抗组蛋白H_(2)A抗体间接ELISA法的建立和临床初步应用

目的建立检测血清抗H_(2)A抗体的间接ELISA技术,探讨抗H_(2)A抗体对类风湿关节炎(RA)的临床意义。方法RT-PCR扩增H_(2)A基因,将其克隆到原核表达载体pET28a,对重组质粒H_(2)A/pET28a进行原核表达,经Western blot检测后,利用H_(2)A重组蛋白建立检测人血清中抗H_(2)A抗体的间接ELISA方法。用建立的间接ELISA方法检测50例RA患者和50例健康人对照组血清抗H_(2)A抗体水平。结果表达的H_(2)A蛋白相对分子量约为15000,与预期大小相符,western blot结果表明组蛋白H_(2)A与抗H_(2)A抗体阳性血清具有良好的反应原性。经方法学评估,建立的ELISA法在特异性、可重复性方面均达到检测要求。RA组抗H_(2)A抗体水平高于健康人对照组(P<0.01)。当cut-off值设为0.494时,RA患者血清抗H_(2)A抗体的阳性率为84%(42/50),明显高于健康人对照组20%(10/50),差异具有统计学意义(χ^(2)=41.026,P<0.01)。结论成功建立了检测血清抗H_(2)A抗体的间接ELISA技术。RA患者血清中抗H_(2)A抗体水平明显高于健康人对照组。抗H_(2)A抗体在RA患者血清中出现可能具有重要的致病意义。