA表达和NE-4C细胞增殖能力较Con组升高(P<0.05或P<0.01)。HG+C646+5组组蛋白H4K5/8/12/16ac蛋白水平低于HG+DMSO、HG+C646+1组(P<0.05或P<0.01)。在4 h时,HG+C646+5组NE-4C细胞增殖能力低于HG组(P<0.05)。与Con-si组比较,si-Cbp-1、si-Cbp-2、si-Cbp-1+2组H4K5/8/12/16ac蛋白、Cbp mRNA水平降低(P<0.05)。与NC组比较,T1DM组Cbp的mRNA、组蛋白H4K5/8/12/16ac修饰水平升高(P<0.01)。结论高糖导致Cbp调控组蛋白H4乙酰化修饰异常和NE-4C细胞增殖可能是诱发NTDs的机制之一,Cbp抑制剂可改善组蛋白H4乙酰化水平和NE-4C细胞增殖。

乙酸胁迫条件下酿酒酵母全基因组启动子区组蛋白H4 K16乙酰化修饰分析

为探究酵母乙酸耐受性的表观遗传调控新机制,采用染色质免疫共沉淀-芯片(Chromatin immunoprecipitation-chip,ChIP-chip)技术,分析乙酸胁迫条件下酿酒酵母全基因组启动子区组蛋白H4 K16乙酰化修饰的变化。结果表明,酵母细胞经乙酸胁迫处理(60 mmol/L、30 min)后,与对照组(添加等体积无菌水)相比,73个酵母基因的启动子区域组蛋白H4 K16位点乙酰化修饰发生了改变,乙酰化修饰上升基因19个,主要分布在2、4、5、7、13、15、16号染色体上;乙酰化修饰下降基因54个,主要分布在1、2、4、5、6、7、8、10、11、12、13、14、15、16号染色体上。基因功能分析结果表明,按生物学过程分类乙酰化修饰改变基因主要富集在碱基切除修复、细胞骨架组装、细胞周期进程和含蛋白质的复合物组装;按细胞组分分类乙酰化修饰改变基因主要富集在液泡质子转运V-型ATP酶、DNA聚合酶复合体、质子转运双扇区ATP酶复合物/质子转运域、有丝分裂纺锤体和核染色体;按分子功能分类乙酰化修饰改变基因主要富集在单链DNA 3′—5′外脱氧核糖核酸酶活性、蛋白酶体结合、ATP酶活性/耦联离子跨膜运动。随机选取3个启动子区组蛋白H4 K16乙酰化修饰发生差异变化的基因(ATP12、VPS55、DLT1)进行染色质免疫沉淀-实时定量PCR检测,结果与ChIP-chip分析结果一致,验证了ChIP-chip试验的准确性。综上,酿酒酵母基因启动子区组蛋白H4 K16乙酰化修饰与乙酸耐受性密切相关。

参芪补肺汤对慢性阻塞性肺疾病肺气虚证大鼠气道平滑肌中乙酰化组蛋白H4、HDAC2和NF-μB p65表达的影响

目的观察参芪补肺汤对慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺气虚证大鼠支气管平滑肌(ASM)中乙酰化组蛋白H4、组蛋白去乙酰化酶-2(HDAC2)和核因子-κB p65(NF-κB p65)表达的影响。方法取SD大鼠40只,随机分为正常组、模型组、参芪补肺汤组、氨茶碱组,每组10只。运用气管内注射脂多糖加烟熏28 d的方法建立COPD肺气虚证大鼠模型。光镜下观察肺组织的病理形态学变化,运用图像分析法测量小气道管壁和ASM的厚度,采用免疫组化和Western blot方法检测大鼠ASM中乙酰化组蛋白H4、HDAC2和NF-κB p65的蛋白表达,实时荧光定量PCR方法检测大鼠ASM组织中HDAC2 m RNA和NF-κB p65 m RNA的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠气道管壁和ASM厚度明显增高(P<0.05);与模型组比较,参芪补肺汤组和氨茶碱组气道管壁和ASM厚度明显降低(P<0.05);参芪补肺汤组与氨茶碱组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,模型组乙酰化组蛋白H4的蛋白表达、NF-κB p65 m RNA和蛋白的表达明显增高(P<0.05);HDAC2m RNA和蛋白的表达均明显降低(P<0.05);与模型组比较,参芪补肺汤组和氨茶碱组乙酰化组蛋白H4的蛋白表达、NF-κB p65 m RNA和蛋白的表达明显增高(P<0.05);HDAC2 m RNA和蛋白的表达明显降低(P<0.05)。参芪补肺汤组与氨茶碱组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论参芪补肺汤可抑制COPD肺气虚证模型大鼠ASM增殖,其机制与其提高HDAC2的表达,使组蛋白H4去乙酰化,从而抑制NF-κB p65的表达有关。

慢性哮喘小鼠肺组织中组蛋白乙酰化修饰位点H2BK16ac表达增强

目的探讨组蛋白乙酰化修饰位点H2BK16a在慢性哮喘模型小鼠肺组织中的表达变化。方法BALB/C小鼠分为正常组和慢性哮喘组,应用卵蛋白致敏和激发方法构建慢性哮喘模型,HE染色观察气道炎症浸润,AB-PAS染色观察气道杯状细胞增生,Masson染色观察上皮下胶原沉积,免疫组织化学染色观察H2BK16ac在肺组织中的表达分布,Western blot检测肺组织中H2BK16ac水平。结果慢性哮喘小鼠气道血管周围可见大量炎症细胞浸润、气道纤毛柱状上皮细胞中的杯状细胞增生、黏液腺化生、上皮下胶原沉积,表明构建慢性哮喘模型成功。免疫组织化学染色和Western blot检测显示,正常小鼠肺组织中H2BK16ac的表达极少;慢性哮喘小鼠肺组织中H2BK16ac的表达水平显著升高,在气道纤毛柱状上皮细胞、气道血管周围炎症细胞、血管平滑肌细胞、肺泡腔炎症细胞中H2BK16ac均呈明显阳性表达。结论肺组织中乙酰化修饰位点H2BK16ac的高表达可能与慢性哮喘的发生密切相关。

组蛋白H3、H4乙酰化及H3K4甲基化对人妊娠子宫平滑肌细胞PRA/PRB的影响

目的通过组蛋白去乙酰化酶抑制剂(trichostatin A,TSA)、H3K4甲基化酶抑制剂(5’-deoxy-5’-methylthioadenosine,MTA)处理人妊娠子宫平滑肌细胞,干预组蛋白H3、H4乙酰化及H3K4甲基化水平,探讨组蛋白H3、H4乙酰化及H3K4甲基化对人妊娠子宫平滑肌细胞PRA/PRB的影响。方法分离纯化人妊娠子宫平滑肌细胞(n=16),免疫组化定位孕激素受体(progesterone receptor,PR)及孕激素受体B(progesterone receptor B,PRB)在子宫平滑肌细胞核的表达。分别利用不同浓度TSA、MTA对其进行处理,Real-time PCR检测PR、PRA、PRB mRNA的表达;染色质免疫共沉淀技术(Chromatin immunoprecipitation,ChIP)比较处理前后PRA、PRB启动子区H3、H4乙酰化及H3K4三甲基化水平。结果TSA可使PRA/PRB明显增高(P<0.05),使PRA启动子区H3、H4乙酰化水平明显上升(P<0.05)。MTA可使PRA/PRB明显下降(P<0.05),PRA启动子区H3K4乙酰化水平明显下降(P<0.05)。两种药物的干预主要通过对PRA的调控来调节PRA/PRB比值。结论组蛋白H3、H4乙酰化和H3K4甲基化均可使人妊娠子宫平滑肌细胞PRA/PRB比值发生改变,可能参与"功能性孕激素撤退"机制的调节。

异烟肼致大鼠肝损伤使组蛋白H4低乙酰化

目的探讨组蛋白H4乙酰化表达水平与异烟肼致大鼠肝损伤的关系。方法成年SD大鼠ig给予异烟肼55 mg·kg^(-1),每天1次,连续3,7,10,14,21或28 d后处死。HE染色观察肝组织病理改变;比色法检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;Western蛋白印迹法检测肝组织组蛋白H4K5和H4K8乙酰化水平;ELISA法检测肝组织组蛋白乙酰化酶(HAT)和去乙酰化酶(HDAC)活性。结果与正常对照组相比,连续给异烟肼后肝组织中总SOD活性呈下降趋势,在28 d时最低(P<0.05);MDA含量于14 d后处于高水平状态(P<0.05);肝组织组蛋白H4K5和H4K8呈低乙酰化水平(P<0.05),至14 d时达到最低值(P<0.05)后略有升高。异烟肼处理3 d,即可见HAT活性显著降低(P<0.05),HDAC活性显著升高(P<0.05),至21 d时HAT和HDAC活性基本恢复至正常对照组水平。结论异烟肼引起大鼠肝组织中组蛋白H4K5和H4K8呈低乙酰化状态,提示组蛋白H4低乙酰化可能参与异烟肼致大鼠肝损伤。

组蛋白H4的共价修饰在表观遗传调控中的作用研究进展

表观遗传学主要从基因组修饰的角度来研究基因表达的调控机制，其中最具代表性的就是DNA甲基化。组蛋白H4的共价修饰包括甲基化、乙酰化及磷酸化，主要通过对其氨基末端残基的翻译后修饰对染色体结构和基因转录进行调控，在表观遗传调控中起着重要作用。如组蛋白H4-K16位的乙酰化的缺失和K20的三甲基化会导致人类癌症的发生[1]。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidin/SAHA体外抑制人卵巢浆液性囊腺癌细胞的实验研究

目的:卵巢恶性肿瘤是妇科三大恶性肿瘤之一,其死亡率居妇科恶性肿瘤第一位。目前手术是治疗卵巢恶性肿瘤的主要方法,且术后常辅以紫杉醇和铂类为主的化疗,但化疗常常由于肿瘤细胞发生耐药而导致化疗失败。因此对于卵巢癌的治疗迫切需要寻找新的突破。方法:是对体外培养人卵巢浆液性囊腺癌上皮细胞,取对数生长期细胞接种于96孔细胞培养板上,每组设6个复孔。采用全定量PCR方法检测p21基因mRNA含量的表达。结果:体外实验证实组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)能够诱导肿瘤细胞周期阻滞于G0/G1期和/或G2/M期,从而抑制肿瘤细胞的增殖率,具有很强的临床应用价值。结论:本次实验探讨不同浓度下的组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidin、SAHA在人卵巢浆液性囊腺癌细胞系的作用和机制,为巢浆液性癌的治疗提供新的思路。

组蛋白乙酰化调控异常与大鼠抑郁行为的关系研究

目的研究组蛋白乙酰化与慢性不可预见刺激(chronic unpredictable stress,CUS)致大鼠抑郁行为的关系。方法30只♂Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为对照组和模型组,采用孤养结合CUS方式连续刺激28 d建立大鼠抑郁症模型;以开场实验和强迫游泳实验评价大鼠抑郁行为;采用实时荧光定量PCR法检测大鼠前脑皮层和海马组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)mRNA表达;采用Western blot法检测大鼠前脑皮层和海马组蛋白H3(histone3,H3)、组蛋白H4(histone 4,H4)、乙酰化组蛋白H3(actylation-histone 3,ac H3)及乙酰化组蛋白H4(actylation-histone4,ac H4)蛋白表达水平。结果与对照组大鼠相比,模型组大鼠开场实验得分明显降低(P<0.01)、强迫游泳实验不动时间明显延长(P<0.01)、前脑皮层和海马HDAC2 mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.01)、组蛋白H3和组蛋白H4蛋白表达均无明显差异、ac H3及ac H4蛋白水平均明显降低(P<0.01)。结论 CUS诱导大鼠产生抑郁样行为改变,其机制可能与脑内HDAC表达增高致组蛋白乙酰化修饰水平降低有关。

组蛋白乙酰化水平对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的:观察人肝细胞株LO2及不同转移能力的肝癌细胞株Hep G2、MHCC-97L和LM3中组蛋白H3K9、H4K12及H4K16位点的乙酰化水平,并探讨组蛋白乙酰化对肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法:采用Western blot实验检测LO2、Hep G2、MHCC-97L和LM3中组蛋白H3K9、H4K12及H4K16乙酰化水平;应用组蛋白去乙酰化酶抑制剂伏立诺他(SAHA,1.5μmol/L和3μmol/L)处理肝癌LM3细胞株24 h、48 h后,Western blot检测其组蛋白H3K9、H4K12及H4K16乙酰化水平变化,transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力的变化。结果:H3K9、H4K12及H4K16乙酰化水平由高到低为Hep G2、MHCC-97L、LM3,3种肝癌细胞株的乙酰化水平均低于人肝细胞LO2(P<0.05);去乙酰化酶抑制剂SAHA作用后,LM3细胞组蛋白H3K9、H4K12及H4K16乙酰化水平明显提高,细胞的迁移、侵袭能力明显降低,与未用SAHA处理的LM3细胞比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:提高组蛋白H3K9、H4K12、H4K16位点的乙酰化水平,能抑制肝癌细胞的迁移、侵袭能力。

肝癌模型大鼠癌组织组蛋白乙酰化水平观察

目的:观察肝癌模型大鼠癌组织中组蛋白H3K9、H4K12、H4K16位点的乙酰化水平。方法:50只大鼠随机分为模型组(40只)及对照组(10只),予模型组大鼠2.5 g/L二乙基亚硝胺(DEN)溶液自由饮用14周建立肝癌模型,对照组大鼠自由饮用灭菌食用水;造模结束后,取肝组织镜下观察,确认造模成功,采用免疫组织化学及Western blot检测肝癌组织中组蛋白H3K9、H4K12及H4K16乙酰化水平。结果:造模过程中模型组大鼠死亡20只,另20只大鼠肝组织肝小叶结构破坏,假小叶形成,在11个标本中可见肝癌细胞;免疫组织化学染色及Western Blot检测结果显示,模型大鼠肝癌组织组蛋白H3K9、H4K12及H4K16位点乙酰化水平均低于对照组大鼠肝组织(P<0.05)。结论:DEN诱导的肝癌模型大鼠肝癌组织组蛋白H3K9、H4K12及H4K16位点的乙酰化水平均明显降低,提示组蛋白H3K9、H4K12、H4K16位点的低乙酰化可能参与了肝癌的发生。

小鼠卵母细胞减数分裂期间组蛋白乙酰化及其对卵母细胞成熟质量的影响

为了解卵母细胞减数分裂期间组蛋白乙酰化规律,以组蛋白H4K12的乙酰化为标记,利用免疫荧光技术,研究了小鼠卵母细胞减数分裂期间组蛋白乙酰化的变化规律及其对卵母细胞成熟质量的影响。结果表明:小鼠生发泡期卵母细胞中组蛋白高度乙酰化,在第1及第2次减数分裂中期则发生去乙酰化;II型组蛋白去乙酰基酶(HDACs)负责调控减数分裂过程中的组蛋白乙酰化;减数分裂过程中存在组蛋白乙酰化/去乙酰化的动态变化;特异性抑制II型HDACs不影响卵母细胞成熟、纺锤体形态和染色体排列,但广谱性抑制HDACs后会导致卵母细胞染色体排列发生改变。

原发性肾病综合征患儿组蛋白乙酰化水平与激素反应差异性研究

目的探讨原发性肾病综合征(PNS)患儿糖皮质激素(GC)治疗前后外周血单个核细胞(PBMC)中组蛋白H3、H4乙酰化水平变化,研究其在GC反应差异性中的作用及可能机制。方法选取住院治疗的初发PNS患儿47例,按照患儿对GC治疗的反应分成两组:激素敏感型肾病综合征(SSNS)32例,激素耐药型肾病综合征(SRNS)15例;另选15例健康儿童作为正常对照组。分两个时间点采集外周血标本:(1)病初未用GC时;(2)足量GC治疗4周后。密度梯度离心法分离PBMC,免疫蛋白印迹(Western-blot)方法检测组蛋白H3、H4乙酰化水平。结果 (1)组蛋白H3乙酰化:GC治疗前,SSNS组及SRNS组组蛋白H3乙酰化水平高于正常对照组(P<0.01);GC治疗4周时,SSNS组及正常对照组组蛋白H3乙酰化水平低于SRNS组(P<0.01)。GC治疗4周时,SSNS组组蛋白H3乙酰化水平低于治疗前(P<0.01);SRNS组组蛋白H3乙酰化水平表达高于治疗前,但差异无统计学意义(P>0.05)。(2)组蛋白H4乙酰化:GC治疗前后,SRNS组组蛋白H4乙酰化水平高于SSNS组及正常对照组(P<0.01)。GC治疗4周时,SSNS组组蛋白H4乙酰化水平低于治疗前(P<0.01);SRNS组组蛋白H4乙酰化水平高于治疗前(P<0.01)。结论不同GC反应PNS患儿组蛋白H3、H4乙酰化水平有差异。GC对PNS患儿组蛋白H3、H4乙酰化水平有不同程度影响。PNS患儿组蛋白H3、H4乙酰化水平可能介导PNS患儿GC耐药,影响GC效应的发挥。

小鼠不同细胞间组蛋白修饰变化对MafA基因转录表达的影响

目的通过比较不同细胞类型之间MafA基因转录起始区的组蛋白修饰差异,探讨组蛋白修饰对MafA基因转录表达的作用。方法采用染色质免疫共沉淀-实时定量PCR法检测小鼠胰岛素瘤β细胞(NIT-1)、NIH小鼠成纤维细胞(NIH3T3)及小鼠胚胎干细胞(mES)三者中的MafA和MLH1基因转录起始区组蛋白修饰(H3K4m3、H3K9m3和H3乙酰化)的状况。同时采用实时定量RT-PCR检测上述三种细胞各基因mRNA表达水平。分析基因的H3K4m3、H3K9m3和H3乙酰化修饰与基因表达之间的相互关系。结果 (1)以mES细胞为参照,NIT-1细胞MafA基因的转录起始区的H3K4m3修饰水平明显增高(P<0.05),H3K9m3修饰水平明显降低(P<0.05);NIH 3T3细胞MafA基因的转录起始区的H3K9m3修饰水平明显增高(P<0.05),H3K4m3修饰水平明显降低(P<0.05);(2)MafA基因的仅在NIT-1细胞表达,其表达与H3K4m3修饰存在直线相关(相关系数0.995);与H3K9m3修饰存在直线负相关(相关系数-0.751);(3)管家基因MLH1的表达与所检测组蛋白修饰无相关性。结论 H3K9m3与H3K4m3修饰能相互协调,共同调控MafA基因的表达,对胚胎干细胞向β细胞分化具有重要的意义。

三阴性乳腺癌组织H3K4me3、H3K9ac表达与临床病理特征和预后的关系

目的探讨三阴性乳腺癌(TNBC)组织组蛋白H3第4位赖氨酸三甲基化(H3K4me3)、组蛋白H3第9位赖氨酸残基乙酰化(H3K9ac)表达与临床病理特征和预后的关系。方法选择TNBC患者145例,收集术中切除的TNBC组织,采用免疫组化法检测H3K4me3、H3K9ac和Ki-67表达,分析TNBC组织H3K4me3、H3K9ac表达与临床病理特征、Ki-67表达强度以及预后的关系。结果145例份TNBC组织中,H3K4me3高表达84例份、低表达61例份,H3K9ac高表达78例份、低表达67例份。TNBC组织H3K4me3、H3K9ac表达均与T分期、N分期和组织分化程度有关(P均<0.05),而与年龄、绝经状态、肿瘤直径、病理类型无关(P均>0.05)。随着Ki-67表达强度增加,TNBC组织H3K4me3、H3K9ac阳性表达逐渐增多(P均<0.05)。TNBC组织H3K4me3高表达者与低表达者3年累积生存率分别为60.7%、78.7%,H3K9ac高表达者与低表达者3年累积生存率分别为58.3%、82.0%,TNBC组织H3K4me3、H3K9ac高表达者3年累积生存率均显著低于其低表达者(P均<0.05)。结论TNBC组织H3K4me3、H3K9ac高表达,其高表达与肿瘤侵袭、转移以及患者预后不良密切相关。

前列腺癌中巴豆酰化修饰的测定及与肿瘤分期和分级的相关性

目的·初步探讨巴豆酰化修饰是否可以作为前列腺癌诊断的肿瘤标志物及其与前列腺癌分期和分级的相关性。方法·含有不同临床分期、分级的前列腺癌组织芯片73例,正常前列腺组织7例,利用免疫组织化学技术分别检测各样本中巴豆酰化修饰和组蛋白H4乙酰化修饰水平(H-Score评分),并进行组间比较和相关性分析。结果·巴豆酰化修饰水平在前列腺癌组织中较低,与正常前列腺组织比较,差异有统计学意义(P=0.001);而组蛋白H4乙酰化修饰水平组间比较差异无统计学意义(P=0.704)。不同临床分期、分级的前列腺癌组间比较,巴豆酰化修饰和组蛋白H4乙酰化修饰水平差异均无统计学意义(P>0.05)。H4乙酰化修饰与前列腺癌的分期、分级无相关性(P>0.05);巴豆酰化修饰与前列腺癌的分期无相关性(P=0.887),与前列腺癌分级呈正相关(r=0.493,P=0.000)。结论·相比较组蛋白H4乙酰化修饰,巴豆酰化修饰可以作为一种更好的诊断前列腺癌的肿瘤标志物。

姜黄素调节NB4细胞P53和组蛋白H3乙酰化抑制细胞增殖的研究

目的研究姜黄素对NB4细胞组蛋白H3和非组蛋白P53的乙酰化和细胞增殖的作用,探讨姜黄素抗白血病机制。方法应用不同浓度(50,25,12.5,6.25,3.125μmol/L)的姜黄素作用NB4细胞不同时间(0,4,8,12,24h),MTT法测定姜黄素对NB4细胞增殖的影响,Western blot法检测乙酰化组蛋白H3和乙酰化P53的水平。结果姜黄素以时间和剂量依赖方式抑制NB4细胞增殖,在24h和36h的IC50值分别为40μmol/L和25μmol/L;能明显上调组蛋白H3的乙酰化水平,促进P53的表达和P53的乙酰化。结论姜黄素具有去乙酰化酶抑制剂作用,能上调组蛋白H3乙酰化水平,促进肿瘤抑制因子P53表达和活化,抑制白血病细胞增殖。

曲古菌素A对胃癌细胞系BGC-823组蛋白H4乙酰化水平及细胞凋亡的作用

[目的]探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古菌素A(TSA)对胃癌细胞系BGC-823中组蛋白H4乙酰化水平及细胞凋亡的影响。[方法]免疫细胞化学法检测TSA干预前后胃癌细胞系BGC-823中乙酰化组蛋白H4的表达,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率。[结果]TSA干预后胃癌细胞系BGC-823中乙酰化组蛋白H4的表达水平明显升高,乙酰化组蛋白H4阳性细胞数从1.38±1.02上升至31.6±1.02,与未干预相比两者表达有显著性差异(P<0.01),流式细胞仪分析显示G2期细胞增多,从0.01%上升至19.17%,细胞凋亡率增加到29.9%。[结论]TSA可促进胃癌细胞系BGC-823中乙酰化组蛋白H4的表达,诱导BGC-823细胞凋亡。